白細(xì)胞介素22在HBV相關(guān)性肝病中的表達(dá)及意義*

趙孝榮吳繼周

白細(xì)胞介素22在HBV相關(guān)性肝病中的表達(dá)及意義*

趙孝榮①吳繼周①

目的：探討白細(xì)胞介素22在HBV相關(guān)性肝病中的表達(dá)及意義。方法：酶聯(lián)免疫法檢測(cè)30例慢性乙型肝炎無癥狀攜帶者（ASC）、40例慢性乙型肝炎活動(dòng)期（CHB）患者、45例慢性乙型肝炎后肝硬化（LC）患者、30例原發(fā)性肝癌（HCC）患者、25例健康對(duì)照者外周血清中IL-22水平。分析IL-22與腫瘤標(biāo)志物AFP的相關(guān)性。結(jié)果：CHB組、LC組、HCC組外周血IL-22水平均高于對(duì)照組（P=0.010、0.003、0.000）。外周血清IL-22水平與AFP之間無相關(guān)性。結(jié)論：IL-22可能在肝臟慢性纖維化、肝癌發(fā)生方面可能起一定作用。

白介素-22； 乙型肝炎； 肝疾病

長期的慢性乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染是肝纖維化、肝硬化、肝功能失代償及肝癌的高危因素。HBV相關(guān)性肝病發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)紊亂導(dǎo)致病毒不能有效清除，引起慢性炎癥。白細(xì)胞介素22（Interleukin-22，IL-22）可由輔助性T細(xì)胞17（T help cell 17，Th17）及Th22細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞等產(chǎn)生。IL-22與IL-19、IL-20、IL-24、IL-26、IL-28及IL-29同屬IL-10細(xì)胞因子家族，是Th22、Th17等活化后的重要效應(yīng)分子[1]。既往已有諸多研究表明[2]，IL-22可能在多種炎癥性疾病或自身免疫性疾病中具有雙重作用。本研究針對(duì)HBV相關(guān)性慢性乙型肝炎無癥狀攜帶者（asymptomatic carrier， ASC）、慢性乙型病毒性肝炎活動(dòng)期（CHB）、乙肝肝硬化（LC）、原發(fā)性肝癌（HCC）患者血清IL-22的變化以及甲胎蛋白（AFP）的指標(biāo)進(jìn)行初步研究，探討IL-22與乙肝病毒感染相關(guān)性肝病的表達(dá)及意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012-2014年在本院門診就診及住院的乙肝表面抗原（HBsAg）陽性患者145例，其中ASC 30例，CHB 40例，LC 45例，HCC 30例。診斷標(biāo)準(zhǔn)符合《慢性乙型肝炎防治指南》（2010年）、《WHO消化系統(tǒng)腫瘤病理學(xué)和遺傳學(xué)》（2010 年）、《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范》（2011年）。同時(shí)排除合并有自身免疫性疾病或HBV以外的其他病毒感染，且無慢性病史。排除6個(gè)月內(nèi)接受抗病毒及免疫調(diào)節(jié)治療的患者。另外隨機(jī)抽取25例健康體檢者作為本次試驗(yàn)的健康對(duì)照組（health control，HC）。各組研究對(duì)象的一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性，見表1。

表1 各組研究對(duì)象的一般資料

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集和處理 采集研究對(duì)象空腹外周靜脈血5 mL，于室溫放置2 h后予離心，并分裝血清置于-80 ℃低溫冰箱凍存，待集中檢測(cè)。同步留取血清標(biāo)本測(cè)定AFP。

1.2.2 應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）檢測(cè)血清中IL-22水平 采用ELISA試劑盒（武漢華美生物技術(shù)有限公司）檢測(cè)血清中IL-22水平，嚴(yán)格按照說明書要求操作，使用美國Themo Electron Corporation的Multiskan MK3全自動(dòng)酶標(biāo)儀監(jiān)測(cè)檢測(cè)OD值，經(jīng)Curve Expert軟件分析測(cè)得樣本水平。使用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)AFP。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料如呈正態(tài)，以（±s）表示，多組均數(shù)比較用單因素方差分析（one-way ANOVA），進(jìn)一步進(jìn)行組間比較，采用LSD-t檢驗(yàn)法；相關(guān)分析采用spearman檢驗(yàn)，計(jì)量資料如呈偏態(tài)分布，以中位數(shù)M（P25，P75）表示，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

