長(zhǎng)柄側(cè)耳發(fā)酵液預(yù)防小鼠高脂血癥、護(hù)肝及抗氧化作用研究*

鄧西貝，周 賢，張 楠，李愛欣，王淑敏

（長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130117）

〈生理生化〉

長(zhǎng)柄側(cè)耳發(fā)酵液預(yù)防小鼠高脂血癥、護(hù)肝及抗氧化作用研究*

鄧西貝，周 賢，張 楠，李愛欣，王淑敏**

（長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130117）

研究長(zhǎng)柄側(cè)耳發(fā)酵液對(duì)高脂飲食小鼠血脂的影響，以及護(hù)肝和抗氧化的作用。通過高脂飲食建造小鼠高脂模型，同時(shí)以長(zhǎng)柄側(cè)耳發(fā)酵液灌胃給藥，生理鹽水作為空白對(duì)照，脂必妥片作為陽性對(duì)照。連續(xù)灌胃45 d后，測(cè)定甘油三酯（TG）、總膽固醇（CHO）、高密度脂蛋白（HDLC）、低密度脂蛋白（LDLC）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、總超氧化物歧化酶（T－SOD）、丙二醛（MDA）、微量還原型谷胱甘肽（GSH）含量。發(fā)酵液組較模型組TG、CHO、LDLC、ALT、AST、MDA、GSH含量均有不同程度降低；HDLC、SOD含量有不同程度提高。長(zhǎng)柄側(cè)耳發(fā)酵液可以預(yù)防由高脂飲食造成的小鼠高脂血癥，同時(shí)具有保護(hù)肝臟和抗氧化作用。

長(zhǎng)柄側(cè)耳；降血脂；轉(zhuǎn)氨酶；超氧化物歧化酶；谷胱甘肽

長(zhǎng)柄側(cè)耳（Pleurtus Spodotecus Fr.），又名灰白側(cè)耳、匙形側(cè)耳、灰凍菌。屬于擔(dān)子菌綱（Basidiomycetes）、傘菌目 (Agaricales)、側(cè)耳科（Pleurotaceae)的真菌，主要分布于吉林、云南、貴州、西藏等地，是一種常見的食（藥）用菌[1]。近年來調(diào)查顯示，我國成人血脂異常的患病率已達(dá)到18.6%[2]，由此導(dǎo)致的高脂血癥、脂肪肝等疾病越來越受到關(guān)注。

現(xiàn)代研究表明，側(cè)耳屬真菌具有較好的提高機(jī)體免疫力、降血脂、降血壓、抗腫瘤等作用，本項(xiàng)目主要研究長(zhǎng)柄側(cè)耳發(fā)酵液對(duì)高脂飲食小鼠高脂血癥的預(yù)防作用，對(duì)肝臟的保護(hù)作用及抗氧化作用，為開發(fā)利用長(zhǎng)柄側(cè)耳提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1儀器與試藥

酶標(biāo)儀（TECAN）；冷凍離心機(jī)（Eppendorf）；AUY220萬分之一分析天平，島津制作所；甘油三酯（TG）試劑盒、總膽固醇（CHO）試劑盒、高密度脂蛋白膽固醇（HDLC）試劑盒、低密度脂蛋白膽固醇（LDLC）試劑盒、丙二醛（MDA）測(cè)定試劑盒、總超氧化物歧化酶（T－SOD）測(cè)試盒、BCA法測(cè)定微量蛋白含量試劑盒、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）測(cè)試盒、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT） 測(cè)試盒、微量還原型谷胱甘肽（GSH）測(cè)定試劑盒，均購于南京建成生物工程研究所；脂必妥片，成都地奧九泓制藥廠；長(zhǎng)柄側(cè)耳發(fā)酵液干粉，由長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)藥用真菌研究所提供。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康昆明小鼠，體重18 g～22 g之間，由吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 高脂飼料配制

高脂飼料配方，小鼠基礎(chǔ)飼料67%、蛋黃3%、豬油30%。

1.3.2 動(dòng)物分組和模型建立

健康昆明小鼠80只，體重18 g～22 g，隨機(jī)分為8組，每組10只，雌雄各半，即空白對(duì)照組、模型組、陽性對(duì)照組（脂必妥）、不同給藥劑量長(zhǎng)柄側(cè)耳發(fā)酵液組（4 g·kg－1、2 g·kg－1、1 g·kg－1、0.5 g·kg－1、0.25 g·kg－1）。各組小鼠均自由進(jìn)食飲水，每三天稱一次體重，按小鼠體重灌胃給藥（0.2 mL/10g）。具體方案見表1。

表1 實(shí)驗(yàn)方案Tab.1 Experimental scheme

1.3.3 血脂四項(xiàng)的測(cè)定

小鼠連續(xù)灌胃給藥45 d，末次給藥后禁食不禁水12 h，摘眼球取血，置于1.5 mL離心管中，轉(zhuǎn)速3 000 r·min－1離心10 min，分離上層血清，根據(jù)相應(yīng)試劑盒說明書，測(cè)定血清中的總膽固醇（CHO）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDLC）和低密度脂蛋白（LDLC）含量。

