烏骨通膠囊對(duì)去卵巢大鼠血清腫瘤壞死因子-α和胰島素樣生長(zhǎng)因子-1的影響

鄭文奎　劉春穎李　頔　高文山　藏衛(wèi)東曹廣民楊照宇(河北大學(xué)附屬醫(yī)院，河北　保定　07000)

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烏骨通膠囊對(duì)去卵巢大鼠血清腫瘤壞死因子-α和胰島素樣生長(zhǎng)因子-1的影響

鄭文奎劉春穎1李頔高文山藏衛(wèi)東2曹廣民3楊照宇4
(河北大學(xué)附屬醫(yī)院，河北保定071000)

〔摘要〕目的觀察金烏骨通膠囊含藥血清對(duì)去卵巢大鼠血清腫瘤壞死因子(TNF)-α、胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF)-1表達(dá)的影響。方法選用6月齡SD雌性大鼠60只，隨機(jī)分成6組。即假手術(shù)組、模型組、金烏骨通膠囊高、中、低劑量組以及尼爾雌醇陽(yáng)性對(duì)照組。按組別灌胃給藥，24 w后處死，分別測(cè)定動(dòng)物血清TNF-α和IGF-1含量。結(jié)果模型組與假手術(shù)組比較，血清TNF-α明顯升高(P＜0. 05)，IGF-1明顯降低(P＜0. 01)。金烏骨通膠囊高、中劑量組與模型組比較，TNF-α明顯降低，IGF-1明顯增加(P＜0. 05)。結(jié)論金烏骨通膠囊對(duì)大鼠骨質(zhì)疏松的治療作用可能是通過影響TNF-α和IGF-1來實(shí)現(xiàn)的。

〔關(guān)鍵詞〕金烏骨通膠囊;去卵巢;腫瘤壞死因子-α;胰島素樣生長(zhǎng)因子-1

1河北大學(xué)醫(yī)學(xué)部2保定市蓮池區(qū)五堯鄉(xiāng)衛(wèi)生院

3容城縣醫(yī)院4蠡縣醫(yī)院

第一作者:鄭文奎(1975-)，男，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事骨科疾病研究。

絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松(PMOP)是一種老年婦女的常見病。因?yàn)榇萍に厮降慕档停构墙M織顯微結(jié)構(gòu)發(fā)生蛻變，骨量丟失，骨骼脆性增加〔1〕。近年來有文獻(xiàn)報(bào)道腫瘤壞死因子(TNF)-α和胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF)-1等細(xì)胞因子與骨的形成、吸收和代謝有密切關(guān)系，調(diào)節(jié)著骨代謝過程中成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的分化、增殖與功能活性〔2〕。本課題組在前期實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，金烏骨通膠囊對(duì)去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松有明顯的預(yù)防作用，本研究探討其對(duì)去卵巢大鼠血清TNF-α以及IGF-1的影響。

1　材料與方法

1. 1藥物及試劑金烏骨通膠囊:其內(nèi)容物所含主要成分為金毛狗脊、烏梢蛇、淫羊藿、土牛膝、葛根、威靈仙、補(bǔ)骨脂、土黨參、姜黃、木瓜等，由貴州神奇制藥有限公司制備(國(guó)藥準(zhǔn)字: Z20025151，批號(hào)20120620);尼爾雌醇(北京四環(huán)制藥有限公司生產(chǎn));戊巴比妥鈉(上海化學(xué)試劑采購(gòu)供應(yīng)站分裝廠生產(chǎn)); TNF-α放射免疫測(cè)定試劑盒(上海西唐生物科技有限公司進(jìn)口分裝); IGF-1放射免疫測(cè)定試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司生產(chǎn));血清雌二醇放射免疫測(cè)定試劑盒(天津德普生物技術(shù)和醫(yī)學(xué)產(chǎn)品有限公司生產(chǎn))。