各組外周血清IL-22水平及與腫瘤標(biāo)記物AFP的相關(guān)性分析：（1）與正常對(duì)照組相比，HBV相關(guān)的不同肝病患者之間，IL-22水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=4.740，P=0.001）。組間比較發(fā)現(xiàn)CHB組、LC組、HCC組外周血IL-22水平均高于對(duì)照組（P=0.010、0.003、0.000），ASC組IL-22水平與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表2。（2）通過對(duì)各組患者IL22水平與腫瘤標(biāo)記物AFP的相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)：外周血清IL-22水平與AFP之間均無相關(guān)性（P＞0.05），見表2。

表2 各組外周血清IL-22水平及AFP的比較（±s）

表2 各組外周血清IL-22水平及AFP的比較（±s）

注：r表示相關(guān)系數(shù)

組別IL-22（pg/mL）AFP（ng/mL）r值P值A(chǔ)SC組（n=30） 97.2±19.5 2.15±1.110.2150.376 CHB組（n=40）123.8±17.7 4.08±2.880.1070.684 LC組（n=45）130.4±21.5 5.17±5.370.3260.153 HCC組（n=30）161.7±23.0 10 867.30±6088.870.1480.500對(duì)照組（n=25） 62.2±15.9---

3 討論

IL-22，一開始被命名為IL-10相關(guān)的T細(xì)胞來源的誘導(dǎo)因子（IL-10-related T cell derived inducible factor， IL-TIF）。IL-10R2與IL-22R1組成的異源二聚體受體復(fù)合物，IL-22與之結(jié)合，進(jìn)一步激活下游信號(hào)傳導(dǎo)通路，從而完成信號(hào)系統(tǒng)的傳導(dǎo)[3]。當(dāng)前，IL-22在肝臟各類疾病中的作用已在動(dòng)物模型中得到廣泛研究，有多篇研究證明，IL-22在肝損傷中具有直接的保護(hù)及協(xié)助再生作用，并且IL-22受體在肝臟中高表達(dá)，提示肝細(xì)胞是IL-22的重要效應(yīng)細(xì)胞[4-5]。多項(xiàng)實(shí)驗(yàn)研究表明，IL-22在急性乙型病毒性肝炎（acute hepatitis B）和慢性乙型病毒性肝炎患者的肝內(nèi)表達(dá)是增高的[6-7]。楊智等[8]發(fā)現(xiàn)肝硬化患者外周血清IL-22的表達(dá)水平升高，推測(cè)其原因是IL-22升高從而導(dǎo)致患者清除病毒的能力下降，從而使病情進(jìn)入慢性遷延期。在體外試驗(yàn)中，IL-22可以促進(jìn)肝細(xì)胞分泌能夠啟動(dòng)、促進(jìn)肝細(xì)胞再生的細(xì)胞因子IL-6及TNF-α[9]。而IL-22的保護(hù)作用，考慮與抗氧化、抗炎以及誘導(dǎo)肝細(xì)抗凋亡有關(guān)，其機(jī)制可能包括上調(diào)表達(dá)紅素氧合酶1、氧化還原因子1以及顯著增強(qiáng)STAT3（轉(zhuǎn)錄活化蛋白）的激活[10]。本研究中ASC組IL-22水平與健康對(duì)照組比較，差異并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），原因可能為機(jī)體尚處于免疫耐受期，不發(fā)生免疫應(yīng)答有關(guān)；HBV相關(guān)性肝病中，CHB患者、LC患者、HCC患者外周血IL-22表達(dá)水平依次增加，HCC患者最高，與健康對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.001）。這表明在慢性HBV感染時(shí)IL-22參與了肝臟的免疫及病理過程，考慮到動(dòng)物模型中IL-22中的護(hù)肝作用，本研究推測(cè)CHB患者體內(nèi)血清IL-22含量升高可能具有一定的保護(hù)作用。由于IL-22能夠間接促進(jìn)肝細(xì)胞的修復(fù)及再生，促進(jìn)損傷肝細(xì)胞的存活，從而起到保護(hù)肝臟的作用， 但是IL-22的長期刺激有可能促進(jìn)肝炎向前發(fā)展，LC患者體內(nèi)血清IL-22含量升高則在肝臟慢性纖維化方面可能起一定作用。另有動(dòng)物研究顯示，注射IL-22致使細(xì)胞周期蛋白D1的升高從而造成肝細(xì)胞再生能力的增強(qiáng)，對(duì)二乙基亞硝胺（DEN）誘導(dǎo)HCC的易感性增加，而IL-22基因敲除小鼠形成HCC的易感性明顯降低，那些在炎癥損傷過程中存活的肝細(xì)胞則有可能成為原發(fā)性肝癌的前體細(xì)胞[6，11-12]。本研究通過檢測(cè)外周血血清IL-22水平，發(fā)現(xiàn)HCC組外周血中IL-22水平確實(shí)高于正常對(duì)照組。同時(shí)也提示在肝癌患者體內(nèi)IL-22參與了腫瘤免疫機(jī)制的調(diào)節(jié)。

