GC 法測定魚金注射液中甲基正壬酮含量的不確定度評價

張婷，史文靜，2

(1.陜西新藥技術開發中心，陜西 西安 710075;2.陜西中藥研究所，陜西 咸陽 712000)

魚金注射液為國家中藥二類新藥，具有清熱解毒的作用。臨床上主要用于治療急性上呼吸道感染，急性支氣管炎等癥［1］。魚金注射液中甲基正壬酮是衡量魚金注射液質量的重要指標之一。

不確定度是表征被測量物質真值所處的量值范圍的評定結果，是對試驗測量結果的可信度評定，目前國際上推行使用不確定度代替誤差來表征實驗結果的可信賴程度［2］。甲基正壬酮作為魚金注射液中一項重要的質量控制參數［3］，其測定數據的準確性尤為重要。本文根據《測試和校準實驗室能力的通用要求》及JJF 1059—1999《測量不確定度與表示》［4］，對甲基正壬酮測量過程進行不確定度評估，通過建立不確定度的數學模型，分析不確定度來源，為魚金注射液的質量控制研究提供參考依據。

1 實驗部分

1.1 原料與儀器

魚金注射液(陜西醫藥控股集團山海丹藥業有限責任公司，批號:13070060);甲基正壬酮標準品(批號:120420，中國藥品生物制品檢定所);乙酸乙酯、氯化鈉均為分析純。

Agilent 7890A 氣相色譜儀;AG-135 電子天平。

1.2 實驗方法［3，5］

1.2.1 色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱:鍵合交聯聚乙二醇為固定液的毛細管柱(60 m ×250 μm×0.25 μm);載氣為高純度氦氣;檢測器:FID;載氣流速1.2 mL/min;進樣口溫度230 ℃;檢測器溫度280 ℃;分流比5∶1;程序升溫:初始80 ℃，保持5 min，以5 ℃/min 升溫速率升至220 ℃，保持3 min。

1.2.2 供試品溶液的制備 利用萃取法進行。精密量取魚金注射液25 mL(V1)，置具塞試管中，加入乙酸乙酯5 mL，再加氯化鈉5 g，振搖3 min，分取乙酸乙酯層，再加入乙酸乙酯5 mL，振搖3 min，分取乙酸乙酯層，合并乙酸乙酯提取液轉至10 mL(V2)量瓶中稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

1.2.3 標準品溶液的制備 取甲基正壬酮標準品適量，精密稱定，加乙酸乙酯溶解并稀釋至25 mL(V3)量瓶中，制成含甲基正壬酮0.273 6 mg/mL溶液，即得標準品溶液。

1.2.4 測定法 分別吸取標準品溶液與供試品溶液各1 μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，經外標法計算，供試品中甲基正壬酮含量為15.46 μg/mL。

2 結果與討論

2.1 數學模型的確定

式中 C樣——魚金注射液中甲基正壬酮的濃度，μg/mL;

m標——標準品的稱樣量，mg;

V3——標準品的最后定容體積，mL;

V1——樣品的移取體積，mL;

V2——樣品的最后定容體積，mL;

A樣——樣品的峰面積;

A標——標準品的峰面積;

1 000——由mg 與μg 的換算系數。

2.1.1 不確定度來源分析［6-8］

2.1.1.1 25 mL 移液管 試樣使用25 mL 移液管，在取樣過程中會引入不確定度。

2.1.1.2 10 mL 容量瓶 試樣使用10 mL 容量瓶，在取樣過程中會引入不確定度。

2.1.1.3 25 mL 容量瓶 試樣使用25 mL 容量瓶，在取樣過程中會引入不確定度。

2.1.1.4 電子天平 十萬分之一電子分析天平，其偏差值為0.1 mg。

2.1.1.5 供試品 供試品在測定過程中會引入不確定度。

2.1.2 測定結果 經檢測，甲基正壬酮含量測定結果是5 次重復測試結果的平均值，RSD 為1.46%。該數值可以直接用來計算與各重復性相關的合成標準不確定度。

2.2 標準不確定度分量的計算

2.2.1 標準品稱量引入的不確定度

2.2.1.1 天平示值的不確定度U(m甲) 天平AG-135(d=0. 01 mg)，其最大允許誤差為±0. 1 mg。假設為正態分布(K =3)，其標準不確定度0.1/= 0.057 7 mg。

