新疆特高發(fā)腫瘤資源庫的建立與管理

通信作者：王喜艷，男，主任醫(yī)師，博士生導(dǎo)師，研究方向：胰腺腫瘤的基礎(chǔ)和臨床，E-mail: wangxiyan2415@163.com。

新疆特高發(fā)腫瘤資源庫平臺建設(shè)

“新疆特高發(fā)腫瘤資源庫”是在新疆維吾爾自治區(qū)建立針對具有地方特色的哈薩克族食管癌、維吾爾族宮頸癌等特高發(fā)腫瘤標(biāo)本庫，通過采集、保存和利用人類常見腫瘤的組織、血液和體液標(biāo)本，并對其進(jìn)行科學(xué)的管理和質(zhì)量控制，充分利用新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院現(xiàn)有的腫瘤標(biāo)本資源，為基礎(chǔ)和臨床研究提供材料。新疆特高發(fā)腫瘤資源庫于2010年12月啟動建設(shè)，王喜艷院長任負(fù)責(zé)人，主持新疆特高發(fā)腫瘤資源庫建設(shè)專項包括自治區(qū)平臺建設(shè)項目2項、烏魯木齊市科學(xué)技術(shù)計劃項目1項(共計217萬元)?，F(xiàn)存腫瘤組織標(biāo)本4 008例，血液標(biāo)本4 506例。到目前為止，腫瘤資源庫出庫標(biāo)本組織900例，血液200例，資助國家級、省部級及其他項目共計20項。

新疆特高發(fā)腫瘤資源庫的建立與管理

郭文佳， 朱琳， 張園， 董翔， 葛慧, 王喜艷

(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院新疆腫瘤防治研究所， 烏魯木齊830011)

摘要：目的建立規(guī)范、標(biāo)準(zhǔn)的新疆特高發(fā)腫瘤資源庫，為醫(yī)學(xué)研究提供珍貴的資源。方法2010年12月建立新疆特高發(fā)腫瘤資源庫，在進(jìn)行質(zhì)量控制和規(guī)范化管理的同時收集手術(shù)切除后的組織樣本，包括癌組織、癌旁組織(距離癌組織2 cm)和遠(yuǎn)端正常組織(距離腫瘤組織>5 cm)，以及腫瘤患者的血細(xì)胞和血清/血漿標(biāo)本，置于-80℃低溫冰箱中冷凍保存；同時建立一套腫瘤資源庫管理系統(tǒng)，儲存患者一般資料和對應(yīng)標(biāo)本信息。結(jié)果共收集各類腫瘤組織標(biāo)本4 008例，血液標(biāo)本4 506例，與標(biāo)本相對應(yīng)的臨床信息完整度達(dá)100%。結(jié)論新疆特高發(fā)腫瘤資源庫具有一定規(guī)模，并已形成一整套腫瘤資源的建設(shè)經(jīng)驗和管理方法。

關(guān)鍵詞：腫瘤資源庫； 建立； 規(guī)范化管理

基金項目：國家自然科學(xué)基金(81460361); 新疆科技基礎(chǔ)條件平臺建設(shè)項目(PT1107)

作者簡介：郭文佳(1984-)，女，碩士，助理研究員，研究方向：哈薩克族食管癌發(fā)病機(jī)理。

作者簡介：專題研究王喜艷，男，漢族，主任醫(yī)師,博士生導(dǎo)師。1984年石河子醫(yī)學(xué)院醫(yī)療系畢業(yè)，1991年新疆醫(yī)科大學(xué)肝膽外科專業(yè)碩士研究生畢業(yè)。目前擔(dān)任新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院院長、新疆維吾爾自治區(qū)腫瘤防治研究所所長。兼任國際肝膽胰協(xié)會委員、中華醫(yī)學(xué)會腫瘤分會委員、新疆醫(yī)學(xué)會腫瘤分會主任委員及《中華實驗外科雜志》、《中華消化外科雜志》等6種雜志編委。

基金項目從事普通外科臨床、教學(xué)、科研工作近30年，近5年主持國家自然2項、新疆維吾爾自治區(qū)科技廳平臺建設(shè)項目2項、烏魯木齊市科技局科技計劃項目1項。發(fā)表于SCI和核心期刊等論文40余篇；主編《外科臨床實習(xí)指南》，參編《肝膽外科學(xué)》、《外科學(xué)》(雙語教材英文版)、《外科學(xué)》(案例外科學(xué)，英文版)、《外科學(xué)》(外科?？漆t(yī)師培訓(xùn)使用)、《外科學(xué)》(7、8年制)6部教材。2010年獲新疆維吾爾自治區(qū)科技進(jìn)步二等獎1項。2014年榮獲中國醫(yī)院協(xié)會全國優(yōu)秀院長。