有研究發(fā)現(xiàn)在人類肝臟癌細(xì)胞株中，IL-22能誘導(dǎo)急性期蛋白質(zhì)的表達(dá)，參與體內(nèi)炎性反應(yīng)[13]。進(jìn)一步在動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)研究中發(fā)現(xiàn)，IL-22能上調(diào)Bcl-2、Bcl-xL和細(xì)胞周期蛋白D等促進(jìn)小鼠肝干細(xì)胞系BMOL的增殖并抑制其凋亡[14]。但有學(xué)者發(fā)現(xiàn)IL-22可調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞周期，使其細(xì)胞周期停滯在G2/ M期，抑制腫瘤細(xì)胞增殖[15-18]。故IL-22在肝癌中的作用具體機(jī)制仍待進(jìn)一步研究。因HCC組外周血中IL-22水平高于健康對(duì)照組，且IL-22對(duì)肝癌發(fā)生發(fā)展可能起一定作用，故本研究將HBV相關(guān)性肝病各組腫瘤標(biāo)志物AFP與外周血IL-22水平進(jìn)行相關(guān)性分析，得出IL-22與AFP無相關(guān)性的結(jié)果。但由于本研究中各組樣本量較少，仍需要搜集大量樣本進(jìn)行深入研究。這些研究提示，IL-22參與HBV感染及病程進(jìn)展的各個(gè)過程中發(fā)揮重要作用，LC、HCC患者IL-22含量升高可能在肝臟慢性纖維化、肝癌發(fā)生方面可能起一定作用，其機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。IL-22有可能成為治療HBV相關(guān)性疾病的一個(gè)新靶點(diǎn)。

[1] Dumoutier L， Louahed J， Renauld J C.Cloning and characterization of IL-10-related T cell-derived inducible factor （IL-TIF）， a novel cytokine structurally related to IL-10 and inducible by IL-9[J].J Immunol，2000，164（4）：1814-1819.

[2] Zhang N， Pan H F， Ye D Q.Th22 in inflammatory and autoimmune disease：prospects for therapeutic intervention[J].Mol Cell Biochem，2011，353（1-2）：41-46.

[3] Xie M H， Aggarwal S， Ho W H， et al.Interleukin （IL）-22， a novel human cytokine that signals through the interferon receptor-related proteins CRF2-4 and IL-22R[J].J Biol Chem，2000， 275（40）：31 335-31 339.

[4] Xiang X， Gui H， King J N， et al.IL-22 and non-ELR-CXC chemokine expression in chronic hepatitis B virus-infected liver[J]. Immunol Cell Biol，2012，90（6）：611-619.

[5] Ki S H， Park O， Zheng M， et al.Interleukin-22 treatment ameliorates alcoholic liver injury in a murine model of chronic-binge ethanol feeding：role of signal transducer and activator of transcription 3[J]. Hepatology，2010， 52（4）：1291-1300.

