36種植物提取物液對食用菌兩種競爭性木霉菌的抑制作用*

王剛正，曹現濤，邊銀丙

（華中農業大學應用真菌研究所，湖北 武漢 430070）

〈病蟲害防冶〉

36種植物提取物液對食用菌兩種競爭性木霉菌的抑制作用*

王剛正，曹現濤，邊銀丙**

（華中農業大學應用真菌研究所，湖北 武漢 430070）

木霉菌是食用菌生產中危害普遍和嚴重的一類病原菌，常引起培養料污染和菌絲體凋亡。本研究將35種植物提取液加入PDA培養基，篩選對綠色木霉（Trichoderma viride）和矩孢木霉（T.oblongisporum）具有抑制效果的植物材料。結果表明，商陸（Phytolacca acinosa） 水煎液對綠色木霉（T.viride） 抑制率達到了92.9%，蒲公英（Punica granatum）提取液對矩孢木霉抑制率達到73.5%。

植物提取液；木霉菌；殺菌作用；抑制率

木霉菌（Trichoderma spp.） 不僅可以污染食用菌已滅菌培養料或發酵料，而且可以感染雙孢蘑菇、平菇等菌絲體，引起菌袋或菌棒中菌絲體凋亡，造成極為嚴重的經濟損失[1-4]。食用菌生產場所多年反復使用，造成環境中木霉菌數量越來越多，如何使用安全有效的方法控制木霉菌繁衍和危害，減少化學試劑使用對環境造成的巨大壓力，是目前食用菌生產中面臨的重大問題。Sokovic等[5]發現牛至（Origanum vulgare） 精油對幾種木霉菌具有很好的抑制作用。Thierry R.等[6]發現百里香（Thymus mongolicus）精油對侵占木霉（T.aggressive）菌絲的生長產生很好的抑制作用。本研究采用35種植物提取液混入PDA培養基，觀察它們對綠色木霉（Trichoderma viride）和矩孢木霉（T.oblongisporum）的抑制作用。

1 材料與方法

1.1植物樣品與病原菌菌株來源

36種植物材料均為市售產品或作者采集，見表1。

表1 供試植物材料及其提取液制備方法Tab.1 Plant materials and methonds preparing extracts

綠色木霉（T.viride），矩孢木霉（T.oblongisporum）系華中農業大學應用真菌研究所保藏，經過形態學和ITS序列鑒定。龍葵（Solanum nigrum）果實、大蒜（Allium sativum）、洋蔥（Allium cepa）、紅花醡漿草（Oxalis rubra）等4種植物選用果實進行榨汁處理，龍葵（Solanum nigrum）地上部分和其它32種植物材料均采用烘干法處理。植物提取液采用滅菌或細菌過濾器除菌（表1）。

1.2植物提取液的制備方法

商陸和曼陀羅，稱干燥后的材料，加入蒸餾水煮沸，收集上層水煮液，重新加水煮沸，重復3次，合并3次收集的水煮液，將水煮液濃縮至100 mL，制成濃度為1 g·mL-1的水煮液，作為母液備用；將大蒜、龍葵果、洋蔥和紅花醡漿草與蒸餾水混合砸汁，作為母液；其它植物材料參考Shan B[7]和Ghassan Al-Samarrai[8]的方法提取植物活性成分，供試植物樣品烘干，并用粉碎機粉碎，過篩，然后與50%乙醇或丙酮或無菌水混勻，水浴，超聲波處理1 h，更換浸提液，重復3次，合并3次收集的浸提液，3 000 r·min-1離心10 min，除去廢渣，收集上清液，采用旋轉蒸發儀進行減壓濃縮，將上清液濃縮至20 mL，制成濃度為500 mg·mL-1的浸提液，作為母液備用。母液4℃保存。

1.3植物提取液室內抑菌效果的測定

采用2種方式將植物提取液滅菌或除菌，與PDA培養基混勻。一種方法是采用細菌過濾器（0.22 μm）將提取液過濾，然后與PDA培養基按1∶10混勻；另一種方法是滅菌，將提取液與PDA培養基按1∶10混合，121℃，滅菌30 min，或者將植物提取液121℃滅菌30 min后，再按1∶10與PDA培養基混勻。每個平皿中加入20 mL混勻培養基，接種6 mm菌絲塊，25℃培養，3 d～10 d后測量病原菌菌落生長速度。以加入50%酒精或無菌水到培養基中作為對照，每個處理重復5次，計算不同植物提取液對病原菌的抑制率。所有數據通過SPSS17.0分析軟件中的新復極差法（Duncan’s Multiple Range）進行差異顯著性分析。