中圖分類號：R730.23

doi:10.3969/j.issn.1009-5551.2015.03.001

[收稿日期：2014-11-19]

Establishment and management of Xinjiang tumor resource bank

GUO Wenjia, ZHU Lin, ZHANG Yuan, DONG Xiang, GE Hui, WANG Xiyan

(TumorResearchInstitute,TumorAffiliatedHospitalofXinjiangMedicalUniversity,

Urumqi830011,China)

Abstract:ObjectiveTo establish standardized tumor resource bank based on the abundant clinical resources of Cancer Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University, and provide precious resources for medical researches. MethodsThe standardized Xinjiang-tumor resource bank was established in December 2010 under quality control and standardized management. The tumor tissues， tumor-adjacent tissues (2 cm distant from the tumor)， normal tissues (>5 cm distant from the tumor) were collected from surgery, as well as peripheral blood samples, including serum, plasma, and blood cells. All the specimens were stored in -80℃refrigerator. Meanwhile, an information-based database was established． ResultsWe have collected more than 4 008 cases of all kinds of tumor tissue specimens and more than 4 506 cases of blood samples, in which the integrity of clinical information is 100%, and qualified samples are up to 95%. ConclusionWe have established a standard Xinjiang-tumor resource bank, and it has formed in sizeable scale. Effective and scientific management was carried out to provide high-quality resources for scientific researches.

Key words: tumor resource bank; establishment; standard management

惡性腫瘤作為人類殺手之一，其危害日趨上升，研究惡性腫瘤的發(fā)病機(jī)理也已經(jīng)成當(dāng)今醫(yī)藥學(xué)研究的熱點[1]。目前實驗研究是惡性腫瘤研究的重要手段，而足夠數(shù)量的腫瘤標(biāo)本是實驗研究要求的前提和基礎(chǔ)，所以系統(tǒng)化地收集腫瘤患者的標(biāo)本，是腫瘤實驗研究地必備條件[2]。為了充分保護(hù)和合理利用新疆特高發(fā)腫瘤的病例資源，迅速為研究者提供合適數(shù)量的腫瘤標(biāo)本，縮短課題研究周期，促進(jìn)腫瘤的研究，新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院建立了新疆特高發(fā)腫瘤資源庫。腫瘤資源庫利用新疆最大的腫瘤專科醫(yī)院的醫(yī)療優(yōu)勢，合理地收集手術(shù)切除的腫瘤組織和患者的血液標(biāo)本，并對其進(jìn)行低溫冷凍保存，為研究者開展腫瘤研究工作提供標(biāo)本資源和服務(wù)平臺。

1材料與方法

1.1手術(shù)室配置在醫(yī)院手術(shù)室清潔走廊設(shè)置采樣間，便于新鮮組織標(biāo)本的采集。采樣間擁有良好的通風(fēng)系統(tǒng)，配置采樣臺、取材器具、照相設(shè)備、-80℃低溫冰箱，并連接溫度監(jiān)控報警系統(tǒng)。

1.2實驗室配置實驗室設(shè)置標(biāo)本儲存室、標(biāo)本處理室和庫房，保證房間通風(fēng)并配備空調(diào)。標(biāo)本儲存室放置4臺標(biāo)本庫專用超低溫冰箱，為保證冰箱持續(xù)供電配備雙回路電源以及發(fā)電機(jī)，液氮儲存柜、-80℃低溫冰箱、-20℃冰柜、4℃試劑保存柜，并配有備用低溫冰箱，以防止停電或者設(shè)備維修時標(biāo)本庫依然能夠正常運行，制冷設(shè)備均連接溫度監(jiān)控報警系統(tǒng)。標(biāo)本處理室配備處理血液標(biāo)本所需的通風(fēng)櫥，常規(guī)配置電腦、打印機(jī)記錄、保存和管理數(shù)據(jù)。同時配備全波長分光光度計、全能型成像系統(tǒng)、生物安全柜、低溫高速離心機(jī)、常溫離心機(jī)、高壓滅菌器、制冰機(jī)等，能完成常規(guī)分子生物實驗， 如DNA/RNA提取、PCR反應(yīng)、蛋白檢測等。

