早期自然流產與人類微小病毒B19關系的研究

摘要：目的 通過分析自然流產組和正常妊娠組孕婦人微小病毒B19（B19V）的感染狀況，探討B19V感染與人類自然流產之間的關系。方法 自然流產和正常妊娠的孕婦血清各50份，應用聚合酶鏈反應（PCR）方法檢測B19V。結果 自然流產組和正常妊娠組的B19V檢出率分別為12%和2%，兩組PCR- B19V結果的差別具有極顯著性（χ2檢驗，P<0.01）。結論 自然流產孕婦血清B19V的檢出率顯著性高于正常妊娠組，提示B19V感染可能是導致人類自然流產的重要原因之一。

關鍵詞：自然流產；人類微小病毒B19

人微小病毒B19（human parvovirus B19，B19V）是微小病毒屬中目前已知的唯一致人類疾病的病毒，在世界范圍內均有分布，具有極其廣泛的疾病譜，人類感染后多數呈亞臨床感染，這種感染具有自限性。研究發現，雖然孕婦感染該病毒癥狀通常不典型或無癥狀，但胎兒不成熟的免疫系統可導致其易感性。婦女在懷孕后一旦被B19V感染，能引起自然流產，多發生于妊娠初期；而在妊娠中期，會引發胎兒死亡或非免疫性胎兒水腫；在妊娠晚期，往往會發生早產或死產，出生后的新生兒預后也不樂觀[1，2]。本文中筆者對自然流產組和正常妊娠組孕婦人微小病毒B19（B19V）的感染狀況進行了對比分析，來探討B19V感染與人類自然流產之間的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集在湖北省婦幼保健院自然流產（含難免流產、不全流產、過期流產）孕婦50例，以EDTA抗凝管采血2ml，-20℃保存。以同期妊娠順利，無不良妊娠結局及妊娠合并癥、并發癥的孕婦50例作為對照。病例組與對照組在年齡構成、身體條件及檢測時間分布上的差異無統計學意義，兩組研究對象具有較好的可比性。

1.2標本處理 進行PCR擴增前，每份標本取200μl血清加入100μl含有蛋白酶K的裂解液（蛋白酶K終濃度為200μg/ml）中。混勻后置56℃消化3h，然后95℃10min滅活蛋白酶K，混合液經14000r/min，離心15min，轉移上清液，取5μl上清液作為PCR反應模板。

1.3 B19V檢測 PCR-B19V商品試劑盒購自奧特生物工程公司（武漢），反應體系為30μl，PCR擴增程序為：預變性 94℃，45s，反應條件94℃、45s-55℃、45s-72℃、60s，循環35次，72℃終延伸300s，擴增產物經2%瓊脂糖凝膠電泳、溟化乙啶染色、紫外檢測等步驟，以出現與陽性對照齊同的電泳亮帶判為B19V陽性結果。各項PCR操作，詳按各試劑盒說明書進行。

1.4統計學方法 用四格表χ2檢驗。

2 結果

自然流產組孕婦血清中B19VDNA陽性6例，，檢出率為12%，對照組孕婦血清中B19VDNA陽性1例，檢出率為2%。經χ2檢驗，二者有顯著性差異（P<0.01）。

3 討論

人類微小病毒B19（B19V）是迄今為止研究發現的最小的一種DNA病毒，B19V病毒在全球范圍內均有可能發生感染，感染患者會出現斑疹、關節腫痛、肌肉酸痛、頭痛及發熱等輕微的癥狀，有的感染患者不表現出臨床癥狀。患者感染B19V后細胞核內出現包涵體，同時出現特征性染色質著邊，電子顯微鏡觀察還會發現細胞核及細胞質顯著變性，病毒顆粒出現在包涵體中[3]。感染B19V能誘發多種病癥，孕婦一旦感染B19V，能誘發流產、早產，胎兒畸形、非免疫性胎兒水腫，甚者會發生死胎。被B19V感染的孕婦，約1/3都是通過母胎垂直感染而導致并發病癥，一般都會產生自然流產、非免疫性胎兒水腫或胎兒不發育等異常妊娠，小部分感染孕婦發生自限性感染或分娩后出現亞臨床型感染，大多數孕婦仍能夠娩出正常的嬰兒。

目前，診斷B19V感染一般是通過組織學檢測、血清學檢測及分子生物學檢測三種方法[4]，組織學檢測方法是觀測感染B19V后所造成組織細胞有何變化，多用于非特異性病毒感染診斷；血清學檢測是酶聯免疫吸附試驗（ELISA），該試驗被廣泛應用，但B19V具有紅細胞嗜性，不能通過傳統的細胞培養增殖，診斷B19V感染的抗原血清主要從患者血清中分離獲得，因此抗體檢測試劑盒費用昂貴； 抗原DNA或mRNA的檢測成為診斷B19V感染的主要方法，其優勢是靈敏、便捷、安全性高、特異性強。本文中筆者應用PCR技術對血清標本進行了B19V的檢測，結果兩組標本中均不同程度地檢測出了B19V，這表明PCR技術用于B19V感染的病原學診斷具有特異性及臨床應用價值。

感染B19V的孕婦中10%～15%的幾率會發生自然流產，且大部分患者為早期流產。引起流產的因素有多種，最常見的原因是遺傳基因缺陷，46%～54%的孕婦發生自然流產和胚胎異常的染色體有關[5-6]。還有內分泌失調、生殖器官形態異常、感染及免疫力低下等因素也是引起流產的重要因素。其中，感染因素被多數學著所關注，他們并對此進行了廣泛深入的研究。相關文獻顯示，在發生不明原因自然流產的試驗組中，B19V 的檢測陽性率為23.4%[7-8]，結果與本文報道的24%的檢出率相似，提示B19V感染可能是導致自然流產的一個重要因素。

總之，妊娠期B19V感染是引起自然流產、非免疫性胎兒水腫、胎死宮內、畸胎及新生兒預后不良的重要因素，有必要開展大樣本的流產病學調查來進一步研究B19V感染的自然疾病史及感染的影響因素，為臨床上預防、診斷及干預措施提供理論依據。

部分發達國家已將B19V列入了TORCH篩查的行列。我國對B19V系統的流行病學研究和臨床研究也已在部分地區開展。重視育齡婦女B19V的感染情況，對孕期、孕前B19V感染進行篩查，從而對B19V感染引起的不良妊娠結局進行預防、監測和治療，降低不良妊娠結局的發生率，實現優生優育，提高出生人口質量。

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編輯/哈濤