明目地黃丸對糖尿病大鼠視網膜氧化損傷的保護作用

李　斐　(南陽醫學高等專科學校臨床醫學系，河南　南陽　473000)

?

明目地黃丸對糖尿病大鼠視網膜氧化損傷的保護作用

李斐(南陽醫學高等專科學校臨床醫學系，河南南陽473000)

〔摘要〕目的探討明目地黃丸對糖尿病大鼠視網膜氧化損傷的保護作用。方法選擇雄性SD大鼠，給予大鼠腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)制備糖尿病大鼠模型，分為模型組、低劑量組、中劑量組、高劑量組，每組12只。同時選擇同批次大鼠12只，作為對照組。模型組和對照組不給藥，給予同體積雙蒸水灌胃。高、中、低劑量組分別在糖尿病大鼠喂養12 w后給予明目地黃丸灌胃。測定各組大鼠在給藥前、給藥后的體質量、血糖和糖化血紅蛋白(HbA1c)。實驗結束后，取大鼠視網膜，測定視網膜超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)含量。結果模型組治療前、治療后的體質量、血糖、HbA1c分別與對照組比較，差異有統計學意義(P＜0. 01)。模型組SOD活性、GSH-Px酶活性、MDA含量與對照組比較，差異有統計學意義(P＜0. 01);高、中、低劑量組SOD活性、GSH-Px酶活性、MDA含量分別與模型組比較，差異有統計學意義(P＜0. 05)。結論明目地黃丸對糖尿病大鼠視網膜起到保護作用，可能與其氧化損傷有關。

〔關鍵詞〕糖尿病;視網膜;明目地黃丸;氧化損傷

糖尿病視網膜病變是糖尿病病程中的常見并發癥，隨著糖尿病的發病升高，糖尿病視網膜病變患者也隨著增多。尋找治療糖尿病視網膜病變藥物是目前研究的熱點之一。明目地黃丸是中藥制劑，主要成分是熟地黃、山茱萸、牡丹皮、山藥、茯苓、澤瀉、枸杞子、菊花、當歸、白芍、蒺藜、石決明。本文采用鏈脲佐菌素(STZ)制成糖尿病大鼠模型，觀察明目地黃丸對糖尿病大鼠視網膜的保護作用及其機制。

1　材料和方法

1. 1實驗動物選擇雄性SD大鼠，平均體重為(210±16)g，均購自華中科技大學同濟醫學院動物實驗中心，均采用標準大鼠飼料喂養，飼養間溫度濕度適宜。

1. 2主要儀器和試劑STZ來自Sigma公司;明目地黃丸由河南省宛西制藥股份有限公司生產;超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)等試劑盒購自南京建成生物工程研究所;血糖儀購自羅氏公司。

1. 3糖尿病大鼠視網膜病變模型建立和分組、給藥大鼠適應飼養5 d后實施禁食禁食12 h，以60 mg/kg劑量給予大鼠腹腔注射STZ，72 h后，采集大鼠尾靜脈血，測定大鼠血糖情況，大鼠靜脈血血糖超過16. 7 mmol/L作為糖尿病大鼠模型，而后喂養大鼠12 w，建立糖尿病大鼠視網膜病變模型。糖尿病大鼠喂養12 w后，分為四組:模型組、低劑量組、中劑量組、高劑量組，每組12只。同時選擇同批次大鼠12只，作為對照組。模型組和對照組不給藥，給予同體積雙蒸水灌胃。高、中、低劑量組分別在糖尿病大鼠喂養12 w后給予明目地黃丸灌胃，每天劑量分別1 400 mg/kg、700 mg/kg、350 mg/kg，明目地黃丸在雙蒸水中溶解，制成混懸液灌胃。

1. 4指標測定

1. 4. 1測定各種大鼠不同時間的體質量和血糖測定各組大鼠在給藥前、給藥后的體質量、血糖和糖化血紅蛋白(HbA1c)情況，均為同一實驗人員測定和記錄結果。

1. 4. 2生化指標測定試驗結束后取大鼠眼球，對其視網膜進行剝離，在磷酸鹽(PBS)溶液中對所取組織進行研磨，直至成組織勻漿，加入PBS溶液適量后行離心，取上清液，測定其中的SOD活性、GSH-Px活性、MDA含量。

