HPLC-ELSD法測定閩臺薏苡仁中甘油三油酸酯的含量

曾建偉 ，李春燕 ，陳敏健 ，黃水珍 ，林忠寧 ，謝善松 ，陸 烝

（1.福建中醫藥大學中西醫結合研究院，福建 福州 350122；2.福建省農業科學院農業生態研究所，福建 福州 350013；3.南平市農業科學研究所，福建 南平 353000）

薏苡仁為禾本科植物薏苡Coix lacryma-jobi L.var.meyuan （Romen.） Stapf的干燥成熟種仁，具有利水滲濕除痹、健脾止瀉、排膿解毒散結之功效，用于水腫、腳氣、小便不利、脾虛泄瀉、濕痹拘攣、肺癰、腸癰、贅疣、癌腫等治療［1］。薏苡仁是藥食兩用植物，一方面含有蛋白質、脂肪、多糖、氨基酸、脂肪酸等營養成分［2-3］；另一方面含有類脂類、甾醇、木脂素、黃酮類和生物堿等成分，具有抗腫瘤、抗病毒、抗菌、免疫調節、抗氧化、鎮痛、降血糖、降血鈣、降血壓等方面的藥用價值［4-7］。薏苡仁在全國大部分地區均有分布，但未見有關臺灣與大陸薏苡仁的質量比較。產地環境影響薏苡仁的品質，薏苡仁中甘油三油酸酯和薏苡素常作為其品質評價的指標

［8-13］。本文建立HPLC-ELSD法測定薏苡仁中甘油三油酸酯的含量，比較閩臺品種的含量差異，為從臺灣引種優質高產藥食兩用品種提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200高效液相色譜儀，包括G1311A四元泵，G1329A自動進樣器，G1316A柱溫箱，Alltech 3300蒸發光檢測器（美國安捷倫公司）；LK-1000A搖擺式中藥粉碎機 （上海隆拓儀器設備有限公司）；MS105DU十萬分之一電子天平 （瑞士梅特勒-托利多公司）；AR2130千分之一電子天平（美國奧豪斯儀器有限公司）；KQ-500型超聲波清洗器 （昆山市超聲儀器有限公司）；Milli-Q超純水機（法國Millipore公司）。

1.2 試藥 甘油三油酸酯對照品 （批號：111692-201203，中國食品藥品檢定研究院）；二氯甲烷（色譜純，批號：D116146，美國阿拉丁工業公司）；乙腈（色譜純，批號：201310726，國藥集團化學試劑有限公司）；薏苡仁，采自臺灣花蓮及福建浦城、寧化、建甌和建陽，經林忠寧副研究員鑒定為薏苡Coix lacryma-jobi L.var.meyuan （Romen.） Stapf的種仁。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent Eclipse XDB-C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈－二氯甲烷（60∶40）；流速：1.0 mL ／min；進樣量：10 μL；柱溫：30℃；ELSD 檢測器參數：氮氣流速 1.5 L／min，漂移管溫度70℃，增益4。在此色譜條件下，甘油三油酸酯對照品色譜圖見圖1，樣品色譜圖見圖2。

圖1 甘油三油酸酯對照品HPLC圖

圖2 薏苡仁樣品HPLC圖

2.2 溶液配制

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取甘油三油酸酯對照品15.43 mg，置10 mL的容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，配成濃度為1.543 mg／mL對照品儲備液。精密吸取4 mL對照品儲備液，置10 mL的容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，即得濃度為0.617 mg／mL對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品粉末 （過60目篩）約2.0 g，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中，精密加入流動相50 mL，稱定重量，浸泡2 h，超聲（功率 300 W，頻率50 kHz）提取 30 min，放冷，再稱定重量，用流動相補足減失的重量，過0.45 μm微孔濾膜，取續濾液，即得。

2.3 線性考察 分別精密吸取對照品溶液5、10、15、20、25 μL 依次注入高效液相色譜儀，按“2.1”項下色譜條件測定，以對照品進樣量（μg）對數值為橫坐標（X），峰面積對數值為縱坐標（Y），繪制標準曲線， 得回歸方程為：Y＝1.317X＋3.298，r＝0.9993。甘油三油酸酯在3.086～15.43 μg范圍內，峰面積對數與進樣量對數呈良好的線性關系。

2.4 精密度考察 取對照品溶液，重復連續進樣5次，記錄色譜峰面積，計算RSD為0.69%。

2.5 穩定性考察 取臺灣供試品溶液，按“2.1”色譜條件下，每隔2 h進樣1次，共進樣5次，記錄色譜峰面積，計算RSD為1.54%，表明供試品溶液在10 h內穩定。

2.6 重復性考察 取臺灣薏苡仁粉末約2.0 g，共5份，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項色譜條件下進樣，記錄色譜峰面積，計算甘油三油酸酯的含量平均值為0.94%，RSD為2.34%。

2.7 回收率考察 取臺灣薏苡仁約1.0 g，共5份，分別置具塞錐形瓶中。另精密稱取甘油三油酸酯對照品81.62 mg，置25 mL容量瓶中，用流動相溶解并定容至刻度，分別精密吸取3 mL置上述具塞錐形瓶中，按 “2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項色譜條件下進樣，測定，計算甘油三油酸酯的平均回收率為99.76%，RSD為1.32%。結果見表1。

表1 甘油三油酸酯回收率考察

2.8 含量測定 稱取閩臺兩地薏苡仁樣品約2.0 g，每個產地樣品平行取3份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，按“2.2.2”項下的方法制備供試品溶液，按“2.1”項色譜條件下進樣，記錄各樣品峰面積，采用標準曲線方程計算含量，結果見表2。

表2 閩臺薏苡仁中甘油三油酸酯的含量測定（n＝3）

3 討 論

3.1 提取方法 參考2010版《中華人民共和國藥典》［1］，薏苡仁粉碎過60目篩，以流動相為提取溶劑，采用超聲法提取藥材中甘油三油酸酯，經驗證切實可行。

3.2 流動相的確定 流動相曾用分析純二氯甲烷，發現ELSD噪音特別大，嚴重干擾了信號峰，導致無法正常檢測。后改用進口色譜純的二氯甲烷，解決了ELSD噪音太大的問題，保證ELSD的正常檢測?！吨腥A人民共和國藥典》規定流動相的比例為乙腈-二氯甲烷（65∶35），結果發現保留時間過長，峰形較鈍。經摸索，流動相修定為乙腈-二氯甲烷（60∶40），甘油三油酸酯出峰時間控制在10 min以內，峰形改善，分離度亦能滿足要求。

3.3 含量分析 從表2可知，閩臺兩地薏苡仁中甘油三油酸酯的含量差異明顯，臺灣薏苡仁中甘油三油酸酯的含量最高，福建浦城的次之。如何提高福建省薏苡仁的品質，從臺灣引種栽培不失為一條捷徑。

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