新生兒化膿性腦膜炎腦脊液病原菌分布和耐藥性分析

白曉萌，楊 娟，劉翠青*

(1.河北省兒童醫院檢驗科，河北石家莊050031;2.河北省兒童醫院新生兒科，河北石家莊050031)

新生兒化膿性腦膜炎腦脊液病原菌分布和耐藥性分析

白曉萌1，楊 娟2，劉翠青2*

(1.河北省兒童醫院檢驗科，河北石家莊050031;2.河北省兒童醫院新生兒科，河北石家莊050031)

目的探討新生兒化膿性腦膜炎腦脊液病原菌分布、抗生素敏感和耐藥情況，為臨床診治提供實驗室依據。方法 對臨床診斷的28例化膿性腦膜炎患兒腦脊液細菌培養和耐藥性以及敏感性進行分析。結果28例化膿性腦膜炎患兒腦脊液病原菌分布:單菌株27例，雙菌株1例。其中革蘭陰性菌20株(68.96%)，革蘭陽性菌8株(27.59%)，白色念珠菌1株(3.45%)。革蘭陰性菌對氨芐西林、復方新諾明、哌拉西林的耐藥率達80.00%以上，對頭孢唑林、四環素、頭孢噻肟的耐藥率在60.00%以上。共檢出產超廣譜β-內酰胺酶菌8株，未檢出對美羅培南耐藥的革蘭陰性菌。革蘭陽性菌大部分對氨芐西林、復方新諾明、頭孢西丁、紅霉素耐藥，未檢出對萬古霉素耐藥的革蘭陽性菌。結論新生兒化膿性腦膜炎腦脊液病原菌以革蘭陰性菌為主，對多種抗生素耐藥。

腦膜炎;細菌感染;抗藥性

新生兒化膿性腦膜炎是新生兒期嚴重的感染性疾病，約25%新生兒敗血癥會并發化膿性腦膜炎［1］。近年來由于抗生素的廣泛應用，耐藥菌和難治性化膿性腦膜炎有逐年增高的趨勢。本研究對我院新生兒科近3年收治的28例化膿性腦膜炎患兒腦脊液細菌培養結果進行回顧性分析，了解菌群分布特點及細菌耐藥性，旨在為臨床治療合理使用抗生素提供實驗室依據。報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2011年5月—2013年12月在河北省兒童醫院診斷為化膿性腦膜炎的患兒28例，男性11例，女性17例，年齡5～28 d，平均14 d，全部患兒均抽取腦脊液經細菌培養陽性。進一步行藥敏試驗和耐藥性分析。

1.2 方法

1.2.1 實驗菌株 嚴格無菌操作后抽取腦脊液，離心后取沉渣進行分離培養，并用美國BD公司的BD PHOENIX100全自動微生物鑒定儀進行細菌鑒定及藥物敏感試驗。

1.2.2 質控菌株 采用質控菌株大腸埃希菌(ATCC25922)、金黃色葡萄球菌(ATCC25923)、綠膿假單胞菌(ATCC27853)，進行細菌鑒定和藥物敏感質量控制。

1.2.3 確證試驗 依據美國實驗室標準化委員會2004標準采用頭孢噻肟/克拉維酸和頭孢噻肟、頭孢他啶/克拉維酸和頭孢他啶2組藥物敏感紙片作為大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌產超廣譜β-內酰胺酶的確證試驗。

1.2.4 實驗用品 藥物敏感紙片由英國Oxoid公司提供，哥倫比亞血平板、巧克力平板由貝瑞特生物技術公司提供，M-H瓊脂由北京天壇生物技術公司生產。

2 結 果

2.1 新生兒腦脊液病原菌分布 共檢出28例腦脊液培養陽性標本，分離出病原菌29株，除1例分離出2種菌株(1種為屎腸球菌，1種為白色念球菌)外，其余27例均為單一菌種生長。包括革蘭陰性細菌20株(68.96%)，革蘭陽性細菌8株(27.59%)，真菌1株(3.45%)。見表1。

