CD44v6和Ezrin與大腸腺瘤癌變及預后的關系

王媛媛，邱曉陽，況麗平，吳智勇，姚曉東，杜則澎，王少洪，沈金輝，*

（1. 汕 頭市中心醫院病理科，廣東 汕頭 515041；2. 汕頭市中心醫院腫瘤外科，廣東 汕頭 515041）

CD44v6和Ezrin與大腸腺瘤癌變及預
后的關系

王媛媛1，邱曉陽1，況麗平1，吳智勇2，姚曉東2，杜則澎1，王少洪1，沈金輝1，*

（1. 汕 頭市中心醫院病理科，廣東 汕頭 515041；2. 汕頭市中心醫院腫瘤外科，廣東 汕頭 515041）

隨著人們生活水平提高及飲食結構的改變，大腸腺癌發病率呈逐漸升高趨勢，從第6位上升到第2位，其中，腺瘤癌變途徑是大腸腺癌發生的經典途徑。通過預警分子早期發現具有癌變潛能的腺瘤并有效手術切除能達到早期發現并減少癌變率，從而減少大腸腺癌患者的死亡率，但是目前尚缺乏可靠的癌變分子標記。最近研究發現細胞膜表面蛋白CD44v6和骨架連接蛋白家族成員Ezrin，參與多種生長因子及受體的信號轉導，在腫瘤的發生發展中起到重要作用。本文對二者在大腸腺瘤癌變過程中的表達特點及其與臨床病理指標及預后的關系進行探討。

1 材料與方法

1.1 材料

收集汕頭市中心醫院2008-2009年大腸腺癌手術標本80例，距癌組織5 cm以上切緣正常結腸黏膜組織20例，腺瘤伴低級別上皮內瘤變40例。收集2008-2013年間大腸腺瘤伴高級別上皮內瘤變20例（除家族性結腸息肉病及幼年性息肉病外），患者不同時伴有大腸腺癌，且異型細胞未突破黏膜肌層。腺癌組織中男56例，女24例；50歲以上62例，≤50歲18例；高分化17例，中低分化63例；有淋巴結轉移44例，無淋巴結轉移36例；浸潤漿膜層63，未浸潤漿膜層17例；TNM分期I～II期35例，III～IV期45例。所有患者術前均未接受放、化療，標本均經兩位病理醫師審核。所有標本經10%多聚甲醛固定，石蠟包埋，4 μm連續切片。隨訪從手術之日開始，術后每年隨訪1次，患者因大腸腺癌死亡定義為完全數據，末次隨訪日為2013年9月15日，本組患者的隨訪時間均大于5年，隨訪截止時有22例死亡。

1.2 方法

鼠抗人單克隆抗體CD44v6（克隆號2F10）、鼠抗人單克隆抗體Ezrin（克隆號3c18）和即用型非生物素免疫組化EliVisionTM檢測試劑盒均購自福州邁新生物公司。采用免疫組化二步法，具體步驟按照試劑說明書進行，檸檬酸緩沖液高壓修復3 min，一抗在4 ℃過夜，用已知的陽性切片作為陽性對照，用0.01 mol/L PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 結果判定

根據陽性細胞染色強度及整張切片中陽性細胞數占整張切片數量的百分比綜合判定。在400倍光鏡下（腫瘤細胞著色區域，順序移動玻片）隨機選取5個視野，細胞質無著色為0分，淡黃染色為1分，棕黃色為2分，棕褐色或胞質內棕黑色顆粒為3分；細胞陽性數目＜5%為0分，≥5%～25%為1分，≥25%～50%為2分，≥50%～75%為3分，≥75%為4分。計算5個視野的平均分數，將染色強度及細胞數量分數相乘，4分及以上記為陽性。

1.4 統計學方法

使用SPSS 15.0統計軟件分析處理數據，計數資料采用χ2檢驗，運用Kaplan-Meier法對CD44v6和Ezrin表達和生存時間進行Log-rank檢驗，將各個單因素分析有統計學意義的因素進行Cox多因素分析。

