沙丁胺醇及其常用檢測方法

文│孫書剛 李建偉 張富剛 孫書濤 陳國信（河北省滄州市青縣農業局）

沙丁胺醇及其常用檢測方法

文│孫書剛 李建偉 張富剛 孫書濤 陳國信（河北省滄州市青縣農業局）

“瘦肉精”主要包括鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、塞布特羅等，是屬于β類興奮劑的苯乙胺類藥物。其中的沙丁胺醇歸屬于β2類興奮劑。養殖戶喂飼沙丁胺醇后，可達到豬群生長速度提高、瘦肉率增加、賣相好（豬毛色紅潤光亮等）的目的。飼喂沙丁胺醇的豬只，在屠宰后肉色鮮紅、脂肪層薄，往往是皮貼著瘦肉，瘦肉豐滿，十分迎合大眾消費市場。但是，這嚴重損害了我國百姓的身體健康，由于誤食瘦肉精而產生不良癥狀的事件層出不窮，例如2005年江西應用技術學院黃金校區75名學生誤食含瘦肉精豬肉，集體中毒；2006年上海200余人瘦肉精中毒，廣東省惠州市5名工人豬肝中毒，瘦肉精超標1000倍；2008年，浙江嘉興中茂塑膠實業有限公司70名員工在午飯后開始出現手腳發麻、心率加快、嘔吐等癥狀，醫院確認為瘦肉精中毒；2009年，廣州市出現瘦肉精惡性中毒事件，共67人發病；2011年雙匯瘦肉精事件……瘦肉精給人們帶來的危害不僅僅是這些，更多的是對肉品質量安全的恐懼。由于瘦肉精中鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺已經廣為人知，于是“二代瘦肉精”沙丁胺醇正在被不法商戶逐漸推廣。

一、沙丁胺醇的化學性質

沙丁胺醇，白色結晶狀粉末，無臭，味微苦。化學名為1-（4-羥基-3-羥甲基苯基）-2-（叔丁氨基）乙醇，分子式為C13H21NO3，分子量為239.31，易溶于水，能溶于甲醇，微溶于乙醇，不溶于乙醚和三氯甲烷。熔點為154～158℃，在熔融時同時分解。沙丁胺醇易與硫酸形成白色或近白色的結晶性粉末狀鹽。

二、沙丁胺醇的危害

沙丁胺醇具有很強的熱穩定性和生化穩定性，一般烹飪很難使其失活或清除。人體對沙丁胺醇吸收快，排泄慢，極易產生蓄積。沙丁胺醇易蓄積于眼角膜，在毛發、肺、肝、腎、肌肉、尿樣、血液中也有殘留。食用含有沙丁胺醇的豬肉，對心臟和肝、腎的毒性較大，甚至會引發人體多種不良反應，主要包括震顫、心悸、頭痛、惡心、失眠等，還會出現肌肉痙攣、過敏反應等罕見癥狀。除此之外，沙丁胺醇還會誘發和加重糖尿病、心腦血管病人的病情，嚴重威脅著人們的身體健康和生命安全。

三、沙丁胺醇常用檢測方法

1.感官檢測。外觀方面，長期飼喂沙丁胺醇的生豬皮膚白里透紅、光潔、毛少，臀部結實上翹、勻稱呈紅亮狀。背部驅打后易見傷痕且長久不消退。行走不靈活，易發生跛行，蹄部易受傷并發生感染。一般健康豬肉呈淡紅色，肉質彈性好，不會有“滲血”現象。而飼喂沙丁胺醇比較嚴重的豬屠宰后，肉色異常鮮紅透亮，后臀肌肉飽滿、脂肪薄，肉皮緊貼瘦肉、瘦肉纖維疏松。對豬屠宰后的感官識別，可以快速簡便地作出初步判定。

2.膠體金免疫層析法。膠體金免疫層析法具有方便快捷、操作簡單的特點。一般10～15分鐘便可完成初步篩查得出結論。相對于其他檢測方法而言，其生產成本和檢測成本均較低。但是，膠體金免疫層析法只能作為樣品的初步篩查方法，僅用來判斷樣品是否可疑，不能準確定性是否含有沙丁胺醇。