2.2 細菌耐藥情況及對抗生素的敏感性分析 革蘭陰性細菌中，大腸埃希菌對氨芐西林、復方新諾明、哌拉西林的耐藥率在80.00%以上，對阿莫西林/克拉維酸、頭孢唑林、四環素、頭孢噻肟的耐藥率在60.00%以上，對其他革蘭陰性細菌耐藥性較高的抗生素為阿莫西林/克拉維酸、氨芐西林、氨曲南、頭孢唑林、四環素、復方新諾明，未檢出對美羅培南耐藥的革蘭陰性細菌，共檢測出產超廣譜β-內酰胺酶菌(ESBLs)8株，ESBLs的檢出率為40.00%，其中大腸埃希菌7株，肺炎克雷伯菌1株。見表2。

革蘭陽性細菌中，大部分對氨芐西林、復方新諾明、頭孢西丁、紅霉素耐藥，未檢出對替考拉寧、萬古霉素耐藥的革蘭陽性細菌。見表3。

表1 28例新生兒化膿性腦膜炎腦脊液病原菌構成比Table1 Pathogen ratios in cerebrospinal fluid 28 cases of neonatal purulent meningitis

表2 腦脊液培養檢出革蘭陰性菌耐藥性分析Table 2 Drug resistance of gram negative bacteria in cerebrospinal fluid culture (菌株數，%)

表1 (續)

表3 腦脊液培養檢出革蘭陽性菌耐藥性分析Table 3 Drug resistance of gram positive bacteria in cerebrospinal fluid culture (菌株數，%)

2.3 預后與并發癥 28例患者住院治療時間27～85 d。治愈26例(92.85%)，病情危重、家屬放棄治療后死亡 2例(7.15%)。發生并發癥 8例(28.57%)，其中腦積水2例，硬膜下積液1例，聽力障礙2例，腦軟化2例，腦室膜炎1例。

3 討 論

新生兒化膿性腦膜炎臨床表現不典型，顱內壓增高出現晚，又常缺乏腦膜刺激征，早期診斷較困難。腦脊液檢查是診斷新生兒化膿性腦膜炎的金標準，也是指導應用抗生素并關系到預后的重要實驗室指標。國外多主張任何懷疑敗血癥的患兒應常規行腦脊液檢查;傳統觀點認為化膿性腦膜炎的病原菌與敗血癥一致，但近年來的研究結果并非完全如此［2］，有些腦膜炎可以無敗血癥。由于大部分患兒在進行腰椎穿刺之前已經應用了抗生素，故腦脊液中細菌培養的陽性率較低。雖然研究提示降鈣素原和C反應蛋白對敗血癥早期診斷有一定價值［3］，但是腦脊液細菌培養陽性結果有助于確診，其藥物敏感分析結果有助于指導臨床合理應用抗生素。

本研究結果顯示，革蘭陰性菌占68.96%，而其中居首位的為大腸埃希菌;革蘭陽性菌為27.59%，其中居首位的為溶血性葡萄球菌、屎腸球菌;檢出真菌1株，為白色念球菌。表明革蘭陰性菌是我院新生兒化膿性腦膜炎的主要致病菌。本研究中所檢出1例白色念珠菌患兒應用有創呼吸機8 d，系極低出生體質量兒(出生體質量1 050 g)，臨床考慮為院內感染。各個國家和地區病原菌分布不同，西方國家以B族鏈球菌為主，而亞洲新生兒感染以革蘭陰性桿菌為主［4-5］。賴源等［6］報道新生兒化膿性腦膜炎的菌種構成以革蘭陽性球菌為主，但革蘭陰性桿菌有上升的趨勢，且新生兒化膿性腦膜炎病原菌主要是表皮葡萄球菌、大腸埃希菌、溶血性葡萄球菌、不動桿菌屬等。我們認為原因主要是由于患兒感染的時間、經濟生活環境和免疫力的不同，導致病原菌分布、耐藥性和臨床結局也不同。尤其近年來由于嬰兒暖箱中的用水、霧化器、呼吸機及管路、有創性治療等污染造成的院內感染的增多，增加了危重兒尤其是早產兒患化膿性腦膜炎的風險［7］。