2 結 果

2.1 CD44v6和Ezrin在大腸腺癌組織中的表達

CD44v6和Ezrin在正常黏膜僅見少量胞質中有表達，而在癌組織中胞質及胞膜表達呈棕黃色、顆粒狀。二者在大腸正常黏膜組、腺瘤伴低級別、高級別上皮內瘤變和腺癌組CD44v6及Ezrin的表達率逐漸增強，腺瘤伴高級別上皮內瘤變和腺癌組表達高于正常大腸黏膜及腺瘤伴低級別上皮內瘤變組，差別有統計學意義（P＜0.05或P＜0.01）。見圖1及表1。

2.2 CD44v6和Ezrin與大腸腺癌臨床病理指標的關系

大腸腺癌組CD44v6及Ezrin在淋巴結轉移組、浸潤漿膜層組和III～IV期表達分別高于無淋巴結轉移組、未侵犯漿膜層組和I～II期，差別均有統計學意義（P＜ 0.05），在不同性別、年齡和分化程度組間表達差別無統計學意義（P＞0.05），見表2。

2.3 CD44v6和Ezrin表達與大腸腺癌生存時間的相關性

CD44v6及Ezrin陰性表達的患者生存時間明顯長于陽性表達的患者。生存曲線趨勢也表明，CD44v6和Ezrin陽性表達對患者生存時間有明顯的影響（Log-rank= 18.587，P=0.000；Log-rank=7.804，P=0.005），見圖2。

2.4 Cox 風險回歸模型分析大腸腺癌患者生存時間的影響因素

運用Cox風險回歸模型對影響患者生存期的臨床病理指標及多因素分析表明，淋巴結轉移、分化程度、CD44v6表達是影響患者生存時間的獨立風險因素，有淋巴結轉移、中低分化、CD44v6陽性表達的患者生存時間分別明顯短于無淋巴結轉移、高分化和CD44v6陰性表達的患者，見表3。

2.5 CD44v6及Ezrin在大腸腺癌中表達的相關性分析

CD44v6和Ezrin在大腸腺癌中的雙陽性表達為34例，雙陰性表達25例，二者表達呈正相關（r=4.567，P＜0.01）。

3 討 論

最近研究發現CD44v6是一種廣泛表達的I型跨膜受體糖蛋白，主要表達于上皮細胞，影響干細胞行為，參與細胞增殖、遷移及血管生成等行為［1-2］。Ezrin蛋白是ERM（Ezrin，Radixin，Moesin）家族的一員，常與Moesin，Radixin共同表達于細胞膜內面，將細胞骨架與細胞膜表面蛋白CD44v6連接起來，維持細胞形態和功能［3］。Ezrin參與到腫瘤浸潤轉移的多個環節，如從原發灶脫落、侵入周邊組織、侵入脈管系統、穿過基底膜、選擇性地在靶器官增殖形成轉移灶等。

本實驗研究發現CD44v6和Ezrin在正常大腸黏膜僅見少量表達，在腺瘤伴低級別上皮內瘤變、腺瘤伴高級別上皮內瘤變、腺癌組織中表達率逐漸增高，二者在腺瘤伴高級別上皮內瘤變及腺癌組中的表達高于正常黏膜及腺瘤伴低級別上皮內瘤變，且在同一標本中形態異型性顯著、低分化的部分表達較強，正常黏膜以及輕度異型部分表達較弱或者不表達。Gschwantler-Kaulich等［4］研究也發現Ezrin在乳腺導管上皮細胞從良性到惡性的轉變過程中表達增強。在前列腺浸潤性腺癌中的表達率高于導管上皮乳頭狀瘤及上皮內瘤變［5］。綜合以上研究表明CD44v6及Ezrin可能在癌變的過程中表達逐漸增強，是癌變的早期事件。因此，檢測CD44v6和Ezrin的表達水平可能對大腸腺瘤癌變預測有參考價值。

