豬藍(lán)耳病與豬瘟混合感染的診斷報(bào)告

李樹東

（1.黑龍江農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)職業(yè)學(xué)院動(dòng)物科技分院，黑龍江 154041；2.牡丹江浩博動(dòng)物保健科技服務(wù)中心，黑龍江 牡丹江 154041）

豬藍(lán)耳病與豬瘟混合感染的診斷報(bào)告

李樹東1，2

（1.黑龍江農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)職業(yè)學(xué)院動(dòng)物科技分院，黑龍江 154041；2.牡丹江浩博動(dòng)物保健科技服務(wù)中心，黑龍江 牡丹江 154041）

黑龍江省牡丹江市某豬場(chǎng)飼養(yǎng)生產(chǎn)母豬120余頭，2015年5月產(chǎn)房哺乳仔豬和保育仔豬開始發(fā)病，10～15日齡哺乳仔豬表現(xiàn)為腹瀉排黃色水樣糞便、發(fā)熱、食欲廢絕、呼吸加快（40～60次/min），呈腹式呼吸，已有5窩感染發(fā)病，幾乎全部死亡。保育豬主要表現(xiàn)為消瘦、發(fā)熱、喘，慢慢陸續(xù)發(fā)生死亡。母豬最近曾有1窩發(fā)生流產(chǎn)、死胎。為了確診該豬場(chǎng)發(fā)病病因，對(duì)病死仔豬進(jìn)行剖檢，應(yīng)用PCR、RT-PCR方法對(duì)常見豬瘟病毒（CSFV）、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、偽狂犬病病毒（PRV）、豬2型圓環(huán)病毒（PCV2）進(jìn)行了檢測(cè)，對(duì)送檢的3份豬血清進(jìn)行抗體檢測(cè)，細(xì)菌的分離鑒定。經(jīng)檢測(cè)，病死哺乳仔豬豬瘟病毒和豬藍(lán)耳病病毒均為陽性；保育仔豬藍(lán)耳病陽性；細(xì)菌培養(yǎng)分離試驗(yàn)未分離到致病菌。現(xiàn)將有關(guān)診斷報(bào)告如下。

豬藍(lán)耳病；豬瘟；混合感染；診斷

1 材料與方法

1.1 對(duì)發(fā)病豬進(jìn)行剖檢

主要的病變發(fā)生在肺部，肺臟心葉發(fā)生對(duì)稱性肉樣變，肺臟水腫、充血、淤血，肺臟彌散性間質(zhì)性肺炎的癥狀均有不同程度出現(xiàn)，喉頭未見異常，懷疑存在支原體的繼發(fā)感染（圖1）。全身淋巴結(jié)腫大、出血（圖2）。腎呈土黃色，表面凹凸不平（圖3）。脾臟邊緣發(fā)黑、梗死、不整（圖4）。腦充血、胃底充血，其他臟器未見異常。

1.2 病料采集及豬場(chǎng)免疫情況

圖1 肺臟肉樣變

圖2 淋巴結(jié)腫大出血

圖3 腎臟表面凸凹不平

圖4 脾臟發(fā)黑梗死

采取送檢新鮮死亡的仔豬的扁桃體、肺臟、腦組織和淋巴結(jié)。該豬場(chǎng)進(jìn)行過豬瘟免疫（21 d），豬偽狂犬病免疫（3 d，28 d）。

1.3 酶和其他試劑

Taq DNA聚合酶、dNTPs、DEPC水、DL2 000 Marker、總DNA抽提試劑盒均購自上海生工生物有限公司，豬瘟RT-PCR診斷試劑盒，豬繁殖與呼吸綜合征病毒RT-PCR診斷試劑盒、豬偽狂犬病PCR診斷試劑盒購自北京世紀(jì)元亨動(dòng)物防疫技術(shù)有限公司。豬瘟抗體檢測(cè)試劑盒、豬藍(lán)耳病檢測(cè)試劑盒、豬偽狂犬病gB抗體檢測(cè)試劑盒購自美國IDEXX生物試劑公司。

1.4 引物設(shè)計(jì)與合成

根據(jù)GenBank發(fā)表的PCV2用Oligo6.0軟件設(shè)計(jì)引物。

1.5 病毒核酸檢測(cè)

