探討時(shí)間分辨免疫技術(shù)在乙型肝炎五項(xiàng)測(cè)定中的應(yīng)用效果

白艷麗

（沈陽(yáng)市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧 沈陽(yáng) 110041）

探討時(shí)間分辨免疫技術(shù)在乙型肝炎五項(xiàng)測(cè)定中的應(yīng)用效果

白艷麗

（沈陽(yáng)市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧 沈陽(yáng) 110041）

目的探討時(shí)間分辨免疫技術(shù)在乙型肝炎五項(xiàng)測(cè)定中的應(yīng)用效果。方法選取我院2012年8月至2014年8月432例乙型肝炎患者的血清標(biāo)本進(jìn)行TRFIA法檢測(cè)，并與ELISA法檢測(cè)的結(jié)果對(duì)比分析。結(jié)果TRFIA法檢測(cè)乙型肝炎五項(xiàng)指標(biāo)，質(zhì)控血清五項(xiàng)指標(biāo)的變異系數(shù)（CV%）均在20%范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)品C和E的五項(xiàng)指標(biāo)均值與靶值的比值均在0.90～1.10。ELISA法和TRFIA法分別檢測(cè)血清樣品的乙型肝炎五項(xiàng)指標(biāo)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，差異不顯著（P＞0.05），除HBsAb外其他四項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性符合率均較高。結(jié)論TRFIA法在能保證高重復(fù)性和準(zhǔn)確性的同時(shí)，其靈敏度明顯高于ELISA法。

時(shí)間分辨免疫技術(shù)；乙型肝炎五項(xiàng)測(cè)定；乙型肝炎病毒

我國(guó)為乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染高發(fā)區(qū)，臨床上為了有效預(yù)防和治療HBV感染，早期、準(zhǔn)確的檢測(cè)HBV病毒血清標(biāo)志物能為其提供重要的依據(jù)。HBV病毒血清標(biāo)志物檢測(cè)主要包括乙型肝炎的五項(xiàng)指標(biāo)，即乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎表面抗體（HBsAb）、e抗原（HBeAg）、e抗體（HBeAb）和核心抗原（HBcAb）[1]。臨床上用于檢測(cè)HBV病毒血清標(biāo)志物的免疫技術(shù)有很多，發(fā)展也比較快。時(shí)間分辨熒光免疫技術(shù)（time resolved fluoro immune assay，TRFIA）是近十年發(fā)展最快的一種高靈敏度的定量檢測(cè)方法[2]。為了探討TRFIA在乙型肝炎五項(xiàng)測(cè)定中的應(yīng)用效果，本文選取了我院2012年8月至2014年8月432例乙型肝炎患者的血清標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，并與酶免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immune sorbent assay，ELISA）檢測(cè)的結(jié)果對(duì)比，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源：血清標(biāo)本來(lái)自我院在2012年8月至2014年8月接受的432例乙型肝炎患者，男性275例，女性157例，年齡為15～65歲，平均年齡（36.8年齡男性）歲。空腹靜脈采血，保存在促凝分離膠密封試管內(nèi)，37 ℃放置待凝固后離心收集血清，-20 ℃保存。

1.2 儀器和試劑：使用北京普朗新技術(shù)公司酶免儀進(jìn)行ELISA法檢測(cè)，相應(yīng)試劑由成都奧克生物技術(shù)公司提供，質(zhì)量均達(dá)標(biāo)。使用上海新波生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的Anytest 2000型時(shí)間分辨熒光檢測(cè)儀進(jìn)行TRFIA法檢測(cè)，相應(yīng)試劑成都奧克生物技術(shù)公司提供，質(zhì)量均達(dá)標(biāo)。乙型肝炎兩對(duì)半質(zhì)控血清由衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心提供，質(zhì)量達(dá)標(biāo)。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 TRFIA法檢測(cè)乙型肝炎五項(xiàng)的重復(fù)性實(shí)驗(yàn)：采用TRFIA法檢測(cè)乙型肝炎兩對(duì)半質(zhì)控血清五項(xiàng)指標(biāo)，連續(xù)測(cè)定20 d，每天1次，分別求得五項(xiàng)指標(biāo)的均值（），標(biāo)準(zhǔn)差（S），變異系數(shù)（CV%）。變異系數(shù)在20%內(nèi)為重復(fù)性良好。

1.3.2 TRFIA法檢測(cè)乙型肝炎五項(xiàng)的準(zhǔn)確性實(shí)驗(yàn)：采用TRFIA法檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品C和E的五項(xiàng)指標(biāo)，各重復(fù)3次，將平均值與靶值對(duì)比，比值在0.90～1.10為準(zhǔn)確性好。

1.3.3 ELISA法和TRFIA法分別檢測(cè)血清樣品的乙型肝炎五項(xiàng)實(shí)驗(yàn)：由固定檢測(cè)技師嚴(yán)格按照說(shuō)明書分別采用ELISA法和TRFIA法進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，行卡方分析，P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