本研究發現CD44v6及Ezrin在大腸腺癌有淋巴結轉移組，有漿膜層浸潤組，III～IV期的陽性表達分別高于淋巴結無轉移、無漿膜層浸潤及I-II期。Logrank檢驗顯示CD44v6及Ezrin明顯影響患者5年生存時間，CD44v6 及Ezrin陽性表達組生存時間明顯短于陰性組，并且Cox多因素分析顯示CD44v6表達是獨立的預后危險因素。研究者在頭頸部腫瘤研究［6-7］發現CD44v6表達增強及特定位點CD44v6表達的增加與患者5年總生存率、細胞分化及TNM分期之間具有相關性。在非小細胞肺癌的Meta分析中顯示CD44v6與淋巴結轉移、病理類型、生存時間有關，推測它可能在非小細胞肺癌中是不良預后指標［8］。以上研究均表明CD44v6和Ezrin不僅是癌變的早期事件，在浸潤轉移的過程中也有促進作用。檢測二者的表達水平有可能成為預測腫瘤浸潤轉移的重要分子標記物［9］。本研究還發現CD44v6與Ezrin的表達呈正相關，表明Ezrin可能與CD44相互作用促進腫瘤浸潤轉移。本人在前期胃癌組織的研究中發現Ezrin表達高于正常黏膜，且在癌組織浸潤灶邊緣表達增強，與上皮細胞骨架蛋白E-cadherinβ-catenin復合體的表達呈負相關，提示Ezrin可能與細胞膜表面蛋白發揮作用改變細胞骨架蛋白，從而促進腫瘤浸潤 轉 移。

綜上所述，CD44v6和Ezrin的表達與大腸腺瘤癌變、浸潤和轉移相關，聯合檢測CD44v6和Ezrin的表達對判斷大腸腺瘤癌變及預后有參考價值。

［1］ Chen Y，Fu Z，Xu S，et al. The prognostic value of CD44expression in gastric cancer：A meta-Analysis［J］. Biomed Pharmacother，2014，68（6）：693-710.

［2］ 謝建偉，黃昌明，鄭朝輝，等. 腫瘤干細胞表面標記物CD44在胃癌中的表達及其意義［J］. 中華胃腸外科雜志，2013，16（11）：1107-12.

［3］ Zhang Y，Zhang L，Zhang G，et al. Osteosarcoma metastasis：prospective role of ezrin［J］. Tumour Biol，2014，35（6）：5055-5064.

［4］ Gschwantler-Kaulich D，Natter C，Steurer S，et al. Increase in ezrin expression from benign to malignant breast tumors［J］. Cell Oncol，2013，36（6）：485-491.

［5］ Oda Y，Aishima S，Morimatsu K，et al. Differential Ezrin and phosphorylated Ezrin expression profiles between pancreatic intraepithelial n eoplasia，intraductal p apillary m ucinous n eoplasm， and invasive ductal carcinoma of the pancreas［J］. Hum Pathol，2013，44（8）：1487-1498.

［6］ Chai L，Liu H，Zhang Z，et al. CD44 expression is predictive of poor prognosis in pharyngolaryngeal cancer：systematic review and meta-analysis［J］. Tohoku J Exp Med，2014，232（1）：9 -19.

［7］ Joshua B，Kaplan MJ，Doweck I，et al. Frequency of cells expressing CD44，a head and neck cancer stem cell marker：correlation with tumor aggressiveness［J］.Head Neck，2012，34（1）：42-49.

［8］ Jiang H，Zhao W，Shao W. Prognostic value of CD44 and CD44v6 expression in patients with non-small cell lung cancer：meta-analysis［J］. Tumor Biol，2014，35（8）：7383-7392.

［9］ 王萍，楊金鳳，張慶，等. 胃癌中RhoC和CD44v6的表達及其臨床意義［J］. 癌變·畸變·突變，2008，20（1）：60-63.