1.3標(biāo)本采集腫瘤資源庫標(biāo)本收集工作技術(shù)路線：(1)患者入院，經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。(2)倫理委員會審核通過的患者，主管醫(yī)生判斷是否符合納入標(biāo)準(zhǔn)，準(zhǔn)備收集標(biāo)本。對不符合納入標(biāo)準(zhǔn)者放棄。符合納入標(biāo)準(zhǔn)且患者同意，醫(yī)生和患者或其代理人共同簽署《標(biāo)本留取知情同意書》。患者不同意，放棄。(3)主管醫(yī)生填寫組織和血液標(biāo)本采集通知單，護(hù)士采集患者術(shù)前外周靜脈血液，送腫瘤資源庫處理。(4)腫瘤資源庫工作人員進(jìn)入手術(shù)室采集手術(shù)標(biāo)本，標(biāo)本直徑<1 cm，組織全部送病理檢查，放棄留取標(biāo)本；標(biāo)本直徑>1 cm，少部分組織入庫，其余送病理檢查。(5)工作人員詳細(xì)記錄留取標(biāo)本的信息，包括患者住院號、初步診斷、大體標(biāo)本切除時間等，使用無菌去核酶凍存管編號，分裝組織，立即置入液氮中速凍。同步將患者資料錄入腫瘤資源庫管理系統(tǒng)。(6)標(biāo)本速凍半小時后將標(biāo)本放入手術(shù)室-80℃冰箱緩存，定期轉(zhuǎn)入標(biāo)本儲存室-80℃冰箱長期保存。

1.3.1組織標(biāo)本的采集組織標(biāo)本采集的關(guān)鍵包括準(zhǔn)確定位標(biāo)本取材部位，控制標(biāo)本離體的時間在熱缺血30 min以內(nèi)，工作人員在操作過程中避免標(biāo)本污染(自身污染和環(huán)境污染)以確保標(biāo)本質(zhì)量。組織標(biāo)本為手術(shù)切除大體標(biāo)本或者穿刺活檢標(biāo)本，每份標(biāo)本包括癌組織、癌旁組織和遠(yuǎn)端正常組織。在采集組織標(biāo)本前，工作人員詢問主刀醫(yī)生標(biāo)本離體時間，對手術(shù)切除大體標(biāo)本進(jìn)行觀察和拍照，確認(rèn)腫瘤的部位、范圍，對以上情況詳細(xì)的描述記錄。同一標(biāo)本不同部位的取材必須更換刀片，取材避開壞死部位，組織量不少于0.5 g，標(biāo)本分割成0.2～0.5 cm的組織塊，根據(jù)分量分裝成1～3份，立即置入液氮速凍。

1.3.2血液標(biāo)本的收集住院患者按入院后第1天、治療(放療、化療)前后抽取外周靜脈血。每次采集空腹患者血標(biāo)本5～8 mL，工作人員詳細(xì)記錄抽血時間和抽血量。 血液標(biāo)本分成不抗凝和EDTA-Na-2抗凝2管，在室溫放置1 h后開始處理3 000 r/min 10 min，離心結(jié)束后吸取上層血清或血漿、抗凝管下層血細(xì)胞，按每管200～300 μL液體分裝，統(tǒng)一編號，存放入-80℃低溫冰箱保存。

1.4標(biāo)本鑒定與質(zhì)量控制標(biāo)本部位準(zhǔn)確：取材人員接受過病理取材專業(yè)培訓(xùn)，確保癌組織、癌旁組織及正常組織的區(qū)分。利用常規(guī)病理檢測方法對留取標(biāo)本進(jìn)行病理組織學(xué)鑒定，每張切片中腫瘤成分應(yīng)占80%以上，如果不足則加以備注。避免污染控制時間：標(biāo)本取材遵循無菌操作原則，避免環(huán)境污染和標(biāo)本之間的污染。為避免DNA、RNA和蛋白質(zhì)的降解，嚴(yán)格控制標(biāo)本離體時間，力爭在離體后30 min[3]內(nèi)入庫保存。定期抽查：定時查看溫控系統(tǒng)的溫度記錄，定期抽查標(biāo)本質(zhì)量，提取組織標(biāo)本基因組總DNA、總RNA和蛋白質(zhì)，利用全波長分光光度計測量標(biāo)本DNA、RNA、蛋白質(zhì)的濃度和純度，基因組DNA、RNA還可進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，根據(jù)條帶判斷其完整性[4]。

1.5腫瘤資源庫規(guī)范化管理

1.5.1標(biāo)準(zhǔn)化操作流程新疆特高發(fā)腫瘤資源庫自建立以來不斷完善各項制度建設(shè)，已制定一系列完整的標(biāo)準(zhǔn)化操作流程，包括血液標(biāo)本采集處理流程、組織標(biāo)本采集處理流程、標(biāo)本出入庫管理流程、標(biāo)本使用審批流程等。腫瘤資源庫配備固定專業(yè)技術(shù)人員，實現(xiàn)專人專管，保證標(biāo)本收集、保存到利用的每一個環(huán)節(jié)都能規(guī)范化。

