子宮內膜癌組織中Maspin、P53水平的表達及其相關性研究

郭素珍，何 濤

（河南科技大學第一附屬醫院，河南 洛陽 471003）

·論 著·

子宮內膜癌組織中Maspin、P53水平的表達及其相關性研究

郭素珍，何 濤

（河南科技大學第一附屬醫院，河南 洛陽 471003）

目的 通過檢測子宮內膜癌，子宮內膜不典型增生，正常子宮內膜中的絲氨酸蛋白酶抑制劑（Mammary serine proteaseinhibitor，Maspin），突變型P53基因的表達，以探索它們在子宮內膜癌發生、進展過程中的作用，給臨床診斷、治療及預后判斷提供新的理論依據。方法 采用鏈霉菌素抗生物素-過氧化物酶法（S-P法）研究子宮內膜不典型增生20例、子宮內膜癌42例、同期正常子宮內膜15例中Maspin和P53的表達情況。結果 1. Maspin在三組的陽性表達率分別為40.5%、55.0%和86.7%；P53在三組的陽性表達率分別為69.0%、40.0%和13.3%；2. Maspin與P53的蛋白表達呈負相關。3. Maspin蛋白的表達與患者腫瘤分化程度、手術-病理分期、肌層浸潤深度相關，與淋巴結轉移無關。結論 Maspin與P53均參與了子宮內膜癌的發生及發展過程且二者相互作用，相互影響。

子宮內膜癌；子宮內膜不典型增生；正常子宮內膜；Maspin；P53；免疫組織化學

Maspin是一種絲氨酸蛋白酶抑制劑，能夠抑制腫瘤細胞的遷徙、運動，阻斷子宮內膜癌的發生、及其轉移和血管形成[1]。有研究顯示Maspin與卵巢上皮性癌的發生及分化過程密切相關[2]，并在宮頸癌的發展和轉移中起重要作用[3]。子宮內膜癌變過程中Maspin和P53蛋白的相互關系研究較少。本研究通過對子宮內膜三種組織采用免疫組化S-P法檢測Maspin和P53的表達，以了解子宮內膜癌變的發生機制及其與臨床分期及預后的關系，同時研究兩者的相關性及與臨床病理參數的關系，判斷他們在子宮內膜癌變的發生及發展中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

標本選擇洛陽東方醫院病理科已確診存檔蠟塊子宮內膜癌組織（EC）42例、子宮內膜不典型增生（EAH）20例，隨機選取15例正常子宮內膜（NE）組織。將EC和EAH設為研究組，NE做為對照組。（注：子宮內膜癌組織標本未經過放化療）

1.2 試劑分型

主要試劑鼠抗人Maspin 單克隆抗體（濃縮型）（克隆號EAW24）由福州邁新生物技術開發有限公司代購自美國Thermo Fisher公司，單克隆抗體P53（鼠抗人）購自福州邁新生物技術開發有限公司。S-P試劑盒及DAB顯色劑均購自福州邁新生物技術開發有限公司。一抗用PBS做陰性對照。

1.3 按試劑盒說明書進行免疫組化及結果判定

Maspin陽性為細胞內出現均勻棕黃色顆粒，胞漿為主，胞核亦有部分表達。蛋白表達結果采用半定量積分法：染色強度與平均陽性細胞百分比的乘積＞3，定為免疫反應陽性。組織切片中特定細胞的細胞核上見有棕黃色著色，且無背景染色者為陽性。組織切片內預期細胞中未見棕黃色著色者為陰性結果。P53陽性標準：雙盲法兩人同時觀察切片，采用半定量積分方法進行結果判斷。P53定位于細胞核，棕黃色顆粒為陽性表達。評分標準如下：0分為陽性細胞≤5%，1分（+）為視野6%～25%，2分（++）視野中陽性占26%～50%，50%以上為3分（+++）。

1.4 統計學方法

應用SPSS 17.0統計學軟件進行分析，計數資料采用x2檢驗，兩者相關性檢驗采用Spearman，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 Maspin蛋白、P53在正常子宮內膜，不典型增生及子宮內膜癌中的表達情況

