維胺酯在大鼠體內的血藥濃度及組織分布

王鵬 張蓓蓓 繆曉輝? 倪武

維胺酯在大鼠體內的血藥濃度及組織分布

王鵬 張蓓蓓 繆曉輝? 倪武

目的 研究SD大鼠口服維胺酯（Via）后體內的血藥濃度及組織分布情況。方法 大鼠口服Via后，通過高效液相色譜檢測各時間點血漿和組織中藥物濃度，采用DAS2.0軟件進行房室模型擬合并計算藥物動力學參數。結果 大鼠口服Via125 mg/kg，所得血漿藥時曲線符合二室模型，主要藥代動力學參數：t1/2（β）為（2.22±0.52）h；Tmax為（0.83±0.13）h；Cmax為（3.90±1.05）mg/L。Via口服后15min內可迅速分布至各主要組織器官，1 h后藥物在脂肪組織濃度最高，皮膚、肌肉組織次之，骨骼最低。7 h后各組織藥物濃度均明顯下降。結論 Via在體內吸收迅速、清除較快、分布廣泛，在脂肪和皮膚組織中濃度最高。

維胺酯 血藥濃度 組織分布 高效液相色譜

目前Via已廣泛應用于多種皮膚病治療，尤其對中、重度痤瘡療效顯著［2，3］，然而，該藥物在皮膚及其他組織器官中的分布情況尚未清楚。因此作者參考相關文獻，選擇快速、簡便的高效液相色譜藥物濃度測定法（HPLC）［4］，對其在大鼠體內組織分布特點進行研究，旨在為臨床用藥的安全性、有效性和擴大適應證提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料與設備 （1）藥物與試劑：Via膠囊規格25 mg/粒；Via標準品（重慶華邦公司），以甲醇配制成1 g/L儲備液，避光低溫保存備用；甲醇（色譜純），乙腈（色譜純），羧甲基纖維素鈉（分析純），重蒸餾水。（2）實驗動物：健康合格一級SD大鼠，雌雄各半，體重180～200 g，由中南大學湘雅醫學院實驗動物中心提供。（3）主要儀器：依利特P230高效液相色譜儀（大連依利特科學儀器公司）；Diamonsil C18 色譜柱（200 mm×4.6 mm，5μm）；組織勻漿機（寧波新芝儀器有限公司）；低速臺式離心機（長沙高創儀器有限公司）；高速臺式離心機（長沙英泰儀器有限公司）；漩渦振蕩儀（上海第一醫學院儀器廠）；電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司）。

1.2 方法 （1）血液樣品的采集和預處理：選取健康合格一級SD大鼠6只，雌雄各半，體重180～200 g，實驗前禁食18h，按動物體重計算給藥劑量，實驗當天灌胃給予125 mg/kg的Via混懸液（使用5‰羧甲基纖維素鈉配制）。于給藥前（0）以及給藥后0.5、0.75、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12 h采尾靜脈血0.2 ml，3000 r/min離心10min分離血漿備用。精確移取血漿0.1 ml，加入0.3 ml乙酸乙酯，旋搖3min，12000 r/min離心10min，精確移取上層有機相0.2 ml至空白試管，常溫下氮氣吹干，0.1 ml流動相溶解，取20 μl進樣，所有操作和保存過程均嚴格避光。（2）組織樣品采集和預處理：選取健康合格一級大鼠24只，體重200 g 左右，隨機分為4組，每組6只，雌雄各半。給藥方法同上。分別在15min、1 h、4 h、7 h四個時間點將動物處死，心臟取血1ml，在相同部位切取心、肝、脾、肺、腎、腦、皮膚、脂肪、肌肉、睪丸或子宮和卵巢適量，稱重，用1：3（W/V）蒸餾水制成組織勻漿，取此勻漿1ml，加3ml乙酸乙酯提取，旋搖3min，3000r/min 離心10min，精確移取上層有機相2ml至空白試管，常溫下氮氣吹干，0.1 ml流動相溶解，12000 r/min離心5min，取上層清液20 μl進樣。骨組織取自大鼠股骨，洗去骨髓，稱重，按1 ：3（W/V）加入甲酸若干，置40 ℃水浴中溫孵30min，待其完全溶解后用0.1mol/L NaOH調pH至6.0，取1ml同上方法處理并進樣分析。（3）測定條件：依利特P230高效液相色譜儀，Diamonsil C18色譜柱（200mm×4.6mm，5μm），流動相為甲醇：水（95：5，V/V），使用前經0.45μm的過濾膜超聲脫氣；柱溫25℃；流速為1 ml/min；檢測波長為370nm；20μl固定進樣環。（4）血漿標準曲線的建立：采用大鼠空白血漿配成藥物濃度為31、122、488、195、781μg/L的Via標準液，按前述血漿處理辦法進行處理、測定，所得數據用加權最小二乘法進行線性回歸。（5）組織標準曲線的建立：采用大鼠空白混合組織勻漿配成藥物濃度為25、98、391、1560、6250、25000 μg/L的Via標準液，按前述組織勻漿處理辦法進行處理、測定，所得數據采用加權最小二乘法進行線性回歸。（6）回收率、精密度：采用大鼠空白混合組織勻漿配制低、中、高3種濃度（0.1、1.0、5.0 mg/L）的Via質控樣品，各5管，于同一天作預處理后采用HPLC分析，計算日內精密度。以后每天配制上述3種濃度的質控樣品各5份，連測3 d，計算日間精密度和方法回收率。