[6] Park O， Wang H， Weng H， et al.In vivo consequences of liverspecific interleukin-22 expression in mice：Implications for human liver disease progression[J].Hepatology，2011，54（1）：252-261.

[7] Zhang Y， Cobleigh M A， Lian J Q， et al.A proinflammatory role for interleukin-22 in the immune response to hepatitis B virus[J]. Gastroenterology，2011， 141（5）：1897-1906.

[8]楊智，陳洪濤，張毅，等.IL-22和IL-17 mRNA在慢性HBV感染者PBMCs中的表達(dá)及其意義[J].世界華人消化雜志，2012，20（34）：3380-3384.

[9] Brand S， Dambacher J， Beigel F， et al.IL-22-mediated liver cell regeneration is abrogated by SOCS-1/3 overexpression in vitro[J].Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol，2007，292（4）：G1019-1028.

[10] Xing W W， Zou M J， Liu S， et al.Hepatoprotective effects of IL-22 on fulminant hepatic failure induced by d-galactosamine and lipopolysaccharide in mice[J].Cytokine，2011， 56（2）：174-179.

[11] Wang Z， Yang L， Jiang Y， et al.High fat diet induces formation of spontaneous liposarcoma in mouse adipose tissue with overexpression of interleukin 22[J].PLoS One，2011， 6（8）：e23 737.

[12] Jiang R， Tan Z， Deng L， et al.Interleukin-22 promotes human hepatocellular carcinoma by activation of STAT3[J].Hepatology，2011， 54（3）：900-909.

[13] Dumoutier L， Van Roost E， Colau D， et al.Human interleukin-10-related T cell-derived inducible factor：molecular cloning and functional characterization as an hepatocyte-stimulating factor[J].Proc Natl Acad Sci USA，2000， 97（18）：10 44-10 149.

[14] Feng D， Kong X， Weng H， et al.Interleukin-22 promotes proliferation of liver stem/progenitor cells in mice and patients with chronic hepatitis B virus infection[J].Gastroenterology，2012， 143（1）：188-198.

[15] Wolk K， Kunz S， Witte E， et al.IL-22 increases the innate immunity of tissues[J].Immunity，2004， 21（2）：241-254.

[16]童慶東,陳菊梅.干擾素治療長期肝酶正常肝組織病理改變明顯HBV感染療效觀察[J].中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2012，9（31）：98-99.

[17]楊蘭艷,劉海,鄭盛.慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平與肝纖維化指標(biāo)的相關(guān)性研究[J].中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2011，8（14）：45-46.

[18]錢明,鄺健輝,陳建華,等.慢性乙型肝炎患者血清中HBeAg水平與HBV-DNA載量的相關(guān)性分析[J].中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2011，8（26）：110-111.

Expression and Significance of Interleukin-22 in HBV Related Liver Diseases/

ZHAO Xiao-rong，WU J izhou.//Medical Innovation of China，2015，12（12）：001-003

Objective：To explore the expression and significance of IL-22 in HBV related liver diseases. Method：Whole vein blood was obtained from healthy control（HC）（n=25）and experimental groups including the patients with asymptomatic carrier（ASC）（n=30），chronic hepatitis B（CHB）（n=40），liver cirrhosis（LC）（n=45），hepatocellular carcinoma（HCC）（n=30）.The level of serum IL-22 were analysed by ELISA.Statistical analysis of the relevance of IL-22 levels and AFP was performed.Result：IL-22 level in the CHB group，LC group， and the HCC group were higher than that in the healthy control （P=0.010，0.003，0.000）.IL-22 levels had no correlation with AFP. Conclusion：IL-22 may contributed to the occurrence and the development of liver fibrosis and hepatocellular carcinoma.

Interleukin-22； Hepatitis B； Liver diseases

10.3969/j.issn.1674-4985.2015.12.001

2015-01-03） （本文編輯：蔡元元）

國家自然科學(xué)基金（30960170）；廣西教育廳重點(diǎn)課題基金項(xiàng)目（桂教201202ZD021）

①廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院 廣西 南寧 530021

吳繼周

First-author’s address：The First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University，Nanning 530021，China