免疫組化結果顯示，Maspin蛋白定位于子宮內膜細胞胞漿內，預示著惡性病變，在細胞核內表達預示著良性病變具體（見圖1）。在正常子宮內膜，異型增生及子宮內膜癌中的Maspin蛋白表達率分別為86.7%、55.0%、40.5%，（見表1）。正常子宮內膜與不典型增生比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；不典型增生與子宮內膜癌比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；正常子宮內膜與子宮內膜癌比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。該結論與喬玉環等[4]研究相同。P53蛋白定位于子宮內膜細胞核內（見圖2）。蛋白表達率分別為13.3%、40.0%、69.0%，正常子宮內膜與不典型增生比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；異型增生與子宮內膜癌比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；正常子宮內膜與子宮內膜癌比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

圖1 Maspin在正常子宮內膜、不典型增生、子宮內膜癌中的表達

圖2 P53在正常子宮內膜、不典型增生、子宮內膜癌中的表達

表1 不同病例中Maspin、P53的表達情況

2.2 統計結果

子宮內膜癌變過程中Maspin與P53的蛋白表達呈負相關關系（r=-0.497，P＜0.05）。

2.3 Maspin、P53的表達與子宮內膜癌臨床病理特征的關系

統計結果顯示，Maspin蛋白的表達與患者發生腫瘤的分期、分化程度及肌層浸潤深度呈明顯負相關（P＜0.05），與淋巴結轉移無關（見表2）。該結論與喬玉環等[4]研究結果不完全相同。P53蛋白的表達與子宮內膜癌肌層浸潤深度呈明顯正相關，與分化程度、淋巴結轉移、TNM分期無關（見表2），表明隨著子宮內膜樣癌浸潤深度增加，P53蛋白陽性率愈來愈高。

表2 Maspin 、P53 的臨床病理特征

3 討 論

蛋白分子質量為42KU的Maspin的基因編碼產物由375個氨基酸殘基組成，A、B、C3個β折疊和一個反應中心環（RCL）形成了Maspin蛋白三級結構的主要構型。RSL結構的改變影響蛋白的各種正常功能。Maspin有抑制腫瘤細胞的遷襲、運動，阻斷其生長、轉移和血管發生的作用，是一種腫瘤抑制基因[1]。方世蘭[5]等研究提示宮頸鱗癌、CIN和正常宮頸組織Maspin表達陽性率分別為52.8%（28/53）、76.7%（23/30）和91.7%（11/12），Maspin與P53在宮頸鱗癌組織中的表達呈負相關。竇艷[6]在大腸腺瘤癌變組織中Maspin與P53過程中的表達呈負相關關系，差異有統計學意義（P＜0.05）。本研究采用免疫組織化學方法檢測子宮內膜癌變過程中Maspin、P53蛋白的表達情況，結果發現Maspin蛋白的表達陽性率隨著子宮內膜癌變的發生逐漸下降，不典型增生組和子宮內膜癌組中的陽性率均明顯低于正常子宮內膜組，且子宮內膜癌與正常子宮內膜比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。P53蛋白的陽性表達率呈遞增趨勢，且正常子宮內膜與子宮內膜癌比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。研究結果表明Maspin、P53蛋白均參與了子宮內膜癌變的過程，Maspin蛋白的丟失在子宮內膜癌變中起到了一定的作用。

子宮內膜癌中Maspin陽性表達的17例中P53陽性表達7例，陰性表達10例，Maspin陰性表達的25例中P53陰性表達3例，陽性表達22例。Maspin與P53在子宮內膜癌變過程中的表達呈負相關關系，差異有統計學意義（P＜0.05）。

P53基因對Maspin基因的啟動子和mRNA的調節是通過與Maspin基因的84-112核苷酸處點的P53位點結合實現[7]。啟動子上的胞嘧啶發生異常甲基化后使Maspin 低表達，野生型P53與該位點結合后使組蛋白乙酰化、使啟動區染色質的接近性增加，通過影響Maspin的甲基化抑制屏障而使Maspin的啟動子激活[8]。