采用減量法，其不確定度應重復計算2 次，所以最終產生的不確定度為:

2.2.1.2 甲基正壬酮標準品的不確定度U(p甲)甲基正壬酮標準品由中國生物制品檢定所提供，未標注純度數據，按純度為100.0%計算，其不確定度為U(p甲)= 0。

2.2.1.3 標準稀釋用玻璃器皿25 mL(V3)單標線量瓶引入的不確定度 校準引入的不確定度U(V3)量瓶經檢定為A 級，容量允許誤差為±0.03 mL，假設為正態分布(K=3)，其標準不確定度U(V3)= 0.03/= 0.012 2 mL。

2.2.2 供試品量取引入的不確定度

2.2.2.2 樣品溶液稀釋玻璃器皿10 mL(V2)單標線量瓶引入的不確定度 校準引入的不確定度U(V2)量瓶經檢定為 A 級，容量允許誤差為±0.020 mL，假設為正態分布(K =3)，其標準不確定度U(V2)= 0.020/= 0.008 2 mL。

2.2.3 供試品溶液重復性測試引入的不確定度U(Ax) 供試品溶液在氣相色譜儀上連續測定5 次得到5 個數據，為隨機測量，屬于A 類不確定度，結果見表1。

表1 供試品溶液的測定結果Table 1 Results of sample solution

標準品相對標準不確定度為:

魚金注射液樣品中甲基正壬酮測定重復性的相對標準不確定度:

表2 不確定度各分量分析一覽表Table 2 The component table of standard uncertainty

2.2.4 合成標準不確定度

2.2.5 擴展不確定度U 的計算 按95%置信概率，取包含因子K=2 計算擴展不確定度:

魚金注射液中甲基正壬酮的含量可表示為:(15.46 ±0.051 4)μg/mL，K=2。

3 討論

(1)根據《中國藥典》(2010 年版)一部附錄項下氣相色譜法，測定魚金注射液中甲基正壬酮的含量，參考JJF 1059—1999《測量不確定度與表示》，對含量測定過程中的不確定度來源進行分析，通過不確定度分析評價，可以為合理改進分析方法，以期將檢驗方案誤差降至最小提供可靠依據。

(2)經不確定度分析，天平示值的不確定度和供試品中經氣相色譜法測定所得峰面積，以及測定結果的重復性的不確定度分量是各不確定度分量中最大的。

(3)在試驗中適當增加對照品的稱樣重量可減少減量引起的不確定度。

(4)用氣相色譜法測定時，適當增加進樣次數可降低該步驟的不確定度。

(5)在藥物測試過程中，人員、儀器、量器、環境等都會引起檢測誤差，將不確定度引入合格評定的判定結果中可保證結果的公平、公正。

［1］ 劉杰，陳海金.魚金注射液的一般藥理學研究［J］. 中國藥物與臨床，2009，9(3):223-224.

［2］ 李艷，羅立駿，程輝躍，等. 氣相色譜法測定維生素E軟膠囊含量的不確定度評定［J］. 藥物分析雜志，2012，32(4):692-696.

［3］ 中國藥典委員會.中華人民共和國藥典:二部［M］.北京:人民衛生出版社，2010:1188.

［4］ 中國合格評定國家認可委員會. CNAS—GL06 化學分析中不確定度的評估指南［S］. 北京:中國計量出版社，2006.

［5］ 韓爽，張明時，周貽兵，等. 氣相色譜法測定魚腥草干品中甲基正壬酮的含量［J］. 安徽農業科學，2010，38(28):15606-15607.

［6］ 劉淑聰，王小營，張麗，等. 三七總灰分與酸不溶性灰分的標準值及不確定度評價［J］. 醫藥導報，2012，31(2):195-198.

［7］ 曹愛英，張園，趙春暉，等. 液質聯用法測定水產品中泰樂霉素含量不確定度評價［J］. 中國漁業質量與標準，2013，3(4):21-24.

［8］ 楊建剛，肖志強，王天，等. 高效液相色譜法測定愈風寧心片中葛根素不確定度評價［J］.醫藥導報，2013，8(32):219-220.