The expressions of CD44v6 and Ezrin are correlated with colorectal adenoma carcinogenesis and prognosis

WANG Yuanyuan1，QIU Xiaoyang1，KUANG Liping1，WU Zhiyong2，YAO Xiaodong2，DU Zepeng1，WANG Shaohong1，SHEN Jinhui1，*
（1. Department of Pathology， Shantou Central Hospital， Shantou 515041； 2. Department of Surgical Oncology， Shantou Central Hospital， Shantou 515041， Guangdong， China）

目的： 探討CD44v6和Ezrin在大腸腺瘤癌變中的表達及其與臨床病理指標和預后的關系。方法：應用免疫組化檢測CD44v6和Ezrin蛋白在大腸腺癌（80例）、腺瘤伴低級別上皮內瘤變（40例）、腺瘤伴高級別上皮內瘤變（20例）及正常黏膜（20例）中的表達，分析其表達與臨床病理指標及生存時間的關系。結果：CD44v6和Ezrin在腺瘤伴高級別上皮內瘤變和腺癌組的表達高于正常黏膜及腺瘤伴低級別上皮內瘤變組，差別有統計學意義（P均＜0.05）。二者在淋巴結有轉移組、有漿膜層浸潤組、III～IV期的表達分別高于淋巴結無轉移組、無漿膜層浸潤組及I～II期，差別均有統計學意義（P均＜0.05）。CD44v6和Ezrin表達與患者生存時間相關（Log-rank= 18.587，P＜0.05；Log-rank=7.804，P＜0.05）。Cox回歸多因素分析顯示CD44v6是獨立的預后危險因素（HR：7.582，95% CI： 1.605～ 35.815，P=0.011）。結論：CD44v6和Ezrin的表達與大腸腺瘤癌變、浸潤和轉移相關，聯合檢測CD44v6和Ezrin的表達對判斷大腸腺瘤癌變及預后具有參考價值。

大腸腺瘤；CD44v6；Ezrin；免疫組織化學

OBJECTIVE:We explored the expressions of CD44v6 and Ezrin in colorectal adenoma carcinogenesis and their correlations with clinicopathological factors and prognosis.METHODS：Immunohistochemistry for CD44v6 and Ezrin were performed in normal mucosa（20 cases），low grade adenoma tissues（40 cases） ，high grades adenoma tissues（20cases） and colorectal cancer（80 cases）. The correlations between expressions of CD44v6 and Ezrin with survival time and clinicopathological factors were evaluated.RESULTS：Expressions of CD44v6 and Ezrin in high grades colorectal adenomas and adenocarcinoma groups were higher than normal mucosa and low grade colorectal adenoma groups（P＜0.01）. Expressions were higher in lymph node metastasis group，serosal infiltration group，stages III-IV group than no lymph node metastasis group，no serosal infiltration and stages I-II group. CD44v6 and Ezrin were significantly correlated with survival time（Logrank=18.587，P＜0.05；Log-rank=7.804， P＜0.05）. Cox regression analysis showed that CD44v6 was an independent risk factor for prognosis （HR：7.582，95%CI：1.605-35.815，P=0.011）.CONCLUSION：The expressions of CD44v6 and Ezrin w ere c orrelated w ith p rocess o f c olorectal a denoma-carcinoma t ransition，invasion a nd m etastasis. I t w ould b e v aluable t o combine C D44v6 a nd E zrin t o p redict m alignant t ransformation o f c olorectal a denoma a nd p rognosis.

colorectal adenomas；CD44v6；Ezrin；immunohistochemistry

R735.3+4

A

1004-616X（2015）01-0035-04

10.3969/j.issn.1004-616x.2015.01.008

2014-10-04；

2014-12-15

2010年汕頭市科技計劃項目（汕府［2014］62號）

作者信息： 王媛媛，E-mail：315075516@qq.com。*通信作者， 沈金輝，E-mail：jinhuishen@tom.com