局部注射丹參酮Ⅱ-A對兔正畸牙移動中破骨細胞的影響

局部注射丹參酮Ⅱ-A對兔正畸牙移動中破骨細胞的影響*

**通信作者 E-mail:zjm46688@126.com

網絡出版時間：2015-09-11網絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20150911.2247.010.html

楊夏晴， 張軍梅**， 王藪馨， 馮安琪， 莫朝倫

(貴州醫科大學附院 口腔科， 貴州 貴陽550004)

[摘要]目的： 觀察局部注射丹參酮Ⅱ-A對家兔正畸牙移動過程中牙周膜壓力側破骨細胞的影響。方法： 選取20只雄性健康大耳白兔復制雙側下頜第一磨牙近中移動模型，左側下頜第一磨牙近中牙齦黏膜下注射丹參酮Ⅱ-A磺酸鈉注射液0.36 mg/d，作為實驗組，對側同名牙位處注射等量生理鹽水作為對照組，于實驗第1、3、7、14及21天時處死兔，取下頜印模灌石膏模型并測量雙側下頜第一磨牙近中移動距離；取兔雙側下頜第一磨牙和周圍牙槽骨組織，行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色，光鏡下計數牙根中1/3壓力側牙周膜及牙槽骨表面破骨細胞數量。結果： 除實驗第1天外，實驗組其余各組兔牙移動距離大于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)；兩組兔牙周膜壓力側破骨細胞數量均有增加，實驗組破骨細胞數量明顯高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。結論： 牙移動過程中，適量丹參酮II-A可以有效的增加破骨細胞的數量，增強細胞活性，提高骨吸收強度，對加速正畸牙移動有一定的作用。

[關鍵詞]丹參酮； 兔； 正畸； 破骨細胞； 牙移動

[基金項目]*貴陽市科技局基金筑科合同(20151001)

[中圖分類號]R783.5

The Impact of Local Injection of Tanshinone II-A on

Osteoclast of Orthodontic Tooth of Rabbit

YANG Xiaqing， ZHANG Junmei， WANG Souxin， FENG Anqi， MO Chaolun

(DepartmentofStomatology,AffiliatedHispitalofGuizhouMedialUniversity，Guiyang550004,Guizhou,China)

Abstract[] Objective: To observe the effect of local inject tanshinone II-A on the osteoclast in the pressure side of periodontal membrane during orthodontic tooth movement. Methods: Twenty healthy and male rabbits were randomly divided into 5 groups (4 rabbits each group) to copy the bilateral mandibular first molar movement model. 0.36 mg/d tanshinone II A sulfonate was injected into the gingival mucosa of mesial surface of the left first molar once a day as experimental group while the same amount of normal saline was injected into the opposite molar of the same name as control group. The rabbits were killed at 1th, 3th, 7th, 14th, 21th day after injection. The distance of bilateral mandibular first molar mesial movement was measured by plaster cast. The periodontal slice of the mandibular first molar was taken and conducted by HE staining and tartrate resistant acid phosphatase staining. The osteoclasts in the pressure side of periodontal membrane were counted under the light microscope. Results: Except for the frist day, the tooth movement distance of experimental group were significantly higher than that of control group (P<0.05). Compared with control group, the number of osteoclasts significantly increased in experimental group (P<0.05). Conclusion: In the process of orthodontic tooth movement, tanshinone II-A can increase the number of osteoclasts, enhance cell activity and bone resorption intensity and improve the tooth movement.

[Key words] tanshinone II-A; rabbits; orthodontic; osteoclast; tooth movement

正畸治療是針對錯頜畸形進行有效的牙齒移動來改變牙齒的排列位置的一種臨床常規治療方式，其缺點是矯治過程較長，尤其是牙齒通過牙槽骨改建移動到新的位置耗時較久，一定程度上阻礙了患者接受治療。正畸醫師不斷嘗試各種安全、有效促進牙移動的方法來縮短正畸療程。相關研究已報道中藥丹參可以加速正畸牙移動，本實驗旨在觀察丹參的活性成分丹參酮Ⅱ-A在正畸牙移動過程中對牙周膜壓力側破骨細胞的影響，探討其是否能增加骨吸收強度，提高牙移動速度。

1材料與方法

1.1實驗材料與動物

抗酒石酸酸性磷酸酶染色試劑盒(南京建成生物工程研究所)，參酮Ⅱ-A磺酸鈉注射液(上海第一生化藥業有限公司，國藥批字號H310225588)。健康成年雄性大耳白兔20只，體重(2.5±0.2)kg，由貴陽醫學院實驗動物中心提供。

1.2方法

1.2.1正畸牙移動模型復制2%戊巴比妥鈉1 mL/kg經耳緣靜脈麻醉動物并固定，精確制取兔下頜牙印模，石膏灌模。牙科慢速手機噴灑蒸餾水，于雙側下頜第一磨牙及切牙近頸部同一水平磨0.3 mm深的固位溝，于下頜前牙與第一磨牙之間安裝鎳鈦拉簧，測量力值約80 g。下頜兩切牙用0.25 mm正畸結扎絲連扎后，牙釉質粘結劑輔助粘接加強固位。定期檢查矯治器情況，如有脫落及時補救[2]。每日1次于左側下頜第一磨牙近中牙齦黏膜下注射丹參酮Ⅱ-A磺酸鈉注射液0.36 mg/d作為實驗組[2]，對側同名牙位處注射等量生理鹽水作為對照組。實驗前適應性喂養1周，分別在實驗第1、3、7、14、21天時處死正畸牙移動模型兔，每次4只，共計20只。

