規(guī)?；i場豬偽狂犬病毒野毒感染的血清學(xué)調(diào)查

（浙江博信藥業(yè)有限公司浙江湖州313307）

規(guī)?；i場豬偽狂犬病毒野毒感染的血清學(xué)調(diào)查

占永祥，姜禮輝

（浙江博信藥業(yè)有限公司浙江湖州313307）

本次實驗主要是為了更好地了解浙江周邊規(guī)模化豬場偽狂犬野毒感染的情況。本實驗采用豬偽狂犬病毒野毒抗體ELISA診斷方法，對浙江周邊5個規(guī)?；i場不同日齡段商品豬和公母豬的292份豬血清進行檢測分析。從檢測結(jié)果可知：現(xiàn)階段豬偽狂犬野毒感染情況比較嚴重，檢測結(jié)果是平均野毒陽性率為34.2%，其中5個場的野毒抗體最低為17.4%，最高為66.7%。

豬；偽狂犬；血清學(xué)；感染情況

豬偽狂犬?。≒seudorabies，PR）是由豬偽狂犬病毒（Pseudorabiesvirus，PRV）引起的一種高度接觸性傳染病。豬是該病的主要宿主和傳染源，健康豬與患豬、帶毒豬直接接觸可感染該病。母豬出現(xiàn)返情、屢配不孕，妊娠母豬流產(chǎn)，產(chǎn)木乃伊胎、死胎和產(chǎn)弱仔；初生仔豬帶毒感染率和死亡率可達100%；0～4周齡仔豬出現(xiàn)腹瀉及神經(jīng)癥狀，4～12周齡豬出現(xiàn)神經(jīng)癥狀或呼吸道疾病，12周齡至出欄育肥豬感染后多耐過，不發(fā)病呈隱性感染，呈現(xiàn)呼吸道疾病，對抗生素不敏感。造成長期帶毒、排毒，成為最危險的傳染源，表現(xiàn)為生長緩慢、飼料報酬降低，嚴重影響?zhàn)B豬生產(chǎn)。許多國家和地區(qū)都報道過該病的流行，隨著養(yǎng)豬業(yè)集約化規(guī)?；陌l(fā)展，全國大部分省市已經(jīng)呈現(xiàn)大面積的發(fā)病，并在許多豬場呈暴發(fā)流行趨勢，給我國養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。2014年12月-2015年3月筆者對浙江衢州、湖州5個規(guī)模場的豬血樣進行偽狂犬野毒調(diào)查，并提出相應(yīng)的防控措施，現(xiàn)報告如下：

1 材料與方法

1.1 調(diào)查對象

浙江衢州、湖州5個規(guī)?；B(yǎng)豬場的不同日齡段商品豬和公母豬的292份豬血清進行檢測分析。

1.2 血液采集

2人1組，1人保定，1人采血。酒精棉球消毒，用5 mL一次性注射器從被檢豬前腔靜脈采集豬全血2～3 mL,采集后成斜面置保溫箱中，帶回分離血清，立即檢測。

1.3 診斷試劑盒

中美合資某品牌公司生產(chǎn)的豬偽狂犬病病毒gpI抗體檢測試劑盒（批號：281440），包括已包被好抗原的96孔酶聯(lián)反應(yīng)板，標準陰、陽性血清對照，辣根過氧化物酶（HRPO），酶標抗體，TMB底物溶液、終止液、稀釋液、洗滌液等。

1.4 實驗儀器

酶聯(lián)免疫檢測儀、移液器（20～200 μL、200～1 000 μL）與移液器匹配的吸頭、恒溫箱、離心管、記號筆等。

1.5 實驗采用ELISA法

1）所有試劑盒在使用前一律恢復(fù)至18～26℃并使沉淀的鹽溶解。使用前濃縮液應(yīng)用蒸餾水進行10倍稀釋。

2）在2個適當孔內(nèi)分別加入100 μL 2倍稀釋（1∶2）的陰性對照。

3）在2個適當孔內(nèi)分別加入100 μL 2倍稀釋（1∶2）的陽性對照。

4）在其余的孔內(nèi)分別加入100 μL已稀釋好的被檢樣品。

5）用封板膜將反應(yīng)板封閉，在18～26℃條件下孵育60 min。

6）時間到后，甩掉孔中的溶液，用洗滌液洗板3～5次，300 μL/孔，最后一次拍干。

7）每孔加酶標抗體-辣根過氧化物酶100 μL，置18～26℃孵育20 min。

8）時間到后，甩掉孔中溶液，洗滌3～5次，最后一次拍干。

9）每孔加TMB底物100 μL，置18～26℃孵育15 min。

10）每孔加終止液50 μL，使反應(yīng)終止。

11）結(jié)果判定，在酶標儀上測各孔OD650值。通過計算樣品與陰性對照的比例（S/N）來確定偽狂犬野毒抗體的有無。陰性對照的平均值減去陽性平均值必須＞0.300，實驗方能有效。如果實驗無效操作可能有誤，試驗應(yīng)重做。