本研究結果顯示，常見致病菌大腸埃希菌對氨芐西林、復方新諾明、哌拉西林的耐藥率在80.00%以上，對頭孢唑林、四環素、頭孢噻肟的耐藥率也在60.00%以上，未檢出對美羅培南耐藥的革蘭陰性細菌。有研究［8］結果顯示，引起腦膜炎的大腸埃希菌70%～85%具有K1抗原，其對吞噬作用具有抵抗力，腦脊液中K1抗原的量及持續時間與化膿性腦膜炎的輕重、預后、病死率和后遺癥均直接相關。這也證明大腸埃希菌等革蘭陰性桿菌不僅耐藥性高，且難以肅清［9］。本研究結果顯示，革蘭陽性細菌中，常見致病菌均對氨芐西林、復方新諾明、頭孢西丁、紅霉素耐藥，未檢出對替考拉寧、萬古霉素耐藥的革蘭陽性細菌。耐藥菌株的不斷擴大，是近年來難治性化膿性腦膜炎增多的主要原因之一［10］，不僅增加了化膿性腦膜炎的治療難度和經濟負擔，也增加了并發癥和病死率。因此，嚴格掌握抗菌藥物的使用指證和合理規范應用抗生素是降低細菌耐藥率應長期堅持的原則［11］。

綜上所述，我院新生兒化膿性腦膜炎腦脊液培養以革蘭陰性菌為主，培養結果耐藥率高，且存在多重耐藥，根據腦脊液培養及藥物敏感結果對患兒早期診斷并進行及時有效的治療，合理應用抗菌藥物，才能有效減少不良預后及病死率。

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(本文編輯:趙麗潔)

Pathogens and drug resistance analysis of cerebrospinal fluid in neonatal purulent meningitis

BAI Xiao-meng1，YANG Juan2，LIU Cui-qing2*
( 1． Department of Laboratory，the Children's Hospital of Hebei Province，Shijiazhuang 050031，China; 2． Department of Neonatology，the Children's Hospital of Hebei Province，Shijiazhuang 050031，China)

Objective To investigate the bacteria distribution of neonatal purulent meningitis，antibiotic sensitivity and resistance，and provide laboratory evidence for clinical diagnosis and treatment.MethodsTwenty-eight cases diagnosed purulent meningitis were recruited into this study.The bacterial culture，drug resistance and sensitivity of cerebrospinal fluid from the patients were analyzed.Results The pathogen distribution in the cerebrospinal fluid of 28 cases with neonatal purulent meningitis:27 cases with cultured single strain，just1 case with two strains.In this findings，there were 20 gram-negative bacteria strains(68.96%)，8 gram-positive bacteria strains(27.59%)，1 candida albicans strain (3.45%).The drug resistant rate of gram-negative bacteria to ampicillin，cotrimoxazole，piperacillin was more than 80.00%;on the other hand，it was up to 60.00%to cefazolin，tetracycline，cefotaxime.Eight strains of extended spectrum beta lactamase bacteria were tested in this study.Gram-negative bacteria resistant to meropenem and amikacin were not detected.Most gram-positive bacteria showed drug resistance to ampicillin，cotrimoxazole，erythromycin，cefoxitin.There was none detected in gram-positive bacteria resistant to vancomycin.ConclusionGram-negative bacteria was the major pathogens in neonatal purulent meningitis，and they were resistant to multiple antibiotics.

meningitis;bacterial infection;drug resistance

R515.2

A

1007-3205(2015)02-173-04

2014-08-05;

2014-10-20

白曉萌 (1986-)，男，河北冀州人，河北省兒童醫院檢驗師，醫學學士，從事臨床檢驗學研究。

*通訊作者

10.3969/j.issn.1007-3205.2015.02.019