尿RBP、尿mAlb、β2-MG、NAG酶聯合檢測在糖尿病早期腎損害診斷中的意義

張碧蓮

(上饒市立醫院檢驗科，江西上饒334000)

尿RBP、尿mAlb、β2-MG、NAG酶聯合檢測在糖尿病早期腎損害診斷中的意義

張碧蓮

(上饒市立醫院檢驗科，江西上饒334000)

目的探討聯合檢測尿液視黃醇結合蛋白(RBP)、微量白蛋白（mAlb)、β2-微球蛋白(β2-MG)、N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(NAG)在糖尿病早期腎損害診斷中的價值。方法將100例糖尿病早期腎損害患者作為糖尿病組和100例健康人作為正常對照組的尿液標本檢測RBP、mAlb、β2-MG、NAG酶的含量，分析檢測數據，建立病例資料檔案，評價各項生物標記物的敏感性以及聯合檢測的敏感性。結果尿液RBP、mAlb、β2-MG、NAG酶在糖尿病早期腎損害中均有不同程度的增高，與正常對照組比較均有顯著性差異（P＜0.05），聯合檢測此四項指標可顯著提高糖尿病早期腎損害的診斷率。結論聯合檢測尿液RBP、mAlb、β2-MG、NAG酶是診斷糖尿病早期腎損害敏感的實驗室指標。

糖尿病；早期腎損害；尿RBP；尿mAlb；β2-MG；NAG酶；聯合檢測

糖尿病腎病是糖尿病全身微血管病變的主要并發癥，早期無明顯臨床表現，常規檢測項目如尿蛋白定性、尿素氮、肌酐等均正常，難以發現腎臟早期的損傷，一旦出現臨床表現預后較差。因此，對糖尿病腎病的早期診斷、治療，阻止或延遲腎病的發生和發展，是當前臨床研究的重要課題。本研究檢測100例糖尿病早期腎損傷患者及100例健康人尿液中的RBP、mAlb、β2-MG、NAG酶，以探討多項聯合檢測在糖尿病早期腎損傷診斷中的價值。

1 對象與方法

1.1 研究對象選擇2014年1月-2015年6月期間在我院門診及住院的糖尿病患者100例為糖尿病組，其中男性58例，女性42例，年齡26～72歲，以上患者均根據臨床癥狀、空腹血糖、糖耐量及胰島素釋放試驗確診為糖尿病，所有患者臨床排除各種腎病、尿路感染、高血壓、酸中毒等，Urea、Cr和肝功能均正常，尿蛋白定性陰性，尿白蛋白排泄率在20～200mg/24h具有早期腎損害的指標。另選擇100例來我院體檢中心健康體檢者作為正常對照組，其中男性55例，女性45例，年齡30～70歲，均無腎病、糖尿病、高血壓、血液病及其他嚴重疾病，近期未服用任何藥物。

1.2 標本收集所有入選本組受試者經知情同意后，留取新鮮晨尿10ml，3000r/min（離心半徑12cm）離心10min，取上清液約5ml按操作程序上機檢測，同時檢測質控尿液。

1.3 儀器、試劑及檢測方法尿液RBP、mAlb、β2-MG采用乳膠增強免疫比濁法，檢測試劑由德賽診斷系統（上海）有限公司提供。NAG采用終點比色法，檢測試劑由寧波美康生物科技有限公司提供，以上指標均在AU-640上檢測。

1.4 各項指標參考區間⑴尿RBP參考值：< 0.7mg/L；⑵尿mAlb參考值：<25mg/L；⑶尿β2-MG參考值：<0.2mg/L；(4)尿NAG酶參考值：<18.5U/L。1.5統計學處理所有數據均采用SPSS 13.0軟件進行統計學處理，結果以均數±標準差表示，在方差齊性的情況下進行卡方或t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2．1糖尿病組尿液中的RBP、mAlb、β2-MG、NAG酶結果明顯高于正常對照組，差異有統計學意義（P<0.05），具體數據詳見表1。

