Bcl-2蛋白與雌激素受體在不同程度宮頸病變中的相關(guān)性研究

2015-12-26 08:16:08倪麗芳,路世芳,高煥云等

河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報 2015年8期

·論著·

倪麗芳1，路世芳2，高煥云3，陳硯凝4*

(1.河北省寧晉縣婦幼保健院檢驗科，河北寧晉 055550；2.河北省寧晉縣婦幼保健院兒科，河北寧晉 055550；3.河北省寧晉縣婦幼保健院外科，河北寧晉 055550；4.河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院病理科，河北石家莊 050011)

[摘要]目的觀察Bcl-2蛋白與雌激素受體在不同程度宮頸病變中的表達(dá)。方法選取180例宮頸組織蠟塊，其中慢性宮頸炎40例，低度宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia Ⅰ,CINⅠ)40例，高度宮頸上皮內(nèi)瘤變(CINⅡ～Ⅲ)60例，宮頸癌40例(其中鱗癌35，腺癌5例)。免疫組織化學(xué)法檢測ER蛋白和Bcl-2蛋白的表達(dá)水平，并進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果隨著宮頸病變進(jìn)展,ER的陽性率逐漸降低，與慢性宮頸炎組比較，CINⅡ～Ⅲ組、宮頸鱗癌組和腺癌組差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，而CINⅠ組差異無統(tǒng)計學(xué)意義；隨著宮頸病變進(jìn)展，Bcl-2蛋白陽性率逐漸升高，與慢性宮頸炎組比較，CINⅠ、CINⅡ～Ⅲ、宮頸鱗癌組和腺癌組差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。CINⅡ～Ⅲ組中ER與Bcl-2的表達(dá)存在相關(guān)性，在其余組中不具有相關(guān)性。結(jié)論ER蛋白的表達(dá)水平隨宮頸病變程度的提高而降低，Bcl-2蛋白的表達(dá)水平則隨之升高，2種蛋白在高度分化的宮頸上皮內(nèi)瘤變組織中具有明顯的相關(guān)性，聯(lián)合表達(dá)陽性可能是高度宮頸上皮內(nèi)瘤變發(fā)生的主要機(jī)制之一。

[關(guān)鍵詞]宮頸腫瘤；宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變；受體，雌激素doi:10.3969/j.issn.1007-3205.2015.08.031

[收稿日期]2014-12-19；[修回日期]2015-01-04

[作者簡介]倪麗芳(1979-),女，河北寧晉人，河北省寧晉縣婦幼保健院主管檢驗師，醫(yī)學(xué)學(xué)士，從事臨床檢驗學(xué)研究。

通訊作者*

[中圖分類號]R737.33[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]B

宮頸癌是嚴(yán)重危害女性健康的惡性腫瘤，其在女性中的發(fā)病率僅位于乳腺癌之后，近年來有年輕化趨勢[1]。目前認(rèn)為，高危型人乳頭瘤病毒(humanpapillomavirus，HPV)感染直接導(dǎo)致宮頸癌的前期病變，且HPV與雌激素具有協(xié)同的致癌作用[2]。雌激素受體(estrogenreceptor，ER)是位于細(xì)胞膜上參與雌激素非基因轉(zhuǎn)錄效應(yīng)的一種配體依賴型轉(zhuǎn)錄因子，是雌激素與腫瘤發(fā)生聯(lián)系的關(guān)鍵中間物質(zhì)，其與雌激素結(jié)合后可通過雌激素應(yīng)答元件調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄[3]。Bcl-2蛋白是與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)的細(xì)胞因子，受ER和雌二醇的影響。雖然目前已有報道顯示ER、Bcl-2蛋白在宮頸癌中有不同程度的異常表達(dá)，但兩者的表達(dá)水平是否有相關(guān)性目前并不清楚。本研究檢測不同程度宮頸病變組織中ER和Bcl-2蛋白的表達(dá)水平，并探討兩者在宮頸癌病變中的相關(guān)性。