1.3.4 血液中AST、ALT含量的測(cè)定

取1.3.3中分離得到的血清，根據(jù)相應(yīng)試劑盒說明書，測(cè)定血液中谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）含量、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）含量。

1.3.5 抗氧化指標(biāo)檢測(cè)

用生理鹽水將肝臟組織塊上的血沖洗干凈，濾紙吸干水分，準(zhǔn)確稱取肝臟組織塊重量，根據(jù)重量（g）和體積（mL）的比例1∶9，準(zhǔn)確加入9倍量的生理鹽水，在冰水浴的條件下，機(jī)械勻漿，然后以2 500 r·min－1的速度離心10 min，分離上清液，得到濃度為10%的肝臟組織勻漿，備用。根據(jù)相應(yīng)試劑盒說明書，用肝臟組織勻漿測(cè)定總超氧化物歧化酶（T－SOD）活性、丙二醛（MDA）含量、微量還原型谷胱甘肽（GSH）含量。

1.3.6 數(shù)據(jù)處理

測(cè)得數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS13.0進(jìn)行分析，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)法（方差不齊，采用非參數(shù)檢驗(yàn)法），比較組間顯著性差異，p＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1長(zhǎng)柄側(cè)耳發(fā)酵液對(duì)高脂飲食小鼠血脂四項(xiàng)影響

血脂四項(xiàng)測(cè)定結(jié)果見表2、表3。

由表2和表3可見，與空白組相比，模型組甘油三脂（TG）、總膽固醇（CHO）、低密度脂蛋白（LDLC） 含量明顯增高（p＜0.01），高密度脂蛋白（HDLC）含量明顯降低（p＜0.01），這說明小鼠高血脂癥模型造模成功；與模型組比較，發(fā)酵液各組TG、CHO、LDLC含量均明顯降低（p＜0.01），發(fā)酵液3組、5組HDLC含量明顯升高（p＜0.01），說明長(zhǎng)柄側(cè)耳發(fā)酵液能明顯抑制小鼠血清中TG、CHO、LDLC含量，提高HDLC含量；與陽性組比較，發(fā)酵液1組、2組、3組、4組血清中TG含量均沒有明顯差異，說明其降低小鼠血清中TG含量的功效與陽性藥接近，發(fā)酵液5組與陽性組相比TG含量存在顯著差異（p＜0.05），說明其降低TG含量的功效比陽性藥更好，發(fā)酵液1組、4組中CHO含量較陽性組明顯降低（p＜0.05），說明這兩組降低CHO含量的功效比陽性組更好，其余各組與陽性組接近，發(fā)酵液3組、5組HDLC含量沒有顯著差別，說明其對(duì)小鼠血清中HDLC含量的提高效果與陽性藥相近，發(fā)酵液各組與陽性組相比，小鼠血清LDLC含量均沒有明顯差異，說明其對(duì)小鼠血清中LDLC的降低效果與陽性藥相近。

表2 長(zhǎng)柄側(cè)耳發(fā)酵液對(duì)高脂飲食小鼠TG、CHO含量的影響Tab.2 Influence of Pleurotus spodoleucas zymotic fluid on TG,CHO content of high－fat diet mouse

表3 長(zhǎng)柄側(cè)耳發(fā)酵液對(duì)高脂飲食小鼠HDLC、LDLC含量的影響Tab.3 Influence of Pleurotus spodoleucas zymotic fluid on HDLC,LDLC content of high－fat diet mouse

2.2長(zhǎng)柄側(cè)耳發(fā)酵液對(duì)高脂飲食小鼠血清中AST、ALT含量的影響

AST、ALT測(cè)定結(jié)果見表4。

表4 長(zhǎng)柄側(cè)耳發(fā)酵液對(duì)高脂飲食小鼠AST、ALT含量的影響Tab.4 Influence of Pleurotus spodoleucas zymotic fluid on AST,ALT content of high－fat diet mouse

由表4可知，與空白組相比，模型組小鼠ALT、 AST含量顯著提高（p＜0.01）；與模型組相比，陽性組與發(fā)酵液各組AST、ALT含量均明顯降低（p＜0.01），說明陽性藥和長(zhǎng)柄側(cè)耳發(fā)酵液均具有降低高脂飲食小鼠血清中AST、ALT含量的功效。

2.3長(zhǎng)柄側(cè)耳發(fā)酵液對(duì)高脂飲食小鼠組織中SOD、MDA、GSH含量的影響

SOD、MDA、GSH含量測(cè)定結(jié)果見表5。

由表5可知，與空白組、模型組相比，陽性組和發(fā)酵液各組SOD活性均顯著提高（p＜0.01），說明其具有提高小鼠肝臟組織中SOD活性的功效；與空白組、模型組相比，陽性組和發(fā)酵液1組、3組、4組、5組MDA含量存在不同程度的降低，且存在顯著差異（p＜0.01或p＜0.05），說明上述各組能夠降低小鼠肝臟組織中MDA含量，與陽性組相比，發(fā)酵液1組、3組MDA含量明顯降低（p＜0.01），說明發(fā)酵液1組、3組降低MDA含量的能力優(yōu)于陽性藥；與模型組相比，發(fā)酵液1組、2組、5組中GSH含量明顯提高（p＜0.01），說明其能夠提高小鼠肝臟組織中GSH含量，與陽性組相比，發(fā)酵液1組、5組中GSH含量存在顯著差異（p＜0.01），說明其提高GSH含量的能力優(yōu)于陽性藥。