表1 糖尿病組與正常對照組四項指標水平（）

表1 糖尿病組與正常對照組四項指標水平（）

組別糖尿病組正常對照組n 100 100 RBP（mg/L）mAlb（mg/L）β2-MG（mg/L）NAG(U/L) 1.18±0.62 0.25±0.14 45.3±25.5 8.5±2.1 0.30±0.13 0.10±0.02 52.4±37.6 6.4±2.3

2.2 糖尿病患者尿液RBP、mAlb、β2-MG、NAG酶超過正常上限（x±2s）的陽性例數及百分率的比較，詳見表2。

表2 糖尿病患者尿液RBP、mAlb、β2-MG、NAG酶超過正常上限（x±2s）的陽性例數及百分率

3 討論

糖尿病腎病（Diabetic Nephropathy，DN）是糖尿病引起的嚴重和危害性最大的一種慢性并發癥，主要特點是糖尿病所引起的微血管病變而導致的腎小球硬化。隨著糖尿病治療手段及技術的不斷進步，死于糖尿病急性并發癥如酮癥酸中毒的患者越來越少，但是糖尿病并發的心血管疾病和腎臟疾病卻成為近年來糖尿病患者的主要致死、致殘原因。糖尿病腎病不僅出現在Ⅰ型糖尿病，近年來發現2型糖尿病也會發展為糖尿病腎病。有學者研究表明，在腎病初期可實現逆轉，但一旦病人出現持續蛋白尿，病情將無法得到有效控制甚至死亡。因此，對糖尿病早期腎損害的診斷顯得尤為重要。檢測尿中的RBP、mAlb、β2-MG、NAG酶具有取材容易、無損傷、靈敏、特異性高等特點，可作為診斷糖尿病早期腎損害的靈敏指標。

早期糖尿病腎病由于持續高血糖使腎小球基底膜增厚和細胞外基質增生以及系膜擴張，而導致腎小球高濾過和蛋白尿，在DN的早期，在腎小球濾過膜受損時它表面的電荷屏障遭到破壞，白蛋白的濾出量大于近曲小管重吸收量時將會出現在尿中，表現為微量蛋白尿[1]。近年的研究認為，糖尿病早期已伴有腎小管和腎間質病變，因此患者尿液中的RBP、mAlb、β2-MG、NAG酶的排泄均有不同程度的增加，且與正常對照組相比較差異顯著。

RBP是肝臟分泌的一種低分子量蛋白，主要功能是將視黃醇從肝細胞轉運到上皮細胞，血漿中的RBP約有90%與甲狀腺素結合前蛋白結合，形成高分子蛋白復合物[2]，因此不被腎小球濾過膜濾過，當視黃醇被轉運到靶細胞后，RBP便游離到血漿中，迅速被腎小球濾過，幾乎全部被腎近曲小管重吸收而分解。正常情況下，RBP在尿中穩定性強，不易分解，不受PH和血壓干擾，RBP排量很少，但在腎近曲小管損傷時，尿排量明顯增加，所以RBP排量可作為腎近曲小管損傷的標志物[3]。mAlb生理條件下出現于尿液中的量極微，是反映腎小球濾過膜受損的早期敏感指標[4]。正常人體內的β2-MG的生成和釋放速度是非常恒定的，且能自由通過腎小球濾過膜，原尿中的99.9%的β2-MG可被腎小管上皮細胞重吸收和降解，當腎近曲小管輕微受損時，對β2-MG重吸收下降，使尿中β2-MG含量增加[5]。NAG酶是大分子糖蛋白，其主要合成和貯存器官是腎臟，以近曲小管上皮細胞含量最高，可反映近曲小管功能的改變[6]。