1資料與方法

1.1標(biāo)本來源選取2012年2月—2013年12月河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院保存的180例宮頸組織石蠟標(biāo)本。依據(jù)WHO病理組織學(xué)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷，其中慢性宮頸炎組織石蠟標(biāo)本40例，低度宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervicalintraepithelialneoplasiaⅠ,CINⅠ)組織石蠟標(biāo)本40例，高度宮頸上皮內(nèi)瘤變(CINⅡ～Ⅲ)組織石蠟標(biāo)本60例，宮頸癌組織石蠟標(biāo)本40例(鱗癌35例，腺癌5例)。慢性宮頸炎組織標(biāo)本取自患有子宮肌瘤而進(jìn)行子宮全切除手術(shù)的患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①接受過放化療的患者；②同時患有其他惡性腫瘤的患者；③妊娠及哺乳期婦女；④代謝性疾病患者；⑤近期使用過甾體類激素的患者。患者年齡24～68歲，平均(36.5±12.4)歲，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，不同程度宮頸病變患者年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2試劑鼠抗人ER單克隆抗體(博士德)、鼠抗人Bcl-2單克隆抗體(上海億欣)、二步法抗兔、鼠通用型免疫組織化學(xué)檢測試劑盒(Dako)、山羊血清(Hyclone)。

1.3檢測方法①石蠟切片：將所有樣品分別進(jìn)行石蠟切片(切片厚度為4μm)，用3%過氧化氫孵育去內(nèi)源性過氧化物酶活性，然后進(jìn)行抗原修復(fù)(微波修復(fù)，中火6min，重復(fù)4次)。②免疫組織化學(xué)染色：按照試劑盒說明分別進(jìn)行ER、Bcl-2免疫組織化學(xué)染色。首先用血清進(jìn)行封片，分別滴加一抗，于4 ℃孵育過夜，然后加二抗室溫孵育1h，加二氨基聯(lián)苯胺顯色后用蘇木素進(jìn)行復(fù)染，最后用中性樹膠封片，鏡檢。

1.4診斷標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為ER染色的陽性表達(dá)細(xì)胞，胞漿或細(xì)胞膜呈現(xiàn)棕黃色顆粒為Bcl-2陽性表達(dá)細(xì)胞。鏡檢時，隨機(jī)選取5個視野，使用圖像掃描分析系統(tǒng)計算陽性細(xì)胞率，并以下面標(biāo)準(zhǔn)判斷切片為陽性或陰性：陽性標(biāo)準(zhǔn)為陽性細(xì)胞率>10%，陰性標(biāo)準(zhǔn)為陽性細(xì)胞率<10%。

2結(jié)果

2.1ER蛋白和Bcl-2蛋白的表達(dá)慢性宮頸炎組織(圖1A)和宮頸上皮內(nèi)瘤變組織(圖1B和C)中的鱗狀上皮細(xì)胞、腺上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞均有ER蛋白的分布，受癌細(xì)胞侵犯的腺體中無ER蛋白分布，癌巢中有少量ER蛋白的表達(dá)(圖1D和E)。慢性宮頸炎組織、宮頸上皮內(nèi)瘤組織的上皮和腺體組織中均無Bcl-2表達(dá)，血管組織則染色較為明顯；宮頸癌組織中在癌巢及血管處則多有分布(圖2)。

2.2不同宮頸病變組織中ER和Bcl-2表達(dá)比較鱗癌組ER表達(dá)較慢性宮頸炎組和CINⅠ組明顯降低(P<0.05)，CINⅡ～Ⅲ組ER表達(dá)較慢性宮頸炎組也降低(P<0.05)；CINⅠ組、CINⅡ～Ⅲ組、鱗癌組和腺癌組Bcl-2表達(dá)較慢性宮頸炎組升高(P<0.05)。見表1。

表1　不同宮頸病變組織中 ER和 Bcl-2表達(dá)比較　(例數(shù)，%)

*P<0.05與慢性宮頸炎比較#P<0.05與CINⅠ組比較(χ2檢驗)