1.2.3牙移動距離測量及破骨細胞計數用電子游標卡尺測量石膏模型上，雙側下頜第1磨牙近中面到下頜切牙遠中面的距離。測量由同一人進行，測量3次取平均值。下頜第一磨牙近中移動距離(mm)=牙移動前距離-牙移動后距離。

1.3統計學處理

2結果

2.1下頜第一磨牙移動距離

實驗第1天，實驗組及對照組牙齒移動無明顯變化，差異無統計學意義(P>0.05)，其余各時間點實驗組與對照組牙近中移動距離隨著時間的變化不斷增加，實驗組牙移動距離均大于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1　兩組大耳白兔下頜第一磨牙近中牙移動距離

2.2破骨細胞計數

第1天實驗組和對照組壓力側牙周膜及牙槽骨表面破骨細胞數量比較，差異無統計學意義(P>0.05)；實驗第3、7、14、21天兩組破骨細胞數目均有不同程度的增加，實驗第7天破骨細胞數量增加最明顯，細胞胞體增大，有2～4核，骨吸收陷窩大，對照組牙槽骨吸收不均勻，在牙根中1/3處破骨細胞數量與對照組比較，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2和圖1。

表2　兩組大耳白兔壓力側牙槽骨表面破骨細胞數

3討論

近年來，錯牙合畸形的發病率逐漸升高，越來越多的患者選擇正畸治療，但漫長的矯治過程一直是困擾患者及家屬的問題。長期佩戴矯治器影響了患者的顏面美觀、口腔衛生、咀嚼功能、生長發育等，矯治過程中部分患者也會因為這些原因產生負面情緒不愿積極配合治療，延長矯治時間。因此如何有效的縮短正畸治療的時間是正畸醫生和患者共同關注的問題。正畸力會打破牙齒周圍原有的穩態，通過牙周組織改建，實現牙齒移動。牙槽骨的改建是牙移動的生物學基礎之一，骨改建的速度影響了牙齒移動的速度。骨改建包括了增生和吸收兩個過程。破骨細胞是影響骨吸收過程中至關重要的因素之一，能促進破骨細胞生成、分化和成熟的因素可能會加速正畸牙齒的移動。

注：a為第7天實驗組，b為第7天對照組，c為第14天實驗組，d為第14天對照組；黑色箭頭處為破骨細胞 圖1　兩組家兔壓力側牙周膜內及牙槽骨根面破骨細胞(TRAP，×200) Fig.1　The staining of osteoclast of tartrate resistant acid phosphatase

丹參酮Ⅱ-A是中藥丹參的重要藥理成分之一，丹參酮ⅡA磺酸鈉注射液是丹參酮ⅡA經磺化形成的水溶性鈉鹽，藥效高且利于機體吸收，其藥理作用包括促進血管內皮細胞的增殖，修復損傷內皮細胞，抗凝血作用等[4-9]。破骨細胞分化成熟是其發揮骨吸收功能的前提，牙周膜中的破骨細胞一方面是由破骨細胞的前體細胞分化而來，在機械力作用下，可能需要48 h牙周膜內及牙槽骨表面才會出現成熟的破骨細胞，局部注射甲狀腺素能在幾個小時內誘導破骨細胞生成[6]；另一方面破骨細胞能通過血液循環從遠隔區域遷移到牙槽骨表面。張世英等[4]發現，丹參酮Ⅱ-A可因注射劑量的不同而影響破骨細胞的數量，研究表明牙周膜中骨保護素/破骨細胞分化因子比率分析結果：骨保護素/破骨細胞分化因子比率大于1，說明骨保護素相對過剩，破骨細胞的分化和激活受到抑制，促進骨形成；骨保護素/破骨細胞分化因子比率小于1，破骨細胞分化因子相對過剩，促進破骨細胞的分化和激活。當丹參酮IIA劑量為0.36 mg/d時比例接近于1，利于骨改建。牙移動過程中，受壓側牙周膜

內局部呈淤血狀態，丹參ⅡA可以改善牙周膜內血液循環，運輸營養及運走代謝廢物，減少破骨細胞代謝障礙促進破骨細胞分化成熟；另外，良好的血液循環能促進破骨細胞的遷移，不斷補充破骨細胞數量能增加牙槽骨吸收的進展速度和延長吸收的持續時間。本實驗結果提示丹參酮II-A能增加牙周膜壓力側破骨細胞的數目，增加骨吸收強度，提高牙齒移動的速度，對縮短正畸療程提供一定的實驗依據，具體機制有待進一步深入研究。

4參考文獻

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[2]黃艷，王旭霞，張君，張文娟.正畸牙移動實驗動物模型的建立[J].口腔醫學雜志， 2007(2):64-66.

[3] 張世英，劉繼光 ，趙剛.丹參酮II A局部注射正畸牙移動后復發階段破骨細胞分化因子的表達.中國組織工程研究， 2014(11)：1731-1736.

[4] 張新茹，王連菊，劉會嬌，等.丹參酮對急性心肌梗死患者血液動力學及血脂的影響[J].貴陽醫學院學報， 2014(3):379-382.

[5] 李玉萍，顧兵，劉建濤，等.丹參酮II-A的研究進展.時珍國醫國藥， 2012(7):1171-1172.

[6] 傅名魁，賈綺林，胡煒.當代口腔正畸學[M].第三版.北京：人民軍醫出版社， 2007：295-296.

[7] 包幸福.正畸牙移動中骨吸收機制及其調控的研究進展[J].國際口腔醫學雜志， 2012.

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[9] Yao Z, Xing L, Qin C, et al. Osteoclast precursor interaction with bone matrix induces osteoclast formation directly by an interleukin-1-mediated autocrine mechanism[J].The Journal of Biological Chemistry, 2008(15)：9917-9924.

(2015-05-07收稿，2015-08-10修回)

中文編輯： 文箐潁； 英文編輯： 劉華