Maspin、P53的表達在與臨床病理特征關系方面，根據統計結果顯示Maspin蛋白的表達與患者發生腫瘤的分期、分化程度及肌層浸潤深度呈明顯負相關（P＜0.05），與淋巴結轉移無關。提示Maspin蛋白參與子宮內膜癌變的發生、發展。P53蛋白的表達與子宮內膜癌肌層浸潤深度呈明顯正相關（P＜0.05），與分化程度、淋巴結轉移、手術-病理分期無關。

Maspin作為細胞凋亡因子在子宮內膜癌變過程中和P53蛋白的相互關系目前究較少，本研究在當前來講具有一定的創新性，Maspin蛋白具有增加細胞粘附和抑制腫瘤轉移的作用，與其它癌基因、抑癌基因共同發揮作用，共同檢測Maspin和P53在子宮內膜組織中的表達有助于判斷子宮內膜癌的發生發展，對子宮內膜的診斷及判定預后有一定指導意義。

[1] Bailey CM, Khalkhal-i Ellis Z, Seftor EA, etal Biological functions of maspin[J]. J Cell Physiol,2006,209(3):617.

[2] 喬玉環,郭瑞霞,孫瑩璞,等.上皮性卵巢腫瘤maspin基因的表達[J].中華婦產科雜志,2008,33(10):632.

[3] Xu C, Quddus MR, Sung C J, etal Maspin expression in CIN 3, micro invasive squam- ous cell carcinoma, and invasive squamous cell carcinom a of the uterine cervix[J].Mod Patho,2005,18(8): 1,1023.

[4] 喬玉環,等.子宮內膜癌組織中Maspin蛋白的表達[D].鄭州鄭州大學學報(醫學版),2008.

[5] 方世蘭.Maspin與p53在宮頸鱗癌中的表達及相關性分析[J].中國婦產科臨床雜,2009,10(5):377-378.

[6] 竇 艷.Maspin、Bax和P53在大腸腺瘤癌變過程中的表達及其意義[D].河北:河北醫科大學,2011.

[7] Zou Z,Gao C,Nagaich A,et a1.P53 regulates the expression of the tumor suppressor gene maspin[J].Biol Chem,2000,275(9):6051.

[8] 白 慶,劉 晟,朱 駿.Maspin 基因與腫瘤關系的研究進展[J].中國現代醫生,2008,40(6).

Expression and correlation of Maspin and P53 in endometrial carcinoma tissues

GUO Su-zhen, HE Tao
(The First Affi liated Hospital, Henan University of Science and Technology, Henan Luoyang 471003, China)

Objective By detecting endometrial carcinoma, atypical endometrial hyperplasia and normal endometrium in serine protease inhibitor of Maspin considerable serine proteaseinhibitor) and mutation type p53 gene expression and to explore them in endometrial cancer occurrence, development process, to clinical diagnosis, treatment and prognosis judgment provides new theoretical basis. Methods The Streptomyces) against biological biotin peroxidase method (S-P method) on endometrial atypical hyperplasia, the other 20 cases, 42 cases of endometrial carcinoma, compared with normal endometrium in 15 cases of Maspin and p53 expression. Results 1 of maspin expression in three groups of rate was 40.5% and 55.0% and 86.7%; p53 in three groups, the positive expression rate was 69.0%, 40.0% and 13.3%; 2.Maspin and p53 protein expression was negatively correlated. 3 the expression of Maspin protein was correlated with tumor differentiation, operation and pathology stage and muscle invasion depth, and has no correlation with lymph node metastasis. Conclusion Maspin and P53 are involved in the development of endometrial cancer and the interaction of the two, the infl uence of the interaction.

Endometrial carcinoma;Atypical hyperplasia; Normal endometrium; Maspin; P53; Immune tissue chemistry

R737.33

B

ISSN.2095-8803.2015.05.001.03