S/N=樣品OD650值/陰性對照平均OD650值，注：①S/N小于或等于0.60，樣品確定為陽性；②S/N＞0.7，樣品確定為陰性；③0.6＜S/N≤0.7，樣品應(yīng)重測。

2 檢測結(jié)果

各豬場不同日齡段商品豬和公母豬偽狂犬病毒野毒感染的檢測結(jié)果。

表1～3是衢州地區(qū)豬場，表4～5是湖州地區(qū)豬場，表6是整個結(jié)果陽性率統(tǒng)計。

表1 1場豬偽狂犬野毒感染的檢測結(jié)果（2014年12月11日）

表2 2場豬偽狂犬野毒感染的檢測結(jié)果（2014年12月18日）

表3 3場豬偽狂犬野毒感染的檢測結(jié)果（2015年1月21日）

表4 4場豬偽狂犬野毒感染的檢測結(jié)果（2015年2月10日）

表5 5場豬偽狂犬野毒感染的檢測結(jié)果（2015年3月24日）

表6 5個場豬偽狂犬病毒野毒感染的檢測結(jié)果統(tǒng)計表

3 實驗分析

本次實驗從表1～5可以看出偽狂犬帶毒發(fā)病現(xiàn)象還是比較嚴重。豬場野毒感染最高66.7%，最低17.4%。說明豬偽狂犬病野毒感染仍普遍存在，對養(yǎng)豬業(yè)帶來嚴重的經(jīng)濟損失。

4 防控措施

4.1 制定合理的免疫程序

初生仔豬在0～3日齡首次滴鼻免疫，越早越好，讓疫苗占位三叉神經(jīng)，起到保護作用，不受母源抗體干擾。每頭乳豬滴鼻1頭份，每鼻孔0.5頭份。然后在10周齡和14周齡進行第2次、第3次免疫、每頭肌注1頭份，后備種豬配種前免疫2次，間隔4周每頭肌注1頭份/次；經(jīng)產(chǎn)母豬、公豬每年免疫3～4次，每頭肌注1頭份/次。對表5檢測出1頭公豬野毒陽性，建議淘汰。對母豬胎齡較大并且?guī)в幸岸矩i只及時淘汰，并且對發(fā)病保育豬緊急接種偽狂犬疫苗。

4.2 定期免疫監(jiān)測

一是加強種豬和商品豬的偽狂犬病野毒抗體檢測，及時了解本場野毒感染情況，通過淘汰野毒抗體陽性種豬，為豬場凈化做準備條件。二是外引種豬和本場后備豬要適時檢測，保證是偽狂犬病野毒陰性豬才能進入種豬群。防止帶毒傳染。同時由于疫苗抗原含量、母源抗體高低、豬群健康狀況、生產(chǎn)管理情況。飼養(yǎng)管理條件不同，產(chǎn)生的免疫效果也不一樣，因此，要應(yīng)用gB-ELISA抗體檢測法對免疫抗體進行檢測，隨時檢測疫苗的免疫應(yīng)答反應(yīng)，確保豬群有足夠免疫力，并且要檢測其他病毒性疾病在該場的穩(wěn)定性（PRRSV），防止對偽狂犬疫苗的干擾。4.3建立嚴格的生物安全措施

①豬場實施嚴格管理，外來車輛不得進入生產(chǎn)區(qū)。對豬群實行全進全出的方案，為了更好的防控。各棟豬舍和各個生產(chǎn)區(qū)員工和用具相對獨立；②堅持開展滅鼠工作。鼠是偽狂犬病病毒的攜帶者，因此，消滅豬場的鼠類對控制該病具有重要意義；③嚴格執(zhí)行消毒制度，2次/d豬欄的打掃，每周定期對豬體、豬舍、用具、周圍環(huán)境等進行2次消毒和清理；豬場門口要設(shè)立消毒池，進出豬場的員工必須洗澡、更衣、換鞋、洗手和紫外線消毒，對裝飼料進生產(chǎn)區(qū)的車輛也要嚴格消毒；④禁止員工從外帶豬肉進入生產(chǎn)區(qū)；豬場內(nèi)不能飼養(yǎng)其他動物；⑤安排專門的員工對病死豬尸體及胎衣等進行無害化處理，糞尿進入沼氣池發(fā)酵處理，減少病原傳播。

4.4 飼養(yǎng)管理措施

①提高豬群飼養(yǎng)管理和保健預(yù)防，把好原料關(guān)，防止霉菌毒素侵入豬只，造成豬只抵抗力下降和霉菌毒素中毒引起的免疫抑制；②對豬舍“三度”（溫度、濕度、空氣新鮮度）加強控制，提高豬群自身抵抗力；③加強其他病毒性疾病的防控，防止其他疾病對豬偽狂犬病疫苗的免疫干擾作用，避免引起免疫失敗。■（編輯：趙曉松）

10.3969/j.issn.1008-4754.2015.05.028