1. 2動(dòng)物及分組6～9月齡未交配的雌性SD大鼠(由河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心提供)60只，清潔級(jí);體重(250±20)g，所有動(dòng)物均喂養(yǎng)于河北大學(xué)醫(yī)學(xué)部SPF實(shí)驗(yàn)室中。自由攝食和飲水，使用標(biāo)準(zhǔn)飼料，其中鈣含量1. 33%，磷含量0. 95%。隨機(jī)分成假手術(shù)組、模型組、金烏骨通膠囊低、中、高劑量組及尼爾雌醇組。

1. 3大鼠模型建立模型組:雌性大鼠在實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后，各組大鼠均用3%戊巴比妥鈉按0. 1 ml/100 g行腹腔注射麻醉，俯臥位固定，在背部中1/3處剪毛，用碘酒、酒精局部消毒皮膚，于末肋下1 cm水平與脊柱外側(cè)2 cm交叉處，向下做2～4 cm縱形切口，將皮膚先牽向一側(cè)，切開筋膜，鈍性分離肌肉，進(jìn)入腹膜后，在子宮角上用線結(jié)扎輸卵管，切斷輸卵管，提起卵巢(呈深粉紅色顆粒狀)，絲線結(jié)扎其周圍相連組織，切除卵巢，縫合腹膜切口。用同樣方法操作對(duì)側(cè)，縫合皮膚切口。假手術(shù)組:手術(shù)方法同上，但不切斷輸卵管，不切除卵巢，僅摘除相當(dāng)于卵巢大小的腸系膜。

1. 4給藥手術(shù)建立模型12 w后開始給藥:假手術(shù)組和模型組按3 ml·kg－1·d－1灌服生理鹽水;金烏骨通低、中、高劑量組按0. 5、1. 0、2. 0 g·kg－1·d－1灌服金烏骨通;尼爾雌醇組按1. 0 mg·kg－1·w－1灌服尼爾雌醇。

1. 5血清生化指標(biāo)測(cè)定大鼠股動(dòng)脈采血，用放射免疫分析法測(cè)定各組大鼠血清TNF-α和IGF-1的水平。具體操作按試劑盒說明進(jìn)行。

1. 6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法使用SPSS13. 0軟件進(jìn)行單因素方差分析及LSD法。

2　結(jié)果

2. 1金烏骨通膠囊對(duì)各組大鼠TNF-α的影響與假手術(shù)組比較，模型組的TNF-α水平明顯升高(P＜0. 01)，與模型組比較，金烏骨通膠囊中、高劑量組及尼爾雌醇組TNF-α水平均明顯降低(P＜0. 01)，金烏骨通膠囊中、高劑量組間無顯著差異(P＞0. 05)，但與低劑量組比較有顯著差異(P＜0. 05)。見表1。

2. 2金烏骨通膠囊對(duì)各組大鼠IGF-1的影響與假手術(shù)組比較，模型組IGF-1水平明顯降低(P＜0. 01)，與模型組比較，金烏骨通膠囊各劑量組及尼爾雌醇組IGF-1水平均明顯增加(P＜0. 05)。見表1。

表1　各組大鼠TNF-α、IGF-1水平比較(x±s)

3　討論

PMOP的主要病因是性激素分泌的不足〔2〕，性激素替代治療(HT)的方法雖然可以治療PMOP，但長(zhǎng)期使用可能增加患乳癌和子宮內(nèi)膜癌的風(fēng)險(xiǎn)，使HT受到限制〔3〕。因此，尋求更為安全有效的防治藥物成為對(duì)PMOP研究的重要課題。中醫(yī)藥防治PMOP有顯著療效、副作用小，已引起學(xué)術(shù)界的普遍重視。

