熱毒寧注射液對巨細胞病毒性心肌炎小鼠IFN—γ及IL—6含量的影響

摘要：目的 觀察熱毒寧注射液對病毒性心肌炎（VMC）小鼠血漿IFN-γ及IL-6含量的影響，探討熱毒寧注射液對病毒性心肌炎小鼠的抗炎保護作用。方法 40只雄性BALB/c小鼠隨機分為4組：空白組（A組）、模型組（B組）、更昔洛韋注射液組（C組）、熱毒寧注射液組（D組），每組10只。A組腹腔注射0.5ml生理鹽水，連續注射10天；B、C、D各組首先腹腔注射巨細胞病毒（CMV）懸液0.1ml，0.5min后分別注射生理鹽水、更昔洛韋注射液、熱毒寧注射液各0.4ml，連續治療10d；10d后采集血液，采用ELISA法檢測血漿IFN-γ及IL-6含量。結果 與B組相比，C、D組小鼠的IFN-γ含量顯著升高，IL-6含量明顯降低（P<0.05），但C、D組相比無明顯差別。結論 熱毒寧注射液具有抗炎作用，對治療病毒性心肌炎小鼠具有一定的療效。

關鍵詞：病毒性心肌炎；熱毒寧注射液；IFN-γ；IL-6；小鼠

心肌炎主要是由病毒感染、化學物質損傷或自身免疫引起的心肌局灶性或彌漫性炎性病變。心內膜穿刺的病理檢查結果表明，大約60%心肌炎患者的心肌細胞病毒檢測為陽性[1]，這種因病毒感染心肌細胞而引起的心肌炎稱為病毒性心肌炎。大約有20%病毒性心肌炎患者逐漸演變為擴張型心肌病，其致殘致死率高[2]。能引發心肌炎的病毒較多，其中以柯薩奇病毒感染最為常見，CMV也是侵犯心肌的重要病毒之一。近年來，病毒性心肌炎患者發病率逐年上升，但具有明確療效的治療藥物卻為數不多。本課題研究了熱毒寧注射液對巨細胞病毒性心肌炎小鼠的抗炎保護作用。

1資料與方法

1.1實驗病毒、動物 巨細胞病毒由徐州醫學院附屬醫院急診實驗室保存，40只6～8周齡雄性BALB/c健康小鼠，體重25g左右，購自徐州醫學院實驗動物中心。

1.2實驗試劑、藥物 IFN-γ及IL-6測定試劑盒均購自南京建成生物工程研究所，更昔洛韋注射液購自湖北科益藥業有限公司，熱毒寧注射液由連云港康緣藥業有限公司生產。

1.3動物分組、取材 將40只6周齡雄性BALB/c健康小鼠隨機分為4組：空白組（A組）、模型組（B組）、更昔洛韋注射液組（C組）、熱毒寧注射液組（D組），每組10只。A組腹腔注射0.5ml生理鹽水，連續注射10d；B、C、D各組首先腹腔注射10-4LogTCID50CMV懸液0.1ml[3]，0.5min后分別注射生理鹽水、更昔洛韋注射液、熱毒寧注射液各0.4ml，連續治療10d； 10d后眼球摘除取血法采集血液約1.0ml，離心后，-20℃冰箱中保存，以檢測IFN-γ及IL-6含量。

1.4 血漿IFN-γ及IL-6含量檢測 按照IFN-γ及IL-6試劑盒說明書步驟進行操作，檢測IFN-γ及IL-6含量。

1.5 統計學處理 計量資料以均數±標準差（x±s）表示，采用SPSS13.0軟件處理數據。多組定量資料間的比較進行方差齊性檢驗，若方差齊采用單因素方差分析，若方差不齊采用Dunnett’s T3（3）檢驗。單因素方差分析中的兩兩比較采用SNK法檢驗，檢驗水準為α=0.05，P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

與模型組相比，熱毒寧組、更昔洛韋組IFN-γ含量顯著升高，IL-6含量明顯降低（P<0.05），但熱毒寧組與更昔洛韋組相比較無統計學意義（P<0.05）。見表1。

