對比3種梅毒血清學(xué)方法篩查血液的有效性觀察

摘要：目的 探討梅毒血清學(xué)方法篩查血液的臨床效果。方法 選取我站2014年4月～8月無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本1500份，采用TPPA（梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)）、TP-ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)雙抗原夾心法）以及TRUST（甲苯胺紅不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)）這三種方法對所有血樣予以平行檢測，將TPPA法結(jié)果作為主要確診標(biāo)準(zhǔn)，以探討TRUST與TP-ELISA的陽性率。結(jié)果 TPPA法檢測出6例陽性，TRUST法特異性為100.0%，TP-ELISA為99.80%，對比差異不明顯，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；TRUST法靈敏度為27.41%，TP-ELISA為100.0%，對比差異明顯，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 TRUST法有較高漏檢率，且靈敏度低，不適合篩查獻(xiàn)血者血液；TPPA法則在確證梅毒陽性標(biāo)本中比較適用；TP-ELISA法有優(yōu)良特異性與高靈敏度，在批量較大樣本中使用具有自動化檢測與集中化優(yōu)點(diǎn)，可用于篩查獻(xiàn)血者血液，但在獻(xiàn)血者召回中只能做為參考方法。

關(guān)鍵詞：梅毒血清學(xué)；血液；TP-ELISA；TRUST；TPPA

梅毒屬于性傳播疾病，其主要誘因?yàn)槊范韭菪w感染。梅毒主要傳播方式為血液傳播與性傳播，且病情具有時(shí)顯時(shí)隱特征，可對全身各個器官或者組織進(jìn)行侵犯，亦可在胎盤傳播下導(dǎo)致胎傳梅毒[1]。對梅毒蔓延予以有效控制的關(guān)鍵在于快速且精準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室檢查，因此在對梅毒螺旋體予以檢測時(shí)一定要選用最科學(xué)的方法，作為采供血機(jī)構(gòu)，既要保護(hù)獻(xiàn)血者，又要保證獻(xiàn)血安全。當(dāng)前發(fā)現(xiàn)并診斷梅毒最主要的方法為血清學(xué)檢測，且方法較多，各有優(yōu)劣。本文為探討TPPA、TP-ELISA以及TRUST檢測梅毒螺旋體的效果，選取我站無償獻(xiàn)血者標(biāo)本1500份，回顧性分析其資料，將詳細(xì)情況報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1一般資料 選取我站2014年4月～8月無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本1500份，所有獻(xiàn)血者在獻(xiàn)血前均接受體格檢查，按照《獻(xiàn)血者健康要求》判定為合格。

1.2檢測方法 采用TPPA、TP-ELISA以及TRUST這三種方法對所有血樣予以平衡檢測，將TPPA法結(jié)果作為主要確診標(biāo)準(zhǔn)，以探討TRUST與TP-ELISA的陽性率。雙孔復(fù)查TPPA法陽性樣本，若結(jié)果仍為陽性則代表梅毒陽性。

1.2.1TRUST主要用于性病研究實(shí)驗(yàn)室開展，將抗原在有特制甲苯胺紅溶液中重懸后制作，試驗(yàn)于特制白色卡片上，以對血漿或者血清進(jìn)行檢驗(yàn)。先使用生理鹽水對血清進(jìn)行倍比稀釋，再開展定量試驗(yàn)，用專用針頭與滴管分別對TRUST試劑予以滴加，加入血清后搖動，速度為100轉(zhuǎn)/min，持續(xù)8min后對結(jié)果予以觀察，試驗(yàn)條件主要為23～29℃。

1.2.2 TPPA試驗(yàn)載體主要為生物紅細(xì)胞，對TP粉碎物予以吸附后對血清中抗體進(jìn)行抗原檢測，且在人工載體明膠顆粒上對存在于致病性梅毒（純化）中的精致菌株成分進(jìn)行包被，降低生物學(xué)假陽性率，存在非特異性凝集現(xiàn)象但是出現(xiàn)率極低。

1.2.3 TP-ELISA主要制成試劑包括混合酶標(biāo)記基因工程抗原、包被于梅毒螺旋體基因工程混合抗原的微孔反應(yīng)板以及其他試劑，主要使用雙抗原夾心法檢測。在實(shí)驗(yàn)中均需設(shè)置陰陽性對照組孔（各3個）與空白對照組孔（1個），添加樣本后孵育于37℃條件下，60min后洗板加酶，30min后再將底物添加進(jìn)去以顯色，主要使用的酶標(biāo)儀為SUNRISE 450/630nm，空白置零后對各個孔吸光度值予以讀取。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用軟件SPSS21.0對所有數(shù)據(jù)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，若P<0.05代表差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