表5 長(zhǎng)柄側(cè)發(fā)酵液對(duì)高脂飲食小鼠組織中SOD、MDA、GSH含量的影響Tab.5 Influence of Pleurotus spodoleucas zymotic fluid on SOD,MDA,GSH content of high－fat diet mouse

3 討論

高脂血癥是一種比較常見的疾病，是由于血液內(nèi)血脂含量過高所造成。目前主要分為高膽固醇血癥、高甘油三脂血癥和二者都高的復(fù)合性高脂血癥。本文通過小鼠長(zhǎng)期的高脂飲食，使血清中的CHO、TG、LDLC含量高于正常值，HDLC含量低于正常值，形成復(fù)合性高脂血癥。以長(zhǎng)柄側(cè)耳發(fā)酵液進(jìn)行灌胃給藥后，上述異常指標(biāo)均能恢復(fù)到正常水平，證明長(zhǎng)柄側(cè)耳發(fā)酵液對(duì)高脂血癥有顯著的預(yù)防作用。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，高血脂可以直接引起脂肪肝，是形成脂肪肝的重要因素之一[3－8]。當(dāng)脂肪肝引起的肝功能發(fā)生病理改變時(shí)，可出現(xiàn)血清中AST和ALT含量增高的現(xiàn)象。長(zhǎng)柄側(cè)耳發(fā)酵液能使造模小鼠血清AST和ALT含量降至正常值，證明長(zhǎng)柄側(cè)耳發(fā)酵液在降低血脂的同時(shí)，具有保護(hù)肝臟的功效。

測(cè)定組織中MDA含量的高低可間接反映機(jī)體細(xì)胞受氧自由基損傷的程度，SOD和GSH是人體重要的抗氧化劑，測(cè)定其在組織中的含量可間接反映機(jī)體抗氧化的能力[9]。長(zhǎng)柄側(cè)耳發(fā)酵能夠提高小鼠的抗氧化能力，其中以1組、5組抗氧化能力最強(qiáng)。當(dāng)機(jī)體抗氧化能力提高時(shí)，可以抑制脂質(zhì)過氧化作用，從而對(duì)高脂血癥和脂肪肝起到輔助治療的作用。

綜上所述，長(zhǎng)柄側(cè)耳發(fā)酵液不僅對(duì)高脂血癥具有良好的預(yù)防作用，而且可以提高機(jī)體抗氧化能力，保護(hù)肝臟。根據(jù)各項(xiàng)指標(biāo)綜合分析，發(fā)酵液5組效果最為明顯，選定0.25 g·kg－1為小鼠最佳給藥計(jì)量，為進(jìn)一步研究長(zhǎng)柄側(cè)耳對(duì)高脂血癥是否有治療作用以及作用機(jī)理奠定基礎(chǔ)。

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Research on Pleurotus spodoleucas Zymotic Fluid’s Capability of Preventing Mice’s Hyperlipidemia,Liver Protection and Antioxidation

DENG Xi-bei,ZHOU Xian,ZHANG Nang,LI Ai-xin,WANG Shu-min
(School of Pharmaceutical Sciences Changchun University of Chinese Medicine,Changchun 130117,China)

The influence of Pleurotus spodoleucas Fr.zymotic fluid on high fat diet mouse’s blood fats,and the capability of liver protection and antioxidation were studied.Building a high－fat model of mice by high－fat diet while giving Pleurotus spodoleucas zymotic fluid,taking zhibituo as the control medicine and physiological saline as blank control,after 45 days of continuous intragastric administration,the content of TG,CHO,HDLC,LDLC,ALT,AST,SOD,MDA,GSH were detected.TG, CHO,LDLC,ALT,AST,MDA,GSH content of zymotic fluid group had decreased in varying degrees compared to model group. HDLC,SOD content had increased in varying degrees.Pleurotus spodoleucas zymotic fluid can prevent hyperlipidemia induced by high－fat diet while possesses the capability of liver protection and antioxidation.

Pleurotus spodoleucas;hypolipidemic;transaminase;superoxide dismutase;glutathione

A

1003-8310（2015）03-0037-04

10.13629/j.cnki.53－1054.2015.03.010

吉林省科技廳項(xiàng)目（201205050）。

鄧西貝（1986－），女，在讀碩士研究生，研究方向?yàn)槲⑸锱c生化藥物。E－mail:564757205@qq.com

**通信作者：王淑敏（1965－）女，博士，教授，主要從事中藥化學(xué)分析/藥用真菌的研究與開發(fā)方面研究工作。E－mail:446097156@qq.com

2015－02－15