豬瘟病毒、豬藍(lán)耳病病毒、豬偽狂犬病病毒的擴(kuò)增分別用豬瘟RT-PCR診斷試劑盒、豬藍(lán)耳病RT-PCR診斷試劑盒、豬偽狂犬病毒PCR診斷試劑盒進(jìn)行，PCR產(chǎn)物經(jīng)1.2%瓊脂糖凝膠電泳鑒定。豬2型圓環(huán)病毒擴(kuò)增應(yīng)用總DNA抽提試劑盒提取模板，體外擴(kuò)增反應(yīng)條件95 ℃ 2 min；（94 ℃ 30 s，50 ℃ 40 s，72 ℃ 40 min）×35個(gè)循環(huán)，72 ℃延伸10 min，PCR產(chǎn)物經(jīng)1.2%瓊脂糖凝膠電泳鑒定。

1.6 豬ELISA抗體檢測(cè)結(jié)果

將送檢3份血樣離心分離血清，將稀釋后的血清加入檢測(cè)板，進(jìn)行 ELISA實(shí)驗(yàn)，將檢測(cè)板放入酶標(biāo)儀內(nèi)測(cè)各孔的OD值。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 RT-PCR擴(kuò)增后結(jié)果

豬瘟檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增后，PCR產(chǎn)物用1.2%瓊脂糖進(jìn)行凝膠電泳后在凝膠成像系統(tǒng)中觀察，可見到232 bp左右的基因條帶，大小與CSFV預(yù)期基因相符。

豬繁殖與呼吸綜合征病毒檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增后，PCR產(chǎn)物用1.2%瓊脂糖進(jìn)行凝膠電泳后在凝膠成像系統(tǒng)中觀察，可見到432 bp左右的基因條帶，大小與PRRSV預(yù)期基因相符（見圖5）。

圖5 CSF、PRRS擴(kuò)增結(jié)果

2.2 豬偽狂犬病病毒、豬2型圓環(huán)病毒

豬偽狂犬病病毒、豬2型圓環(huán)病毒檢測(cè)結(jié)果，將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用1.2%瓊脂糖進(jìn)行凝膠電泳，結(jié)果未見到目的基因。

2.3 抗體檢測(cè)結(jié)果

將送檢3份血樣離心分離血清，將稀釋后的血清加入檢測(cè)板，進(jìn)行 ELISA實(shí)驗(yàn)，將檢測(cè)板放入酶標(biāo)儀內(nèi)測(cè)各孔的OD值，結(jié)果見表1。

3 結(jié)果分析及防控建議

3.1 豬瘟結(jié)果分析

該豬場(chǎng)哺乳仔豬豬瘟病原檢測(cè)為強(qiáng)陽性，血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，送檢豬只豬瘟的抗體是合格的，說明哺乳仔豬發(fā)病主要是以窩為單位，發(fā)病的主要原因是母豬免疫不好或帶毒造成的，建議對(duì)初生仔豬進(jìn)行超免，對(duì)母豬群進(jìn)行抗體檢測(cè)，對(duì)不合格母豬進(jìn)行豬瘟疫苗的補(bǔ)免，之后再進(jìn)行檢測(cè)，將抗體值是陰性的母豬淘汰。

3.2 豬藍(lán)耳病結(jié)果分析

哺乳仔豬和保育豬藍(lán)耳病抗原均為陽性，說明豬群正存在藍(lán)耳病的暴發(fā)流行，是豬大批死亡的原因所在。從藍(lán)耳病抗體檢測(cè)結(jié)果分析，S/P值在未免疫疫苗的情況下還是比較高的。建議措施：

1）對(duì)發(fā)病豬立即隔離。發(fā)病較重的仔豬進(jìn)行淘汰，病死豬深埋。對(duì)豬舍和用具進(jìn)行徹底消毒。

2）控制發(fā)病豬群的繼發(fā)性細(xì)菌感染，即做好藥物保健和預(yù)防，應(yīng)用藥物替米考星、支原凈等對(duì)母豬進(jìn)行凈化。發(fā)病仔豬治療以補(bǔ)充電解質(zhì)和對(duì)癥用藥為主，控制繼發(fā)感染。使用減毒活疫苗，對(duì)初生仔豬和母豬進(jìn)行免疫。

3）進(jìn)行疫苗免疫，建議使用弱毒苗，對(duì)空懷期母豬進(jìn)行免疫，對(duì)新生仔豬7 d免疫。

4 討論

該場(chǎng)是我國北方中小型養(yǎng)豬場(chǎng)和散戶的典型代表，這些豬場(chǎng)往往在管理上和疫病防控上存在諸多的漏洞，沒有科學(xué)的管理和免疫程序，發(fā)生傳染病往往沒有科學(xué)的實(shí)驗(yàn)室診斷而延誤病情，這些豬場(chǎng)診斷疾病主要是依靠基層有經(jīng)驗(yàn)的獸醫(yī)剖檢進(jìn)行診斷，但現(xiàn)在的疾病從眼觀上病變都不是十分的明顯、典型，而且混合感染、繼發(fā)感染都比較嚴(yán)重，臨床發(fā)病越來越嚴(yán)重，藥物濫用而不見效果。有時(shí)豬場(chǎng)老板對(duì)獸醫(yī)人員的疾病診斷產(chǎn)生質(zhì)疑和不信任感，使得治療執(zhí)行力下降，延誤最佳治療時(shí)機(jī)[1-2]。中小型養(yǎng)豬場(chǎng)和散戶中豬病的流行和泛濫是以上諸多原因造成的。

