阿司匹林聯合左旋多巴對帕金森病小鼠的干預效果觀察

摘要：目的 探究阿司匹林聯合左旋多巴對帕金森小鼠的干預效果。方法 采用魚藤酮復制小鼠PD模型，實驗分為四組，依次為A組（魚藤酮+左旋多巴），B組（魚藤酮+阿司匹林+左旋多巴），C組（魚藤酮+生理鹽水），D組（不干預組）。進行行為學檢測，并統計TH免疫組化陽性神經元數量，SOD、MDA及IL-6的測試觀察聯合用藥效果。結果 A、B、C三組神經元明顯少于不干預組（P<0.05），但B組優于其他兩組；SOD和MDA含量顯示氧化應激水平升高（P<0.05）。結論 阿司匹林聯合左旋多巴對帕金森的干預有較好的效果，減少神經元的損傷，增強了抗氧化應激能力，對緩解疾病的進程有一定的效果。

關鍵詞：阿司匹林；左旋多巴；魚藤酮；帕金森病；氧化應激

帕金森?。≒arkinson’s disease ，PD）最主要的病理改變是通過氧化應激、免疫反應和鈣超載等機制導致中腦黑質多巴胺（dopamine， DA）能神經元的變性死亡、紋狀體DA含量顯著性減少以及黑質殘存神經元胞質內出現嗜酸性包涵體，即路易小體（Lewy body）[1～2]。此外，紋狀體中多巴胺和乙酰膽堿兩大系統的失調也參與PD的病理過程。因此臨床上帕金森病的藥物治療主要依賴多巴胺替代治療藥物和抗膽堿能藥物。左旋多巴在PD治療上應用較多，左旋多巴為多巴胺的前體，它能通過血腦屏障，在腦內經多巴脫羧酶的作用轉變為多巴胺，從而達到治療的目的。以單純左旋多巴治療，在治療過程中將不斷加大劑量，但無法控制病情進展，并且毒副作用也越來越大[3～4]

阿司匹林主要應用于心血管疾病，具有消炎、抗氧化作用，同時具有類向精神性作用和抗膽堿能的作用。研究表明， 在LPS誘導的原代中腦混合細胞炎癥模型中，阿司匹林對DA神經元能細胞有顯著的保護作用[5]。

本實驗主要通過研究阿司匹林聯合左旋多巴對帕金森病的干預治療。旨在提出新的藥物治療方法，以改善單純多巴胺替代藥物治療的不良反應，加強藥物治療的療效，為帕金森病的臨床治療提供理論依據和參考。

1資料與方法

1.1實驗動物 健康普通級雄性ICR小鼠40只，體重30～35g，由常州卡文斯動物公司提供。

1.2 實驗藥品與試劑 魚藤酮（美國sigma公司），植物油（西王玉米胚芽油），拜阿司匹林腸溶片（拜耳），美多芭（上海羅氏制藥有限公司），超氧化物歧化酶和脂質過氧化物丙二醇（南京建成生物工程研究所）

2 方法

2.1分組與模型制備 隨機將ICR小鼠分為三組，A組（魚藤酮+左旋多巴），B組（魚藤酮+阿司匹林+左旋多巴），C組（魚藤酮+生理鹽水），D（不干預組）共四組，每組10只，適應性飼養7d。魚藤酮PD模型制備：魚藤酮1mg/kg，皮下注射40d。行為學觀察確立模型建立。

2.2 實驗操作 A組灌胃左旋多巴15mg/kg，1d/次；B組灌胃左旋多巴15mg/kg，阿司匹林7.5mg/kg，1d/次；C組灌等量生理鹽水，D組為整體實驗對照組。

2.3行為學檢測 WMT-200水迷宮實驗：實驗前先將小鼠放于站臺上20S，后從不同象限放入水迷宮中，小鼠登上站臺后終止記錄最后將小鼠擦干放入鼠籠。依同樣的方法分別測量四組小鼠，以此評價其空間學習能力[6]。

2.4 TH免疫組化 于末次灌胃后，于次日斷頸處死后立即斷頭取腦，取出中腦黑質，將中腦黑質置入4%多聚甲醛中固定過夜，后經脫水、浸蠟、包埋、切片、烘片，然后經二甲苯脫蠟、梯度酒精脫水，按SP法進行TH免疫組化染色，DAB顯色，蘇木精復染，中性樹膠封片。每個組織塊中選取中腦黑質節段相應部位的3張切片，顯微鏡鏡下觀察并計數每張切片上可見的TH免疫陽性細胞。

2.5 SOD、MDA檢測 于末次灌胃后，于次日斷頸處死后立即斷頭取腦，剝離黑質區，用玻璃勻漿器制備勻漿，用生理鹽水制備10%的勻漿，5000r/min，離心5min，取上清液備測。

2.6統計方法 根據統計平均TH陽性神經元數量，采用均數±標準差表示，采用SPSS17.0統計軟件進行數據分析，P<0.05認為有統計學差異[7]。

3結果

3.1 小鼠行為學觀察 空白對照組小鼠活動自如，毛色光滑，無異常表現。PD模型組皮下注射魚藤酮第17d出現運動減少，行動遲緩癥狀，體重減輕，第24d后表現出震顫、探嗅、豎毛等癥狀。第40d后，對小鼠分組進行7d干預治療，左旋多巴組和左旋多巴聯合阿司匹林組的小鼠行為出現改善。

3.2 行為學檢測

2.3 TH免疫組化

2.4 SOD、MDA含量的變化

4討論

本實驗以魚藤酮制備帕金森小鼠模型，研究阿司匹林聯合左旋多巴對其干預治療的療效。研究發現，阿司匹林聯合左旋多巴對中腦黑質神經元有較好的保護作用，可降低SOD和提高MDA含量與活性，具有抗氧化的作用，效果優于單一用藥。

帕金森?。≒arkinson’s disease， PD）是繼阿茲海默癥（Alzheimer’s disease， AD）之后第二大神經病變疾病。它具有患病率高，病程長，進行性加重等特點，多見于老年人，65歲以上患病率高達1%～2%。有研究表明，我國65歲以上人群PD的患病率已高達1.7%，而且未來仍有持續增高的可能[8]。目前臨床上現多用左旋多巴單一治療，效果在早期較好，但隨著用藥時間的延長，其毒副作用也更加明顯，效果也隨著降低[9～10]。

本實驗是從氧化應激角度出發，利用阿司匹林抗氧化和抗膽堿能作用[11]，與左旋多巴聯合用于帕金森小鼠模型的治療。實驗結果表明，阿司匹林聯合左旋多巴對帕金森的治療效果較優于單一用藥，在一定程度上起到保護神經元的作用，可升高機體內SOD水平，降低MDA水平，達到抗氧化的作用。

參考文獻：

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[9]OliverFiehn.Metabolomics-the link between genotypes and phenotypes[J].Plant Molecular Biology，2002，48：155-171.

[10]German JB，Bauman DE，Burrin DG，et al.Metabolomics in the opening decade of the 21st century building the roads to individualized health[J].J Nutr ，2004，134（10）：12-14.

[11] 袁紅、梁立武、劉平等。氧化應激與帕金森病多巴胺神經元死亡[J].武警醫學.2007.

編輯/馮焱