1. 5統計學處理采用SPSS14. 0進行分析及t檢驗。

2　結果

2. 1各組大鼠給藥前后的體質量、血糖和HbA1c測定模型組治療前、治療后的體質量、血糖、HbA1c分別與對照組比較，差異有統計學意義(P＜0. 01)。見表1。

2. 2各組大鼠視網膜的SOD活性、GSH-Px活性、MDA含量測定結果模型組SOD活性、GSH-Px活性、MDA含量與對照組比較，差異有統計學意義(P＜0. 01);高、中、低劑量組SOD活性、GSH-Px活性、MDA含量分別與模型組比較，差異有統計學意義(P＜0. 05)。見表2。

表1　各組大鼠給藥前后的體質量、血糖和HbA1c測定結果(x ±s，n=12)

3　討論

在糖尿病視網膜病變的發病機制中，氧化應激損傷、凋亡等機制參與其中，是多種機制參與下的損傷過程。由于糖尿病時，機體處于高血糖狀態，在多種損傷途徑刺激下，可導致線粒體的呼吸鏈及還原型輔酶Ⅱ(NADPH)氧化酶活性改變，導致細胞的氧自由基生存增多，導致機體的氧化應激反應程度增加，從而導致視網膜細胞發生氧化損傷〔1～3〕，而視網膜的SOD活性降低，GSH-Px活性降低，而MDA含量增加〔4，5〕。本文研究說明氧化應激損傷參與了糖尿病視網膜病變。明目地黃丸是中藥制劑，主要成分是熟地黃、山茱萸、牡丹皮、山藥、茯苓、澤瀉、枸杞子、菊花、當歸、白芍、蒺藜、石決明。研究表明，明目地黃丸對白內障有一定治療作用，其能夠提高晶狀體的抗氧化能力，減少脂質過氧化反應，從而起到抗氧化損傷作用〔6，7〕。本文結果說明明目地黃丸能夠有效提高糖尿病大鼠視網膜的抗氧化損傷能力，能夠有效降低氧化應激對視網膜細胞損傷，對糖尿病大鼠視網膜損傷起到保護作用。

4參考文獻

1高玉，吳晉暉，柳林.鏈脲佐菌素誘發性糖尿病大鼠早期視網膜病變模型的建立〔J〕．第二軍醫大學學報，2010; 31(10): 1053-9.

2王志新，徐高磊，王延芬.氧化應激和抗氧化劑在糖尿病并發癥發生發展中可能的作用〔J〕．醫學研究雜志，2013; 4(2): 12-5.

3高宏杰，楊迎霞.中醫藥治療糖尿病視網膜病變研究進展〔J〕．遼寧中醫藥大學學報，2012; 8(3): 251-4.

4許麗娟.明目地黃丸合并法可林滴眼液治療早期老年白內障臨床觀察〔J〕．海南醫學院學報，2012; 2(2): 243-4.

5肖培云，楊永壽，許嘉強.明目地黃丸中熊果酸含量測定方法比較〔J〕．大理學院學報，2010; 12(3): 4-6.

6張蕙，張榮春，倪誠.地黃類中成藥臨床應用辨析〔J〕．中華中醫藥雜志，2013; 7(2): 2178-81.

7趙和軍.明目地黃丸合生脈散治療肝腎陰虧型干眼癥療效觀察〔J〕．新中醫，2013; 7(4): 104-6.

〔2014-08-19修回〕

(編輯安冉冉/曹夢園)

基金項目:河南省教育廳自然科學研究計劃項目(No．12B360019)

〔文章編號〕1005-9202(2015)20-5735-02;

doi:10. 3969/j. issn. 1005-9202. 2015. 20. 023

〔文獻標識碼〕A

〔中圖分類號〕R587. 1

第一作者:李斐(1977-)，女，碩士，副教授，主要從事糖尿病臨床研究。