該場(chǎng)仔豬的死亡主要是藍(lán)耳病暴發(fā)的結(jié)果，就目前我國豬藍(lán)耳病的發(fā)病情況來看，無論什么季節(jié)都會(huì)有豬藍(lán)耳病發(fā)病的案例，但是發(fā)病最密集的季節(jié)為夏秋季，一般情況下豬藍(lán)耳病發(fā)病時(shí)會(huì)呈現(xiàn)成片感染趨勢(shì)，受感染豬群的發(fā)病率以及死亡率都非常高[3-4]。對(duì)于藍(lán)耳病的防控應(yīng)做到掌握和了解本場(chǎng)感染和流行狀況，主要應(yīng)用血清學(xué)抗體檢測(cè)技術(shù)。對(duì)于藍(lán)耳病陰性豬場(chǎng)，不使用疫苗是最佳的手段，此外，應(yīng)該做好生物安全措施，豬場(chǎng)進(jìn)行閉群飼養(yǎng)，盡量避免引種，如確實(shí)需要引種，必須檢測(cè)和檢疫，絕對(duì)不能引入陽性豬。還需定期對(duì)豬場(chǎng)進(jìn)行監(jiān)測(cè)，保持藍(lán)耳病陰性狀態(tài)。對(duì)藍(lán)耳病穩(wěn)定而不活躍的豬場(chǎng)（母豬群陽性，但繁殖性能不受影響；生長豬群無感染），應(yīng)做到以下幾點(diǎn)：應(yīng)盡量不用減毒活疫苗免疫，此外還應(yīng)加強(qiáng)母豬的飼養(yǎng)管理，定期監(jiān)測(cè)其感染狀況；強(qiáng)化豬場(chǎng)的消毒與衛(wèi)生，防止母豬排毒在豬場(chǎng)內(nèi)傳播；后備陰性母豬配種前與經(jīng)產(chǎn)母豬混群飼養(yǎng)；監(jiān)測(cè)生產(chǎn)豬群的血清學(xué)。對(duì)藍(lán)耳病穩(wěn)定而活躍的豬場(chǎng)（母豬群陽性，但繁殖性能不受影響；生長豬群有感染，臨床發(fā)病，因繼發(fā)感染有一定死亡率；病毒在豬場(chǎng)內(nèi)傳播），應(yīng)強(qiáng)化豬場(chǎng)的消毒衛(wèi)生，降低或杜絕病毒在豬場(chǎng)內(nèi)傳播；適當(dāng)使用減毒活疫苗，依據(jù)實(shí)驗(yàn)室確診的生長豬群的感染和發(fā)病階段，提前3～4周為生產(chǎn)豬群進(jìn)行一次免疫，豬群穩(wěn)定后應(yīng)立即停止使用活疫苗[5]；控制感染豬群的繼發(fā)性細(xì)菌感染，即做好藥物保健和預(yù)防。

表1 豬抗體水平檢測(cè)結(jié)果

[1] 葛玉.仔豬藍(lán)耳病與豬瘟混合感染的診治報(bào)告[J].北方牧業(yè)，2012(23)，21.

[2] 張立娟，劉超，韓艷玲.豬瘟和豬藍(lán)耳病感染的診斷與防治[J].畜牧獸醫(yī)科技信息，2009(3)，78.

[3] 高建華，田克恭，遇秀玲，等.藍(lán)耳病問題面面觀[J].今日養(yǎng)豬業(yè)，2015(2)：54-57.

[4] 張建新，王旭田，司獻(xiàn)軍.高致病性豬藍(lán)耳病及其防控[J].中國動(dòng)物保健，2007（7）：17-18.

[5] 李華， 楊漢春， 郭玉璞. 豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）感染的免疫學(xué)研究進(jìn)展[J]. 中國獸醫(yī)雜志，1999， 25(9)：40-42.

2015-07-17）

黑龍江省教育廳高職高專科學(xué)研究項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：12525074）

李樹東，男，碩士，1982年出生，研究方向：動(dòng)物傳染病診斷檢測(cè)工作。