3.酶聯免疫吸附法。即競爭性酶聯免疫吸附法。目前，在我國這種技術已經非常成熟，市場上有很多商品化的檢測試劑盒，只要按照試劑盒中的說明書即可完成

檢測，操作簡單快捷，準確率較高。但是需要注意的是：在分子結構方面，沙丁胺醇和克倫特羅較為相似，因此克倫特羅抗體和沙丁胺醇反應具有一定的交叉性，這就會導致同一個樣品用沙丁胺醇試劑盒和克倫特羅試劑盒檢測，如果是陽性樣品就會顯示兩項都是陽性，不易區分此樣品含有哪一種瘦肉精。因此，酶聯免疫吸附法也常常用于大批量樣品的篩選工作，不能作為最后科學準確定性的依據，必須使用其他方法來進行確證。

4.氣相色譜法。氣相色譜法檢測動物組織和尿液中沙丁胺醇的含量已經比較成熟，例如高效氣相色譜法、氣相質譜聯用法等。氣相質譜聯用法檢測樣品，常常需要將樣品進行前處理，然后凈化，最后衍生化后于氣相質譜聯用分析儀進行分析。樣品進行前處理常使用酶解法。這是因為水解法，反應非常強烈，且通常使用鹽酸或高氯酸。而酶解法則比較溫和，但是缺點為反應時間較長，常使用的試劑是β-葡萄糖苷酸酶／芳基硫酸酯酶。凈化時使用固相萃取法，多數實驗人員選擇使用MCX或SCX固相萃取小柱。凈化后使用氮、氧-雙三甲基硅烷三氟乙酰胺（BSTFA）進行衍生化，衍生完成后，于氣相質譜聯用分析儀上進行測定。氣質聯用檢測法測定沙丁胺醇具有檢出限較低、穩定性好、準確性高、靈敏度高的特點，通過萃取凈化大大降低了樣品中雜質的干擾。但是由于氣相質譜聯用分析儀儀器設備昂貴，很難在基層普及，檢測操作環節較為復雜，對實驗要求較高，且檢測耗時較長，不適用于一線檢測。

5.液相色譜法。液相色譜法不需要對提取液進行柱前衍生，樣品處理較為簡單，例如高效液相色譜法、超高效液相色譜法、液相質譜聯用法等。秦永平等創建了反相高效液相色譜-紫外法，用以測定血漿中沙丁胺醇含量，該法的最低檢測限0.3微克/升，回收率在98%～109%之間，相對標準偏差（RSD）＜8%。金雁等使用高效液相色譜-二極管陣列檢測器可以檢測出動物組織中沙丁胺醇的含量。尚紅霞等利用該方法檢測飼料中的沙丁胺醇的含量，并利用Amberlite XAD-2大孔吸附樹脂進行固相萃取，有效解決了萃取過程中的乳化問題。二級陣列管檢測器的使用，不僅增加了沙丁胺醇檢測定性的準確性，且該方法的分析成本較低，易于操作及推廣。Ram N.Gupta

等創建了沙丁胺醇檢測的反相柱液相色譜-熒光法，熒光檢測器的激發波長和發射波長為275納米和310納米，沙丁胺醇的最低檢測限0.2微克／升。趙善貞等利用高效液相色譜-串聯質譜法，測定豬肝中沙丁胺醇的最低檢出限0.1微克／千克，回收率為76.8%～82.8%，RSD小于5.8%。該法具有靈敏度高、檢測準確的特點，但質譜儀操作復雜，價格昂貴，不適于基層使用。超高效液相色譜能獲得更高的柱效，在更寬的線性范圍內保持柱效恒定，在峰容量、分析效率、靈敏度等方面較高效液相色譜有很大提高。

四、小結與展望

雖然沙丁胺醇殘留檢測的方法非常多，但是目前我國行業標準和國家標準使用的方法為液相質譜聯用法和氣相質譜法，此兩種方法都能夠得到較準確的檢測沙丁胺醇的含量，但是樣品預處理過程都非常復雜且耗時較長。酶聯免疫法處理樣品預處理過程操作簡便，可同時檢測多個樣品，很大程度上縮短了分析時間，但是僅可以作為快速篩選手段，不能作為定性確證依據。因此，對液相質譜聯用法和氣相質譜法的進行簡化，對現有復雜、繁瑣、耗時長的樣品預處理方法的進行改進是非常必要的。這就需要我們監察工作者不斷探索新的方法，使得沙丁胺醇的檢測工作更加方便、快捷、準確，為老百姓食用放心肉提供可靠保障。