2.3ER與Bcl-2在不同宮頸病變組織中的陽性表達(dá)及相關(guān)性在CINⅠ中，Bcl-2表達(dá)陽性率52.5%(21/40)與ER表達(dá)陽性率62.5%(25/40)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，ER與Bcl-2表達(dá)也無關(guān)聯(lián)(列聯(lián)系數(shù)=0.295,P=0.121)；在CINⅡ～Ⅲ中，Bcl-2表達(dá)陽性率60.0%(36/60)與ER表達(dá)陽性率40.0%(24/60)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，ER與Bcl-2表達(dá)有關(guān)聯(lián)(列聯(lián)系數(shù)=0.389,P=0.006)；在鱗癌中，Bcl-2表達(dá)陽性率74.3%(26/35)與ER表達(dá)陽性率22.9.%(8/35)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，ER與Bcl-2表達(dá)無關(guān)聯(lián)(列聯(lián)系數(shù)=0.089,P=0.683)；在腺癌中，Bcl-2表達(dá)陽性率80.0%(4/5)與ER表達(dá)陽性率20.0%(1/5)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，ER與Bcl-2表達(dá)無關(guān)聯(lián)(列聯(lián)系數(shù)=0.250,P=0.402)。見表2。

表2　 ER與 Bcl-2在不同宮頸病變組織中的陽性表達(dá)　(例數(shù))

3討論

宮頸癌從宮頸上皮內(nèi)瘤變(CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ)逐步發(fā)展到早期浸潤癌，然后再發(fā)展到浸潤癌。臨床研究發(fā)現(xiàn)宮頸浸潤癌5年存活率約為67%，早期癌為90%，宮頸上皮內(nèi)瘤變的存活率則為100%[4]。一般認(rèn)為HPV感染和其他多種因素共同作用導(dǎo)致宮頸癌的發(fā)生[5]。對口服避孕藥的研究發(fā)現(xiàn)雌激素水平與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)，且其并不因絕經(jīng)而發(fā)生變化[6]。雌激素不僅可以通過誘發(fā)細(xì)胞突變而導(dǎo)致宮頸癌細(xì)胞持續(xù)生長，還可以通過抑制細(xì)胞凋亡，致使感染HPV的宮頸細(xì)胞不斷增殖[7]。外源或內(nèi)源性雌激素與胞核內(nèi)的的ER結(jié)合后，同目的基因啟動子附近的雌激素受體反應(yīng)元件再結(jié)合，與相關(guān)輔助因子形成轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物，從而啟動基因的轉(zhuǎn)錄，調(diào)節(jié)雌激素促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡的功能[8]。Bcl-2蛋白是一種線粒體內(nèi)膜蛋白，可以減少由各種刺激引起的細(xì)胞損傷，從而抑制細(xì)胞凋亡[9]。染色體易位、轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)異常等因素均能導(dǎo)致Bcl-2蛋白的過度表達(dá)，在抑制細(xì)胞凋亡的同時，能保持突變基因促進(jìn)腫瘤的發(fā)生[10]。有文獻(xiàn)報道，Bcl-2蛋白的表達(dá)水平因腫瘤分化程度不同而不同，在分化程度較高的腫瘤組織中Bcl-2蛋白的表達(dá)量也相應(yīng)較高[11]。本研究檢測了不同病變程度宮頸組織中ER和Bcl-2的表達(dá)水平，并探討了兩者在宮頸癌變中的相關(guān)性。研究結(jié)果顯示隨著宮頸病變的加重，ER蛋白表達(dá)的陽性率逐步降低，提示ER蛋白在宮頸癌進(jìn)展中起著保護(hù)作用；鱗癌組與腺癌組差異無統(tǒng)計學(xué)意義，表明ER蛋白的表達(dá)量與腫瘤類型和分化程度無關(guān)。ER蛋白在腫瘤組織中表達(dá)量相對較低的原因可能是因為較高的雌激素水平導(dǎo)致雌激素-ER蛋白二聚體增多，游離的ER蛋白相應(yīng)降低。Bcl-2蛋白在不同宮頸病變程度組織中的表達(dá)水平則與ER蛋白相反，其陽性率隨著病變程度的加重而升高，且鱗癌組與腺癌組表達(dá)差異也無統(tǒng)計學(xué)意義。提示Bcl-2蛋白的表達(dá)可能與宮頸病變的分化程度有關(guān)，而與腫瘤的類型無關(guān)，其表達(dá)量的升高在宮頸癌中是一個早期事件，這對患者的預(yù)后是很有利的。通過對不同宮頸病變組織中的ER蛋白和Bcl-2陽性表達(dá)進(jìn)行相關(guān)性分析，得出在CINⅡ～Ⅲ中2種蛋白的表達(dá)具有相關(guān)性，在此階段2種蛋白的聯(lián)合表達(dá)率高于鱗癌和腺癌組，說明ER蛋白在CINⅡ～Ⅲ階段可能會調(diào)節(jié)Bcl-2的表達(dá)。雌激素-ER蛋白二聚體可通過增加內(nèi)源性Ca2+濃度，并激活MAPK而導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄因子的活化，從而進(jìn)一步促進(jìn)了Bcl-2的表達(dá)[12]。高度分化的宮頸上皮內(nèi)瘤變可能是雌激素作用的重要時期。