表3 ELISA法和TRFIA法分別檢測(cè)血清樣品的乙型肝炎五項(xiàng)指標(biāo)

2.1 TRFIA法檢測(cè)乙型肝炎五項(xiàng)指標(biāo)的重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果：質(zhì)控血清五項(xiàng)指標(biāo)的變異系數(shù)（CV%）均在20%范圍內(nèi)，見表1。

表1 TRFIA法檢測(cè)乙型肝炎五項(xiàng)的重復(fù)性

2.2 TRFIA法檢測(cè)乙型肝炎五項(xiàng)指標(biāo)的準(zhǔn)確性實(shí)驗(yàn)結(jié)果：標(biāo)準(zhǔn)品C和E的五項(xiàng)指標(biāo)均值與靶值的比值均在0.90～1.10，見表2。

表2 TRFIA法檢測(cè)乙型肝炎五項(xiàng)的準(zhǔn)確性

2.3 ELISA法和TRFIA法分別檢測(cè)血清樣品的乙型肝炎五項(xiàng)指標(biāo)實(shí)驗(yàn)結(jié)果：兩種方法分別檢測(cè)血清樣品的乙型肝炎五項(xiàng)指標(biāo)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，差異不顯著（P＞0.05），除HBsAb外其他四項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性符合率均較高。

3 討 論

ELISA法在臨床上用于檢測(cè)乙型肝炎血清五項(xiàng)指標(biāo)具有操作簡(jiǎn)單快捷、成本低廉和適于大批量樣品檢測(cè)等優(yōu)勢(shì)，使其成為目前應(yīng)用較多的一種方法。但是由于其靈敏度受到多種外界因素的影響，時(shí)常出現(xiàn)假陽(yáng)性或者假陰性，致使出現(xiàn)誤診或者漏診[3]。該方法也只能用于定性而不能定量，制約了其應(yīng)用范圍。TRFIA法是一種新型的標(biāo)記免疫檢測(cè)方法，采用鑭系稀土元素及其螯合物作為標(biāo)志物[4]，利用時(shí)間分辨熒光分析儀進(jìn)行信號(hào)檢測(cè)，排除了非特異性熒光的干擾，提高了檢測(cè)的特異性，保證了被檢測(cè)物質(zhì)的穩(wěn)定性，因此具備了靈敏度高、抗干擾能力強(qiáng)和穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)。

本文中，質(zhì)控血清五項(xiàng)指標(biāo)的變異系數(shù)（CV%）均在20%范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)品C和E的五項(xiàng)指標(biāo)均值與靶值的比值均在0.90～1.10，說(shuō)明TRFIA法檢測(cè)乙型肝炎五項(xiàng)指標(biāo)的重復(fù)性和準(zhǔn)確性均能帶到要求。ELISA法和TRFIA法分別檢測(cè)血清樣品的乙型肝炎五項(xiàng)指標(biāo)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異不顯著（P＞0.05），兩種方法陽(yáng)性符合率除了HBsAb外，其他四項(xiàng)指標(biāo)均在95%以上。HBsAb的陽(yáng)性符合率為77.78%，可能是血清樣品中HBsAb為陽(yáng)性的比例較少造成。TRFIA法檢測(cè)血清樣品乙型肝炎五項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性比例均高于ELISA法檢測(cè)的陽(yáng)性比例。可見，TRFIA法在能保證高重復(fù)性和準(zhǔn)確性的同時(shí)，其靈敏度明顯高于ELISA法。

綜上所述，ELISA法和TRFIA法對(duì)乙型肝炎五項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)均有較高的特異性和靈敏度。ELISA法方便快捷，成本低廉，但其穩(wěn)定性差，易出現(xiàn)假陽(yáng)性或者假陰性，適合普通檢測(cè)使用。TRFIA法特異性好，靈敏度高，能夠精確定量，比ELISA法更適合用于臨床上精確的檢測(cè)。

[1]朱天禮,張葵.時(shí)間分辨熒光免疫技術(shù)在乙肝病毒標(biāo)志物檢測(cè)中的應(yīng)用[J].臨床輸血與檢驗(yàn),2008,10(1):23-26.

[2]徐艷霞,謝金玲.時(shí)間分辨熒光免疫技術(shù)在乙肝兩對(duì)半測(cè)定中的應(yīng)用[J].臨床合理用藥,2010,3(22):39-42.

[3]田玉峰,王家安.乙肝五項(xiàng)時(shí)間分辨免疫熒光分析與PCR-HBV定量的關(guān)系[J].中外醫(yī)療,2008,34(34):18-20.

[4]趙治鳳,賈秋龍.乙肝五項(xiàng)指標(biāo)兩種常用檢測(cè)方法的比較分析[J].醫(yī)學(xué)檢驗(yàn),2012,19(8):78-80.

R512.6+2

B

1671-8194（2015）01-0085-02