10個櫻桃砧木組培試管苗耐熱差異性觀察

吳曄

摘 要：以COLT、ZY-1、G6、07、06-1、大櫻桃、y-1、y-2、y-4、y-5等10個櫻桃砧木組培試管苗為試材，進行了櫻桃砧木試管苗的耐熱性差異觀測，結果表明，試管苗莖尖抽生溫度、莖尖徒長溫度區間及持續高變溫處理下存活情況均存在差異，G6、07、Y-2、Y-5、Y-1等5個砧木試管苗在白晝37 ℃，夜晚32 ℃處理下能耐受18 d，達到了試管苗熱處理脫毒條件。

關鍵詞：櫻桃砧木；試管苗；熱處理；耐熱性

文章編號：1005-345X（2015）06-0005-03 中圖分類號：S662.5 文獻標識碼：B

病毒，幾乎能感染所有的細胞型生物，植物受侵染后，可經無性繁殖用的營養器官傳至下一代，使該植物發生退化。病毒和寄主植物對高溫存在忍耐差異，使植物莖尖生長速度超過病毒繁殖擴散速度，獲取不含病毒的植物分生組織，從而培育脫毒個體。試管苗熱處理脫毒是將熱處理與莖尖組織培養結合應用，利用病毒高溫鈍化現象及植物生長本身所具有的頂端存在數量極少或檢測不到病毒的生長點原理，培養獲得無病毒原種繁殖材料。在熱處理試管苗的過程中，理論上溫度越高、時間越長，脫毒效果越好，但是，持續高溫會引起植株代謝紊亂、分生組織細胞突變、品種變異風險增強等，甚至存活率下降。因而植物耐熱性允許范圍是試管苗熱處理脫毒法的關鍵條件。本試驗將10個無性系櫻桃砧木試管苗放置人工氣候箱中，預處理后，變溫熱處理，通過植株莖尖快速生長及熱害癥狀的外觀形態表現，觀察各個無性系櫻桃砧木試管苗的耐熱性。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗在天水市果樹研究所組培室進行，試材為該所組培室繼代培養的櫻桃砧木組培試管苗，分別為COLT、ZY-1、G6、07等10個無性系，在接種環境、時間及生長條件相同的瓶苗中，挑選長勢健壯、較一致的各3瓶。

熱處理所用人工氣候箱為寧波江南儀器廠生產，型號RXZ-280A；加濕器為亞都超聲波加濕器，加濕器中用水均為蒸餾水。

1.2 試驗方法

人工氣候箱設定為濕度75%，白晝18 h，黑夜6 h。放入待試材料，首先預處理將氣候箱內溫度設置為以白晝25 ℃、黑夜25 ℃起始（此為待試材料所在組培室溫度），逐日白晝、黑夜均升高1 ℃，升至白晝、黑夜均為32 ℃時，在此條件下連續處理3 d。然后設置將黑夜溫度保持在32 ℃，白晝逐日升高1 ℃，直至37 ℃；最后在白晝37 ℃，黑夜32 ℃條件下連續處理18 d。

2 結果與分析

2.1 不同砧木莖尖抽生溫度不同

在本試驗處理下，受試材料在白晝設定為33 ℃時表現出差異：砧木ZY-1、07、Y-2、Y-1，白晝設定為33 ℃時，植株莖尖開始抽生；砧木COLT、G6、Y-5、06-16，白晝設定為34 ℃時，植株莖尖開始抽生；砧木大櫻桃，白晝設定為35 ℃時，植株莖尖開始抽生（表1）。

2.2 不同砧木莖尖徒長溫度區間不同

②表1中，英文字母大寫表示莖尖生長情況，A抽生，B徒長，C生長不明顯，D表示莖尖萎蔫，E整株死亡；英文字母小寫表示葉片顏色變化，a濃綠，b綠，c淺綠，d失綠，e黃葉增多，f邊緣枯黑，g枯葉增多。

COLT白晝設定為35 ℃的1 d、36 ℃的1 d及37 ℃下第1天此3 d區間內，植株莖尖徒長；ZY-1白晝設定為35 ℃的1 d、36 ℃的1 d及3 7 ℃下第1天、第2天此4 d區間內，植株莖尖徒長；G6白晝設定為35 ℃的1 d、36 ℃的1 d及37 ℃下第1天、第2天此4 d區間內，植株莖尖徒長；07在本試驗溫度下未觀察到植株莖尖徒長；大櫻桃白晝設定為36 ℃的1 d及37 ℃下第1天此2 d區間內，植株莖尖徒長；Y-2白晝設定為35 ℃的1 d、36 ℃的1 d及37 ℃下第1天、第2天、第3天此5 d區間內，植株莖尖徒長；Y-5白晝設定為35 ℃的1 d、36 ℃的1 d及37 ℃下第1天、第2天此4 d區間內，植株莖尖徒長；Y-1白晝設定為35 ℃的1 d、36 ℃的1 d此2 d區間內，植株莖尖徒長；06-16白晝設定為35 ℃的1 d、36 ℃的1 d及37 ℃下第 1天此3 d區間內植株莖尖徒長；Y-4白晝設定為34 ℃的1 d、35 ℃的1 d此2 d區間內，植株莖尖徒長。

2.3 不同砧木在持續高溫下的不同耐受性觀察

白晝持續37 ℃高溫環境下，G6、07、y-2、y-5、y-1等植株莖尖18 d后生長不明顯，葉片顏色保持不變，光合功能趨于正常；COLT植株莖尖在第4天葉片失綠，第9天萎蔫，黃葉增多，12 d死亡；ZY-1植株莖尖在第7天葉片失綠，第12天萎蔫，枯葉增多，14 d死亡；大櫻桃植株莖尖在第3天葉片失綠，第6天萎蔫，枯葉增多，8 d死亡；06-16植株莖尖在第3天葉片失綠，第4天萎蔫，葉片變黃，7 d死亡；Y-4植株莖尖在第2天葉片失綠，第6天萎蔫，枯葉增多，8 d死亡。

3 討論

觀察顯示，COLT、ZY-1、G6、07、大櫻桃、Y-2、Y-5、Y-1、06-16、Y-4等10個櫻桃砧木組培試管苗耐熱性允許范圍不同；G6、07、Y-2、Y-5、Y-1等5個砧木品種在白晝37 ℃夜晚32 ℃處理下能耐受18 d，達到試管苗熱處理脫毒條件。如：G6樣品經中國農科院果樹研究所國家落葉果樹脫毒中心病毒檢測，反轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）顯示，脫除蘋果褪綠斑病毒（ACLSV）、李壞死環斑病毒（PNRSV）、李矮縮病毒（PDV）。而目前生產中因與大櫻桃品種嫁接親合力強，半矮化，且又分別抗寒、抗鹽堿，被廣泛應用的COLT、ZY-1、大櫻桃、Y-4、06-16等5個砧木品種在白晝37 ℃夜晚32 ℃處理下均不能耐受18 d，在此處理下未出現熱害癥狀前的莖尖是否脫毒或病毒數量已極少，待檢測；試管苗耐受18 d處理后是否存在分生組織細胞突變、品種變異風險等，均需進一步試驗觀察。