綜上所述，ER蛋白的表達(dá)水平隨宮頸病變程度的提高而降低，Bcl-2蛋白的表達(dá)水平則隨之升高，2種蛋白在高度分化的宮頸上皮內(nèi)瘤變組織中具有明顯的相關(guān)性。(本文圖見封三)

[參考文獻(xiàn)]

[1]ArbynM,CastellsaguéX,deSanjoseS,etal.Worldwideburdenofcervicalcancerin2008[J].AnnOncol,2011,22(12):2675-2686.

[2]SnijdersPJ,VerhoefVM，ArbynM,etal.High-riskHPVtestingonself-sampledversusclinician-collectedspecimens:areviewontheclinicalaccuracyandimpactonpopulationattendanceincervicalcancerscreening[J].IntJCancer,2013,132(10):2223-2236.

[3]LarsenMS,BjerreK,Giobbie-HurderA,etal.PrognosticvalueofBcl-2intwoindependentpopulationsofestrogenreceptorpositivebreastcancerpatientstreatedwithadjuvantendocrinetherapy[J].ActaOncologica,2012,51(6):781-789.

[4]YasmeenA,BeauchampMC,PiuraE,etal.Inductionofapoptosisbymetformininepithelialovariancancer:involvementoftheBcl-2familyproteins[J].GynecolOnco,2011,121(3):492-498.

[5]朱華潔.宮頸薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查聯(lián)合高危型HPV檢測在宮頸病變篩查中的臨床應(yīng)用[J].河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2012,33(6):645-648.

[6]WynderEL,CornfieldJ,SchroffPD,etal.Astudyofenvironmentalfactorsincarcinomaofthecervix[J].AmJObstetGynecol,2013,68(2):1016-1052.

[7]Sundstr?mK,PlonerA,Dahlstr?mLA,etal.ProspectivestudyofHPV16viralloadandriskofinsituandinvasivesquamouscervicalcancer[J].CancerEpidemiolBiomarkersPrev,2013,22(1):150-158.

[8]ElangovanS,RamachandranS,VenkatesanN,etal.SIRT1isessentialforoncogenicsignalingbyestrogen/estrogenreceptorαinbreastcancer[J].CancerRes,2011,71(21):6654-6664.

[9]MamounasEP,TangG,FisherB,etal.Associationbetweenthe21-generecurrencescoreassayandriskoflocoregionalrecurrenceinnode-negative,estrogenreceptor-positivebreastcancer:resultsfromNSABPB-14andNSABPB-20[J].JClinOncol,2010,28(10):1677-1683.

[10]OlaMS,NawazM,AhsanH.RoleofBcl-2familyproteinsandcaspasesintheregulationofapoptosis[J].MolCellBiochem,2011,351(1/2):41-58.

[11]SmerageJB,BuddGT,DoyleGV,etal.MonitoringapoptosisandBcl-2oncirculatingtumorcellsinpatientswithmetastaticbreastcancer[J].MolOncol,2013,7(3):680-692.

[12]CotrimCZ,FabrisV,DoriaML,etal.Estrogenreceptorbetagrowth-inhibitoryeffectsarerepressedthroughactivationofMAPKandPI3Ksignallinginmammaryepithelialandbreastcancercells[J].Oncogene,2013,32(19):2390-2402.M,CastellsaguéX,deSanjoseS,etal.Worldwideburdenofcervicalcancerin2008[J].AnnOncol,2011,22(12):2675-2686.