1.3 統計學方法 采用SPSS12.0統計軟件。計量資料以（x±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以%表示，組間比較采用χ2檢驗。P＜ 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 檢測方法的建立 在甲醇：水（95：5；V/V）條件下，Via色譜峰與內源性物質分離良好，峰形對稱，保留時間較短（6.2min），見圖 1。

圖1 樣品測定色譜圖

2.2 標準曲線、回收率、精密度 血漿標準曲線回歸方程為y=0.0634x+9.772，濃度范圍為31～7810μg/ L，r2=0.9987。組織勻漿標準曲線回歸方程為y=0.5251 x+3.557，線性范圍為6.1～25000 μg/L，r2=0.9998。回收率以及精密度結果見表1。

表 1 組織勻漿樣品回收率和精密度測定結果［n=5，（x±s）］

2.3 大鼠口服Via時曲線 大鼠口服Via 125mg/kg后，不同時間測定的血藥濃度值采用DAS2.0藥代動力學軟件擬合處理，得到藥-時曲線（見圖2）。主要藥動學參數見表2。根據藥時曲線，0～0.83 h為吸收相，0.83～2.5 h為平衡相，2.5～12.0 h為消除相。模型擬合為二室模型。

圖2 SD大鼠口服Via后血漿藥物濃度—時間曲線

表2 Via在SD大鼠體內藥物動力學參數［n=6，（x±s）］

2.4 Via在SD大鼠組織中的分布 大鼠口服Via后可迅速分布至各主要器官，1h后藥物在脂肪中濃度最高，皮膚、肌肉次之，骨骼最低。7 h后各組織藥物濃度均明顯下降，24h后除脂肪組織仍存在（1.13±1.01）μg/g的藥物外，其他組織藥物濃度均已檢測不到。見圖3。

圖3 Via在SD大鼠體內各組織的分布

3 討論

Via是全反式維A酸與對氨基苯甲酸乙酯化合形成的酰胺類化合物，是目前我國唯一自行研制并具有知識產權的維A酸類藥物［1］。現已明確Via對角質形成細胞或鱗狀上皮的分化與增殖有明顯的抑制作用［5］，臨床實踐亦證實該藥對中、重度痤瘡及多種角化異常性皮膚病療效肯定，與異維A酸相比療效無顯著差異，副作用輕微［6］。

本資料顯示，大鼠單次灌胃Via125 mg/kg后體內藥動學呈二室開放模型，吸收較迅速，達峰時間（0.83±0.13）h；血漿清除亦較快，消除半衰期（2.22±0.52）h，清除率（16.20±0.13）L/（kg·h）。組織分布研究發現，Via在大鼠體內分布迅速且廣泛，15min即可在肝、腎、脾、肺、心、腦、脂肪、皮膚、骨骼肌、睪丸、子宮和卵巢等組織檢測到，各組織器官中Via的達峰時間與血漿中的基本相同。給藥15min時，Via在肝組織中分布濃度最高，心臟次之，這可能與這些組織器官的血流量較大有關；給藥1h后，Via在脂肪、皮膚的持續高濃度則可能與藥物的脂溶性高有關。