TPPA、TP-ELISA以及TRUST梅毒血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果對比：1500份樣本采用上述3種方式檢測后有1例同時(shí)陽性，TPPA、TP-ELISA兩種檢測法6例同時(shí)陽性，TPPA以及TRUST1例同時(shí)陽性，TP-ELISA單種檢測法陽性例數(shù)為3例，見表1。

3討論

梅毒螺旋體主要于人體脊液或者血液中存在，不會生長繁殖于人工培養(yǎng)基上[2]。梅毒有先天性與后天性之分，先天性主要是胎兒被母體傳播或者被血液感染，后天性感染方式主要為性傳播。機(jī)體遭受梅毒病毒感染后3～6w檢查患者血清會發(fā)現(xiàn)有兩種抗體存在，其一為非螺旋體抗原抗體，其二為螺旋體抗原抗體。梅毒特異性抗體具有很早出現(xiàn)與很遲消失的特點(diǎn)，就算患者接受了正規(guī)抗梅毒療法，再行血清檢測時(shí)還是可將特異性抗體檢測出來，有些甚至具有終身性。在對梅毒螺旋抗體感染進(jìn)行診斷時(shí)主要依據(jù)為抗-TP，臨床檢測梅毒病毒主要采用血清學(xué)試驗(yàn)，包括TPPA、TP-ELISA、TRUST以及化學(xué)發(fā)光免疫分析法等。

據(jù)臨床研究證實(shí)[3，4]，在梅毒螺旋體中其表面抗原分類較多，分類依據(jù)主要為相對分子質(zhì)量，包括TP47、TmpA等。TP-ELISA法主要是對人工合成基因重組抗原進(jìn)行利用再在反應(yīng)板上包被，對特異性抗體IgM與IgG予以檢測。在本研究中TRUST與TP-ELISA靈敏度為27.41%、100.0%，對比差異明顯（P<0.05）。且TP-ELISA具備操作簡易、可自動化檢測、可靠性與客觀度高、可保存歸檔原始資料等優(yōu)點(diǎn)，故而適用于篩查無償獻(xiàn)血血液標(biāo)本。由于該法抗原為重組故而可能會導(dǎo)致假陽性序列，本研究有3例假陽性。為防止假陽性導(dǎo)致獻(xiàn)血者產(chǎn)生精神壓力或者引發(fā)家庭糾紛，只要是標(biāo)本用TP-ELISA法檢測后結(jié)果為陽性，均需使用TPPA驗(yàn)證。

TRUST法主要對梅毒感染機(jī)體予以檢測后，組織被螺旋體破壞后會將心磷脂這一抗原物質(zhì)釋放出來[5]，其會刺激機(jī)體出現(xiàn)反應(yīng)素，其性質(zhì)為抗體，且為非特異性，受到自身免疫疾病或傳染病影響會產(chǎn)生假陽性。機(jī)體感染梅毒后特異性抗體比非特異性抗體早出現(xiàn)，而接受治療后又會轉(zhuǎn)陰，故而假陰性現(xiàn)象也存在。TRUST法檢測出1例陽性，不存在假陽性現(xiàn)象，原因在于獻(xiàn)血者已接受體格檢查，排除紅斑狼瘡且類風(fēng)濕患者，但是漏檢率高。

TPPA法抗原主要為純化梅毒螺旋體，再對特異性抗體進(jìn)行檢測，有較高的特異性與敏感度。但是由于該檢測法為手工操作，吸液次數(shù)較多，若在大批量標(biāo)本中使用會增加出錯幾率，因此該法在篩查無償獻(xiàn)血大批量血液樣本中不具有適用性。

綜上所述，TRUST法有較高漏檢率，且靈敏度低，不適合篩查獻(xiàn)血者血液；TPPA法則在確證梅毒陽性標(biāo)本中比較適用；TP-ELISA法有優(yōu)良特異性與高靈敏度，在批量較大樣本中使用具有自動化檢測與集中化優(yōu)點(diǎn)，可用于篩查獻(xiàn)血者血液。

參考文獻(xiàn)：

[1]顧偉鳴，楊陽，吳磊，等.梅毒血清學(xué)試劑性能評估方案的優(yōu)化及應(yīng)用[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2014，18（11）：1169-1174.

[2]楊安芳.梅毒血清學(xué)檢驗(yàn)中不同方法檢定結(jié)果的觀察分析[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)刊，2014，12（1）：169-169，171.

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[4]鐘娜，張麗芬，陸玉珠，等.272例梅毒孕婦所生新生兒梅毒血清學(xué)檢測分析[J].中國麻風(fēng)皮膚病雜志，2013，29（8）：544.

[5]韓雪，李紅，曹守勤，等.3種梅毒血清學(xué)檢測方法的對比分析[J].寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，36（10）：1135-1137.編輯/申磊