桃葉鴉蔥根中總黃酮的提取工藝

楊輝，王治寶

（河北北方學(xué)院藥學(xué)系，河北張家口075000）

桃葉鴉蔥根中總黃酮的提取工藝

楊輝，王治寶

（河北北方學(xué)院藥學(xué)系，河北張家口075000）

測(cè)定桃葉鴉蔥根中總黃酮的含量，考察總黃酮抗氧化活性。采用正交設(shè)計(jì)優(yōu)化總黃酮提取工藝，采用紫外分光光度法測(cè)定總黃酮含量。采用碘量法測(cè)定不同劑量總黃酮對(duì)H2O2的作用，采用分光光度法測(cè)定其對(duì)·OH的作用。桃葉鴉蔥根中總黃酮含量為0.929 4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）=2.87%（n=3）。桃葉鴉蔥總黃酮的體外抗氧化作用具有一定劑量依賴(lài)性，對(duì)H2O2及·OH達(dá)到50%清除率所需濃度（IC50）分別為濃度為1.178 g/mL及2.26×10-2g/mL。桃葉鴉蔥總黃酮有一定抗氧化作用。

桃葉鴉蔥；總黃酮；正交試驗(yàn)；抗氧化

菊科植物桃葉鴉蔥（Scorzonera sinensis Lipsch）廣泛分布于內(nèi)蒙古、河北、遼寧等地。具有清熱解毒療瘡的功效。桃葉鴉蔥主要有苯丙素、木脂素及其苷、倍半萜及其苷、三萜及其苷和黃酮等成分[1-3]。研究發(fā)現(xiàn)，鴉蔥具有抗腫瘤[4]、抗炎鎮(zhèn)痛[5]、抗抑郁[6]等作用。本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用正交設(shè)計(jì)方案，對(duì)桃葉鴉蔥總黃酮的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)選，采用紫外分光光度法測(cè)定了桃葉鴉蔥根中總黃酮含量，并考察了桃葉鴉蔥總黃酮體外抗氧化作用。

1 材料

1.1 樣品與試劑

藥材桃葉鴉蔥采自河北赤城縣，由河北北方學(xué)院中藥鑒定室趙恒成教授鑒定為桃葉鴉蔥（Scorzonerasinensis Lipsch）。蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉和乙醇均為國(guó)產(chǎn)分析純；實(shí)驗(yàn)用水為去離子水。

1.2 儀器

UV2100型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)：尤尼柯（上海）儀器有限公司；BP211D十萬(wàn)分之一電子天平：賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；中興高速萬(wàn)能粉碎機(jī)：北京中興偉業(yè)儀器有限公司。

2 方法

取桃葉鴉蔥根洗凈，60℃烘干，粉碎為粗粉。精密稱(chēng)取桃葉鴉蔥根粗粉9份，各10 g，在單因素分析的基礎(chǔ)上，選用不同濃度的乙醇溶液為提取溶劑，選取料液比，提取時(shí)間，乙醇濃度3個(gè)因素，并各設(shè)置3個(gè)水平，按L9（34）正交表設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案，采用常溫超聲波提取，提取液過(guò)濾后，濃縮，定容至100mL。水平因素見(jiàn)表1，正交表見(jiàn)表2。

表1 提取工藝正交試驗(yàn)的水平與因素Tab le1 Levelsand factorsof the orthogonal test

2.2 含量測(cè)定[7]

準(zhǔn)確稱(chēng)取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品10.0mg，置于100mL容量瓶中，加70%乙醇，溶解后，定容，搖勻搖勻放置6min，再加4%NaOH溶液4.0mL，用70%乙醇定容，搖勻放置15min，以70%乙醇即得標(biāo)準(zhǔn)品溶液。精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分別置于10mL容量瓶中，加70%乙醇至5mL，加5%NaNO2溶液0.3mL搖勻放置6min，加10%Al（NO3）3溶液0.3mL為空白對(duì)照，在510 nm處測(cè)定其吸光度值。以吸光度值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，以濃度C（mg/m L）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)求得桃葉鴉蔥總黃酮含量。按下式計(jì)算總黃酮得率。