表1 血漿IFN-γ及IL-6的濃度，以均數標準差表示（pg/ml，x±s，n=10）

組別 IL-6 IFN-γ

A385.5±124.11567.2±121.6

B809.3±129.61016.8±112.5

C623.3±152.1b1276.8±175.3b

D615±112.4b1312±180.1b

注：與B組比較，bp<0.05。

3 討論

心肌炎是一種彌漫性或局限性的心肌炎性病變，其詳細發病機制尚不清楚，可能與病毒本身對心肌的直接損傷及其引起的免疫反應有關[4]，目前缺乏特效的病毒根治方法。熱毒寧注射液是復方中草藥注射劑，有效成分為青蒿、金銀花、梔子，具有解熱、抗病毒、抗細菌、增加免疫等藥理作用。現代藥理學研究表明，青蒿含倍半萜內酯、黃酮類、青蒿酮，具有抗病毒、解熱、抗炎、抗氧化、鎮痛等作用，同時還具有免疫抑制和細胞免疫促進作用。

IL-6是一種多效型細胞因子，可調節多種組織細胞的生長與分化[5]，不僅在機體的免疫反應、防御機能及造血調控中起重要作用，而且與臨床諸多疾病的病理變化密切相關。在病毒感染的急性期，特別是病毒血癥期，由于病毒成分的刺激和誘導，造成單核巨噬細胞為主的免疫活性細胞產生大量IL-6，并釋放到血循環中，致血漿中IL-6含量顯著升高[6]。IFN-γ由CD8+T細胞和某些CD4+T細胞產生，NK細胞亦可合成少量的IFN-γ[7]；這些細胞只有在免疫應答中受到抗原或絲裂原活化后才能分泌IFN-γ，IFN-γ不僅能調節IL-6的產生，還能與其相互協同。本研究結果顯示，熱毒寧注射液組小鼠IFN-γ含量升高，IL-6含量降低，但與更昔洛韋組無明顯差別，表明熱毒寧注射液具有抗炎作用，其可使病毒性心肌炎小鼠的IFN-γ含量升高，IL-6含量降低，抑制炎癥反應。為臨床熱毒寧注射液治療病毒性心肌炎提供了實驗依據，但熱毒寧注射液治療病毒性心肌炎的具體作用靶點尚有待于進一步研究。

參考文獻：

[1]Luo H ， Wong J ， Wong B .Protein degradation systems in viral myocarditis leading to dilated cardiomyopathy [J].Cardiovascular Research， 2010， 85（2）： 347-356.

[2]Olimulder MA， Van Es J， Galjee MA.The importance of cardiac MRI as a diagnostic tool in viral myocarditis induced cardiomyopathy[J].Netherlands Heart Journal， 2009， 17（12）： 481-486.

[3]WangYX， Da Cunba V， MartinMcNuhy B. Inhibition of Rho-kinase by fasudil attenuated Angiotensin II induced cardiac hypertrophy in apolipoprotein E deficient mice[J].Eur J Pharmacol， 2005， 512（223）：215-222.

[4]Shauer A， Gotsman I， Keren A， et al. Acute？viral？myocarditis： current concepts in diagnosis and treatment[J].Isr Med Assoc J，2013， 15（3）： 180-185.

[5]Briso EM， Dienz O， Rincon M. Cutting Edge： Soluble IL-6R Is Produced by IL-6R Ectodomain Shedding in Activated CD4 T Cells[J].J Immunol，2008，180：7102-7106.

[6]Laure K.Case， Mohamad Moussawi， Brian Roberts. Histamine H1 receptor signaling regulates effector T cell responses and susceptibility to coxsackievirus B3-induced myocarditis[J]. Cell Immunol，2012，272（2）：269-274.

[7]Sylwester AW， Mitchell BL，Edgar JB，eta1. Broadly targeted human cytomegalovirus specific CD4+T and CD8+T cells dominate the memory compartments of exposed subjects[J].J ExpMed，2005， 202（5）：673-685.

編輯/馮焱