1.5.2標(biāo)本信息化管理由軟件公司為腫瘤資源庫設(shè)計開發(fā)一套信息管理系統(tǒng)，腫瘤資源庫管理系統(tǒng)與醫(yī)院其它系統(tǒng)聯(lián)網(wǎng)共享資源，包括電子病歷系統(tǒng)、醫(yī)生工作站、病理管理系統(tǒng)、手術(shù)排程系統(tǒng)。腫瘤資源庫管理系統(tǒng)主要內(nèi)容有：患者的一般資料、標(biāo)本的一般資料、標(biāo)本的存放位置資料、標(biāo)本的使用情況、標(biāo)本的質(zhì)控信息、標(biāo)本的廢除信息、綜合查詢等。

2結(jié)果

自新疆特高發(fā)腫瘤資源庫建立以來，以新疆特高發(fā)的腫瘤組織、血液收集為主，將收集標(biāo)本與科研緊密結(jié)合，截止至2014年12月已收集手術(shù)腫瘤組織標(biāo)本4 008例，血液標(biāo)本4 506例(表1、圖1)，與標(biāo)本相對應(yīng)的臨床信息完整度達(dá)100%。標(biāo)本在具體的質(zhì)量控制體系之內(nèi)，定期質(zhì)控檢測，質(zhì)量合格。

表1　新疆特高發(fā)腫瘤資源庫收集腫瘤標(biāo)本種類和數(shù)量/例

圖1　新疆特高發(fā)腫瘤資源庫收集血液標(biāo)本和組織標(biāo)本圖

3討論

經(jīng)手術(shù)切除的腫瘤標(biāo)本是現(xiàn)代腫瘤研究的重要材料，也是不可再生資源。自1990年來，對腫瘤標(biāo)本進(jìn)行科學(xué)化管理和合理利用引起世界各地腫瘤研究者的重視，在此基礎(chǔ)上腫瘤標(biāo)本庫逐漸建立和完善。目前，國內(nèi)外多知名腫瘤研究單位也紛紛建立自己的腫瘤資源庫，如國際生物和環(huán)境樣本庫協(xié)會(The Institute for Social, Behavioral and Economic Research,ISBRE)[5]、歐洲的泛歐洲生物樣本庫與分子生物資源研究中心(Biobanking And Molecular Research Infrastructur,BBMRI)[6]、美國國家癌癥研究所(National Cancer Institute,NCI)[7]。2004年美國癌癥基金會資助天津腫瘤醫(yī)院建立組織庫[8]，2005年北大腫瘤醫(yī)院建立北京大學(xué)臨床腫瘤學(xué)院標(biāo)本庫[9]，2006年紐約中華醫(yī)學(xué)基金會資助中山大學(xué)腫瘤醫(yī)院建立腫瘤資源庫[10]。

新疆是多民族聚居地區(qū)，民族遺傳背景有地區(qū)特色，在新疆建立針對新疆地方特色的哈薩克族食管癌、維吾爾族宮頸癌等特高發(fā)腫瘤組織標(biāo)本庫，通過積極采集、仔細(xì)保存和合理利用這些類常見腫瘤組織、血液等標(biāo)本，對其進(jìn)行科學(xué)化的管理和質(zhì)量監(jiān)測，為基礎(chǔ)和臨床研究提供大量的高質(zhì)量材料。

新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院有穩(wěn)定的腫瘤標(biāo)本來源，可以保證腫瘤資源庫庫存標(biāo)本數(shù)量的不斷補(bǔ)充。新疆特高發(fā)腫瘤資源庫有3名專職工作人員負(fù)責(zé)標(biāo)本的收集、處理、凍存等日常管理工作，并制定了一系列管理制度，技術(shù)路線已經(jīng)基本成熟和規(guī)范。醫(yī)院各手術(shù)科室、手術(shù)室、病理科和病案室與腫瘤資源庫密切配合，主管領(lǐng)導(dǎo)負(fù)責(zé)各科室之間工作的協(xié)調(diào)，保證標(biāo)本收集工作的順利進(jìn)行。

醫(yī)學(xué)臨床研究與基礎(chǔ)研究的發(fā)展總是離不開多方合作，本腫瘤資源庫在充分利用自身資源合理發(fā)展的同時，也在尋找機(jī)會與國內(nèi)外專業(yè)腫瘤資源庫建立合作關(guān)系，利用與區(qū)外知名科研機(jī)構(gòu)建立起的良好的科技合作機(jī)制，通過加強(qiáng)與知名研究機(jī)構(gòu)的合作交流，加快建設(shè)具有新疆特色的腫瘤研究交流平臺。

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(本文編輯周芳)