總黃酮得率=提取液濃度（mg/mL）×稀釋倍數(shù)×體積（mL）/稱(chēng)取樣品干質(zhì)量（g）×1000

2.3 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

分別稱(chēng)取桃葉鴉蔥根粗粉3份，各10 g，依據(jù)所選最佳條件提取總黃酮并進(jìn)行含量測(cè)定。

2.4 桃葉鴉蔥總黃酮體外抗氧化研究

2.4.1 供試樣品的制備

2）實(shí)驗(yàn)過(guò)程的控制。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的語(yǔ)言活動(dòng)均按照《新疆維吾爾自治區(qū)農(nóng)村雙語(yǔ)幼兒園教育指導(dǎo)綱要（試行）》（新教雙〔2017〕16號(hào)）中的教學(xué)進(jìn)度實(shí)施教學(xué)，語(yǔ)言特色活動(dòng)按照縣教育局統(tǒng)一安排的內(nèi)容進(jìn)行教學(xué)[4]。教學(xué)全程使用國(guó)家通用語(yǔ)言。兩名教師均為某高校非學(xué)前教育專(zhuān)業(yè)支教教師，漢族，學(xué)歷均為全日制本科，教齡相當(dāng)。實(shí)驗(yàn)時(shí)間均為一學(xué)期，后測(cè)時(shí)間及測(cè)試內(nèi)容相同。實(shí)驗(yàn)組在國(guó)家通用語(yǔ)言教學(xué)中采用的教學(xué)流程如圖1所示。

取一定量的桃葉鴉蔥根粗粉，按照所選最佳條件提取總黃酮，減壓濃縮，定容到每毫升相當(dāng)于0.05 g總黃酮。

2.4.2 對(duì)H2O2的影響

采用碘量法[8]測(cè)定。每個(gè)樣品平行測(cè)定3次，取其平均值。結(jié)果按下式計(jì)算：

式中：V0為陰性對(duì)照消耗Na2S2O3的體積，mL；V1為陽(yáng)性對(duì)照消耗Na2S2O3的體積，mL；V2為樣品消耗Na2S2O3的體積，mL。

2.4.3 對(duì)·OH的影響

根據(jù)文獻(xiàn)[9]進(jìn)行，并稍作修改。每個(gè)樣品平行測(cè)定3次，取其平均值。結(jié)果按下式計(jì)算：

式中：A2為樣品的吸光度；A11為溶劑的吸光度；A1為對(duì)照組的吸光度。

3 結(jié)果

3.1 正交試驗(yàn)結(jié)果

正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 L9（34）正交表及實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table2 The resultsof the orthogonal test

由表2可知超聲提取桃葉鴉蔥根中總黃酮的最佳工藝條件為A3B2C3，即料液比為1∶30 g/mL，乙醇濃度為70%，提取120min。方差分析見(jiàn)表3，表明，從桃葉鴉蔥根中提取總黃酮以乙醇濃度影響最大，其次為提取時(shí)間，料液比影響最小。

表3 桃葉鴉蔥根中總黃酮提取率方差分析Table3 Variance analysisof the flavonoidsextraction yield from the rootof scorzonera sinensis

3.2 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明桃葉鴉蔥根中的總黃酮平均含量為0.929 4%（n=3，RSD=2.87%）。

3.3 桃葉鴉蔥總黃酮體外抗氧化作用

對(duì)H2O2及·OH的影響結(jié)果見(jiàn)表4。

由表4可知，桃葉鴉蔥總黃酮對(duì)H2O2有一定的清除作用，并呈現(xiàn)一定的劑量依賴(lài)關(guān)系，但清除作用較弱；桃葉鴉蔥總黃酮對(duì)·OH有較強(qiáng)的清除作用，并呈現(xiàn)一定的劑量依賴(lài)關(guān)系。