藥物的分布情況對其療效和毒副作用具有重要的意義，只有治療靶組織達到一定的藥物濃度才能保證療效。在本實驗中，大鼠口服Via 1h后，皮膚的藥物濃度明顯高于除脂肪外的其他組織，Via的這一分布特點可能有助于提高療效。然而，療效部位以外的器官組織可能成為藥物毒副作用的靶器官。已有證據表明，維A酸類藥物長期應用可在不同的組織器官中產生多種副作用，如引起頭痛、眼結膜炎、骨骼發育不良、肌肉痛、胰腺炎、血脂升高、肝功能損害以及胎兒畸形等［7，8］。有研究顯示Via亦會引起黏膜干燥、致畸、血脂改變、肝臟損害等［2，9］，因此作者推測Via的副作用可能與其在組織中的分布有關。盡管如此，Via產生的毒副作用常較其同類藥物輕微［6］，這可能與其在皮膚、脂肪濃聚以及在血漿和其它組織中濃度相對較低的特點有關。Via在脂肪組織中藥物濃度高，下降緩慢，滯留時間長，而同樣具有高親脂性的藥物阿維A酯在肥胖大鼠體內半衰期明顯延長［10］，提示長期應用Via可能會造成藥物在脂肪組織中過度蓄積，使得人體藥物清除速度減慢。

本實驗組前期研究發現Via在強光下短時間內可變構成分子量相同而結構不同的另一種較穩定的物質，本實驗采用液相色譜質譜聯用法在大鼠血漿及皮膚組織中發現了這種物質，由于全反式維A酸與其異構體13-順-維A酸在光照或體內能夠互變［11］，故推測Via在體內可能亦存在著類似改變。

1 徐世平,郭宗儒,袁占亮,等．防癌藥物的研究—維生素甲酸衍生物的合成．藥學學報,1981,16(9): 678～685．

2 趙善聚,于愛英．維胺酯在皮膚病中的應用．皮膚病與性病,2005,27(4): 9～11．

3 雷霞,魯元剛,趙莉蓉,等．口服維胺酯膠囊治療尋常痤瘡．中華皮膚科雜志,2003,36(2): 116．

4 歐陽凈,黃華,楊成鋼． 三蕊膠囊中維胺酯含量測定方法的改進．現代食品與藥品雜志,2006,16(2): 23～25．

5 蔡海英,崔小邢,張金生,等．新維生素甲酸衍生物抑制雞胚腳掌上皮的分化． 中國醫學科學院學報,1982,15(3): 45～48．

6 沈獻平,桑紅,倪容之,等．維胺酯膠囊與異維A酸對照治療尋常痤瘡．中華皮膚科雜志,2003,36(5): 295．

7 Castano G,Etchart C,Sookoian S． Vitamin A toxicity in a physical culturist patient: a case report and review of the literature． Ann Hepatol, 2006,5(4): 293～395．

8 Zane LT,Leyden WA,Marqueling AL,et al． A population-based analysis of laboratory abnormalities during isotretinoin therapy for acne vulgaris．Arch Dermatol,2006,142(8): 1016～1023．

9 王美琴,靜玉,岳娟．維胺酯引起肝損害1例．醫藥導報,2002,21(5): 149．

10 Chien DS,Sandri RB,Tang-Liu DS． Systemic pharmacokinetics of aci tretin,etretinate,isotretinoin,and acetylenic retinoids in guinea pigs and obese rats． Drug Metab Dispos,1992,20(2): 211～221．

11 Wang C J,Pal L H,Hsiong C H,et al． Novel inhibition of cis/tran retinoic acid interconversion in biological fluids-An accurate method for determination of trans and 13-cir retinoic acid in biological fluids． J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci,2003,796(2): 238～291．

Objective To study the plasma concentration and tissue distribution of oral viaminate in rats. Methods The plasma and tissue concentrations of viaminate were detected by high performance liquid chromatography at various times after oral administration in rats. The pharmacokinetic parameters were calculated with Das2.0 program. Results The time-concentration curve of viaminate corresponded to the model of two-compartment model after oral administration. The main pharmacokinetics parameters were：t1/2（β）=（2.22 0.52）h；Tmax =（0.83±0.13）h；Cmax=（3.90±1.05）mg/L. It was showed that viaminate was absorbed rapidly and was distributed in many tissues or organs in 15minutes.The concentration of viaminate was highest in fat at 1 h，followed by skin and muscle，lowest in skeleton. The concentrations in all of the tissues were decreased obviously. Conclusions Viaminate can be quickly absorbed and distributed in various tissues or organs in vivo, fellowed by being eliminated very quickly. The concentration of viaminate in skin and fat is higher than that in other tissues.

Viaminate Plasma concentration Tissue distribution HPLC

200003 上海第二軍醫大學長征醫院感染科

*通訊作者