在對DN患者的研究發現混合性蛋白尿同腎小球和腎小管的損傷密切相關，聯合監測尿微量白蛋白和RBP對于診斷更有意義[7]。如表二所示，兩項聯合檢測中，RBP和mAlb的聯合檢測陽性率可達65%，比其他的兩項聯合檢測陽性率要高。因此多項目檢測相對于單個項目檢測，能夠涵蓋腎小球損傷、腎小管損傷、感染及氧化應激等多個方面，對于DN患者早期腎損傷的診斷和治療有積極意義。有研究顯示，在對年輕糖尿病患者尤其是有微血管病變的患者進行尿的NAG分泌速率測定時發現，患者的前天夜間和第二天上午的尿NAG和肌酐比值測定的結果顯示，糖尿病患者第二天上午的尿NAG和肌酐比值顯著高于前天夜間的比值，并且有并發癥的患者其第二天上午的尿NAG和肌酐比值也顯著高于前天夜間的比值，但是比值本身同血壓、性別、疾病進展、胰島素依賴及尿糖無關[8]。在DN患者的早期尿液標志物中研究發現對NAG和尿白蛋白的排泄率進行聯合監測能夠鑒別DN患者的易感性，聯合監測比起單個項目監測能夠得出一個更好的預測模型[9]。在對糖尿病患者尿液進行蛋白質組學研究發現，在經過硫胺素治療后，發現只有34%患者中尿白蛋白含量降低，但其他尿液蛋白質標志物沒有顯著變化[10]，證實多項目檢測對于DN患者早期腎損傷的診斷和治療有一定意義。從表2可看出單項檢測這四項指標的陽性率較低，兩項聯合檢測陽性率提高不明顯，三項聯合檢測陽性率較高，四項聯合檢測陽性率最高，可達89%。

因此糖尿病腎病患者的早期腎損傷的生物標記指標多，采用單個指標檢測容易受到運動、尿路感染、晝夜排泄量、高血壓、心功能不全和急性發熱等影響，各個指標的影響因素眾多，單個指標的應用不能起到應有的作用，我們課題組希望通過對患者和正常人群的尿中視黃醇結合蛋白、尿微量白蛋白、β2微球蛋白、NAG酶聯合檢測，確定糖尿病腎病患者早期腎損傷的危險因素，并進一步建立糖尿病腎病患者早期腎損傷的診斷模型，從而在糖尿病腎病早期診斷、療效評估及預后等方面發揮作用。

[1]Verhave JC，Gansevoot RT，Hillege HL，et al.An elevate urinary albumin exeretion predicts de novo development of renal function impairement in the general population[J].kidney Int，2004，92 (Suppl)：S18-21.

[2]劉連紅，馬艷紅，羅建祥.高血壓病早期腎損害患者尿視黃醇結合蛋白檢測的臨床意義[J].實用醫學雜志，2010，26（7）：1177-1178.

[3]Titan SM，Vieira JM，Dominguez WV，et al.Urinary MCP-1 and RBP；Independent predictors of renal outcome in macroalminuric diabetic nephropathy[J].J Diabetes Complicat，2012，26（6）：546-553.

[4]王小虎，孫良閣.苯那撲利對早期糖尿病腎病患者轉化生長因子β1、尿白蛋白排泄率的影響[J].中華實用診斷與治療雜志，2009，23(12)：1222-1224.

[5]劉志紅.糖尿病腎病.中華腎臟病雜志，2000，16(2)：126-131.

[6]雷厲.相關腎臟早期腎損害指標對早期糖尿病腎病的診斷價值[J].熱帶醫學雜志，2006，6（8）：942-943.

[7]Holm J，Hemmingsen L，Nielsen NV.Relationship between the urinary excretion of albumin and retinol-binding protein in insulindependent diabetics[J].Clin Chim Acta，1988，177（1）：101-105.

[8]Lorini R，Scaramuzza A，Cortona L，et al.Increased urinary N-acetyl-glucosaminidase(NAG)excretion in young insulin-dependent diabetic patients[J].Diabetes Res Clin Pr，1995，29（2）：99-105.

[9]Kern EF，Erhard P，Sun W，et al.Early Urinary Markers of Diabetic Kidney Disease：A Nested Case Control Study From the Diabetes Control and Complications Tria1(DCCT)[J].A J K D，2010，55（5）：824-834.

[10]Riaz S，Skinner V，Srai SK.Effect of high dose thiamine on the levels of urinary protein biomarkers mellitus type 2[J].J Pharm Biomed Anal，2011，54（4）：817-825.

R587.1，R446.12+2

A

1674-1129(2015)06-0756-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2015.06.023

2015-06-26；

2015-09-02)

江西省上饒市衛生計生委資助課題（20151CZD10）