《素問·至真要大論》曰:“諸風(fēng)掉眩，皆屬于肝;諸寒收引，皆屬于腎;諸氣郁，皆屬于肺;諸濕腫滿，皆屬于脾。”肺主氣，脾為生氣之源，腎為氣之根，因而氣虛常與肺、脾、腎有關(guān)。PMOP的發(fā)病與腎之精氣虧虛有十分密切的關(guān)系，骨生長(zhǎng)的物質(zhì)基礎(chǔ)主要依賴精氣血津液，功能活動(dòng)取決于腎的陰陽(yáng)平衡。腎為藏精之所、津液之主、生氣之源，腎陰、腎陽(yáng)為調(diào)控全身代謝平衡之本。故防治骨質(zhì)疏松的基本立足點(diǎn)在于補(bǔ)腎，從腎氣、腎精、腎陰、腎陽(yáng)等方面入手有所不同，療效機(jī)制也各不相同。金烏骨通膠囊是少數(shù)民族苗藥的經(jīng)典配方，處方成分由金毛狗腎、烏梢蛇、補(bǔ)骨脂、淫羊藿、威靈仙、姜黃、土黨參、土牛膝、木瓜、葛根等10味藥組成。組方中:金毛狗腎去風(fēng)濕、補(bǔ)肝腎、強(qiáng)腰膝，具有很好的強(qiáng)腰健膝作用;烏梢蛇祛風(fēng)除濕、通絡(luò)止痙，具有抗炎、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗驚厥的作用;補(bǔ)骨脂補(bǔ)腎壯陽(yáng)、固精納氣;淫羊藿補(bǔ)腎壯陽(yáng)、強(qiáng)筋骨、去風(fēng)濕;威靈仙通絡(luò)、止痛、為治療風(fēng)濕痹痛、肢體麻木、筋脈拘攣、屈伸不利的藥物，此五藥為主藥。姜黃、土黨參、土牛膝、木瓜、葛根為輔藥，從破血行氣、補(bǔ)中益氣、活血化瘀、舒筋活絡(luò)、發(fā)散表邪等方面增強(qiáng)組方作用。諸藥配合，補(bǔ)中有通，標(biāo)本兼治，發(fā)揮了較好的防治骨質(zhì)疏松的作用。

近年來隨著細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)研究的不斷深入，細(xì)胞因子在骨代謝方面的作用越來越受到人們的重視。其中TNF-α、IGF-1正是兩種在骨質(zhì)疏松中發(fā)揮重要作用的細(xì)胞因子。TNF-α作用表現(xiàn)為刺激破骨前體細(xì)胞的增殖和分化，也可抑制成骨細(xì)胞堿性磷酸酶的生成，抑制骨形成和鈣化〔4〕。有學(xué)者認(rèn)為，雌激素抗骨吸收的作用是通

過抑制TNF-α等骨吸收因子的分泌而實(shí)現(xiàn)的〔5〕。IGF-1具有明顯的促進(jìn)成骨細(xì)胞及成軟骨細(xì)胞分化和增殖的作用，它介導(dǎo)參與了生長(zhǎng)激素、雌激素、前列腺素、甲狀旁腺素、1，25(OH)2D3等多種激素的促骨生長(zhǎng)及骨形成作用，在骨的生長(zhǎng)、修復(fù)及骨質(zhì)疏松的發(fā)生中起重要作用〔6～8〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，提示金烏骨通膠囊可能通過影響TNF-α、IGF-1等細(xì)胞因子的作用而發(fā)揮防治骨質(zhì)疏松的作用。

4參考文獻(xiàn)

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〔2014-03-10修回〕

(編輯趙慧玲/曹夢(mèng)園)

通訊作者:高文山(1968-)，男，碩士，主治醫(yī)師，教授，主要從事骨科疾病研究。

基金項(xiàng)目:2012年保定市科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展指導(dǎo)計(jì)劃(12ZF122)

〔文章編號(hào)〕1005-9202(2015)20-5719-02;

doi:10. 3969/j. issn. 1005-9202. 2015. 20. 016

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔中圖分類號(hào)〕R7