表4 桃葉鴉蔥總黃酮對(duì)H2O2及·OH的影響Table4 Theeffectof flavonoidsof scorzonera sinensison H2O2and·OH

4 結(jié)論與討論

本研究采用正交試驗(yàn)探索桃葉鴉蔥根中總黃酮的提取工藝，結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用30倍量的70%乙醇作為提取溶劑超聲輔助提取120min，提取率可達(dá)到0.9%。優(yōu)選得到的桃葉鴉蔥總黃酮提取工藝簡(jiǎn)單，具有良好的穩(wěn)定性。

桃葉鴉蔥安全無(wú)毒，為藥食兩用的植物，本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)桃葉鴉蔥總黃酮有一定抗氧化作用，為將桃葉鴉蔥開(kāi)發(fā)為抗氧化劑及功能食品提供了一定的參考。

[1]王斌,李國(guó)強(qiáng),管華詩(shī)．蒙古鴉蔥揮發(fā)油成分元素的GC-MS和ICP[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2007,18(10):2364

[2]Paraschos Sotiris,MagiatisProkopios,KalpoutzakisEleftherios,etal. Three new dihydroisocoumarins from the Greek endemic species Scorzonera cretica[J].NatProd,2001,64(12):1585

[3] Christian Zidorn,ErnstP.Ellmerer,Sonja Sturm,etal.Tyrolobibenzyls E and F from Scorzonera humilis and distribution of caffeic acid derivatives,lignans and tyrolobibenzyls in European taxa of the subtribe Scorzonerinae(Lactuceae,Asteraceae)[J].phytochemistry, 2003,63(1):61

[4]王斌,楊立業(yè),李國(guó)強(qiáng),等．蒙古鴉蔥抗腫瘤三萜類(lèi)成分研究[J]．中國(guó)藥學(xué)雜志,2012,45(10):727

[5]曾春萍．桃葉鴉蔥抗炎鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究[J]．天津中醫(yī)藥,2010, 27(6):515

[6]楊輝,李秀榮．桃葉鴉蔥抗抑郁作用的實(shí)驗(yàn)研究[J]．中成藥,2011, 33(9):1588

[7]李喜鳳,郝哲,杜云鋒．蒲公英中總黃酮提取工藝的研究[J]．時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2009,20(7):1695

[8]彭雪萍,馬慶一,劉艷芳,等．蘋(píng)果廢渣中天然抗氧化物的提取、分離及活性研究[J]．食品工業(yè)科技,2006,27(11):111

[9]曹燕,龐市賓,徐磊,等．金雞菊提取物體外抗氧化活性[J]．中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2011,17(12):144

Study on Extraction of Flavonoids from Scorzonera Sinensis Lipsch

YANGHui，WANGZhi-bao
（Pharmacy Department，HebeiNorth University，Zhangjiakou 075000，Hebei，China）

To determine the content of Flavonoid in scorzonera sinensis.To observe Antioxidative activity of scorzonera sinensis Flavonoid.The best method was chosen to carry on orthogonal design for extraction technology.UVwere used to determine the contentof Flavonoid.Iodometric and Spectrophotometrywere used to determine the effects of Flavonoid on H2O2and·OH.The Flavonoid in scorzonera sinensiswas0.929 4%，RSD= 2.87%（n=3）.The IC50on H2O2and o OH were 1.178 g/mL and 2.26×10-2g/mL.Flavonoid of scorzonera sinensishasa strongability to resistanceoxidation.

Scorzonera sinensis；flavonoid；orthogonaldesign；antioxidative

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.05.009

2014-01-25

河北省高等學(xué)校科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目（Z 2013006）

楊輝（1972—），男（漢），副教授，碩士，主要從事中藥化學(xué)教學(xué)科研工作。