2 結果與分析

2.1植物提取液對綠色木霉菌的抑菌作用

植物提取液對綠色木霉的抑制效果見表2。

商陸全草水煎液對綠色木霉菌（T.viride）菌絲抑菌率達到92.9%，與其它植物材料存在顯著差異。茶葉、龍葵、大蒜、朝天椒、蒼耳等植物提取液的抑制率均在60%以上（表2）。其它植物提取液對綠色木霉菌絲生長沒有明顯抑制作用，抑菌率介于1.1%～41.7%之間，紅花醡漿草、豬毛草、臭椿果等甚至有少許促進綠色木霉菌菌絲生長的作用。

2.2植物提取液對矩孢木霉的抑菌作用

植物提取液對矩孢木霉的抑制效果見表3。

表2 植物提取液對綠色木霉的抑制效果Tab.2 Inhibition effect of plant extracts on T.viride

表3 植物提取液對矩孢木霉的抑制效果Tab.3 Inhibition effect of plant extracts on T.oblongisporum

蒲公英全草醇提液對矩孢木霉（T. oblongisporum）抑菌率最高，達到73.5%，但抑制率與龍葵果、朝天椒、蒼耳、龍葵（地上部分）、花椒等間沒有顯著差異。龍葵果、朝天椒、蒼耳、龍葵、花椒、大蒜、茶等植物提取液對矩孢木霉的抑制率分別為71.7%、71.0%、69.5%、68.0%、67.9%、64.7%和60.6%。其它植物提取液對其抑制作用極小，抑制率均低于47.8%，而烏蓮莓對矩孢木霉菌絲生長有少許促進作用。

3 討論

本研究表明，龍葵、茶、朝天椒和大蒜提取液對2種木霉菌產生比較顯著的抑制作用，其中蒲公英提取液對矩孢木霉（T.oblongisporum） 抑制作用最強，商陸提取液對綠色木霉（T.viride）菌絲抑制率更是達到92.3%。與此相反，某些植物提取液對木霉菌菌絲生長有一定程度的促進作用，如烏蓮莓對矩孢木霉（T.oblongisporum） 菌絲生長有促進作用。本研究只用供試植物進行了菌絲生長抑制試驗，還需要進行濃度梯度篩選和大田試驗驗證，找到一條采用植物提取物防治木霉菌的途徑，同時避免長期使用化學藥劑使木霉菌產生抗性。

[1]徐耀波，文成敬.平菇和香菇代料栽培中污染真菌的研究[J].中國食用菌，23（2）：45-47.

[2]姜華芳，王富良，譚琦.香菇木霉病病原種類及其優勢種[J].上海農業學報，1995，11（2）：85-90.

[3]Hatvani L.,Antal Z.,Manczinger L.,et al.Green mold diseases of Agaricus and Pleurotus spp.are caused by related but phylogenetically different Trichoderma species [J].Ecology and Epidemiology,2007,97(4):532-537.

[4]Castle A,Speranzini D,Rghei N,et al.Morphological and molecular identification of Trichoderma isolates on North American Mushroom Farms[J].Applied and Environmental Microbiology,1998,64(1):133-137.

[5]Sokovic M,van Griensven LJLD.Antimicrobial activity of essential oils and their components against the three major pathogens of the cultivated button mushroom,Agaricus bisporus[J].European Journal of Plant Pathology,2006,116 (3):211-224.

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Antimicrobial Effect of Plant Extracts from 36 Species Against Competitive Trichoderma viride and T.oblongisporum from Edible Mushroom Cultivation

WANG Gang-zheng,CAO Xian-tao,BIAN Yin-bing
(Institute of Applied Mycology,Huazhong Agricultural University,Wuhan 430070,China)

Trichoderma spp.was a common and severe damage pathogen in edible fungi cultivation,which leaded to compost pollution and hypha apoptosis.In this study,36 plant extracts were added to PDA to test the inhibition effect against T.viride and T.oblongisporum.The results suggested that the inhibition rate of Phytolacca acinosa extract against T.viride was 92.9%. The inhibition ratio of Punica granatum extract on T.oblongisporum was 73.5%.

plant extract;Trichoderma spp.;antimicrobial effect;inhibition rate

S646.9

A

1003-8310（2015）02-0074-03

10.13629/j.cnki.53-1054.2015.02.019

國家現代農業產業技術體系項目資助（CARS-24）。

王剛正（1988-），男，博士，主要從事食用菌病害與分子生物學方面研究。E-mail:wgzhau@163.com

**通信作者：邊銀丙（1963-），男，教授，主要從事食用菌遺傳育種與生物技術方面研究。E-mail:bianyb.123@163.com

2015-01-30