角蛋白裂解法治療亞臨床階段人乳頭瘤病毒感染的臨床試驗研究

劉永浩??王玉玲??姚勇??肖鳳華

[摘要] 目的 探討角蛋白裂解法治療亞臨床階段人乳頭瘤病毒感染的臨床效果。 方法 自行配置藥物治療亞臨床階段人乳頭瘤病毒感染尖銳濕疣患者31例，涂擦整個外陰表皮和肛周表皮，每周記錄皮損情況，并記錄是否有病理復發情況。同時在皮膚的第二個增殖周期是做HPV-DNA-PCR檢查，并記錄檢查的結果。 結果 31例患者在用藥過程中，在一個皮膚增殖周期內有約20例復發，在第一個皮膚增殖周期中未見有疣體長出皮膚表面。HPV-DNA-PCR、陰性率為35.5%。第二個周期是為74.2%。第三個周期時為80.6%。仍然約有20%的病理查出HPV-DNA陽性，但是未見有疣體長出。在檢驗出的DNA分型中其中HPV6型陽性率最高，HPV6，HPV11，HPV42，HPV18，HPV52，HPV56這六種DNA分型出現約95%的概率。 結論 本法治療亞臨床階段人乳頭瘤病毒感染效果良好，副作用小。

[關鍵詞] 角蛋白；角蛋白相關中間絲聚合蛋白；人乳頭瘤病毒；過氧二酰胺；乙酸；甘油

[中圖分類號] R285 [文獻標識碼] B [文章編號] 2095-0616（2015）17-181-04

Clinical experimental study of keratin lysis method treatment of human papillomavirus infection duiring subclinical stage

LIU Yonghao WANG Yuling YAO Yong XIAO Fenghua

Linyi Traditional Chinese Medicine Hospital，Linyi 276002，China

[Abstract] Objective To study the clinical effect of keratin lysis method in the treatment of human papillomavirus infection duiring subclinical stage. Methods 31 patients with condyloma acuminatum，who were infected by human papillomavirus duiring subclinical stage，were treated with drugs made by oneself，were embrocate on the whole vulvar epithelium and perianal epithelium.To record the skin lesions situation every week，and to record the situation of pathological recurrence or not.At the same time to make HPV-DNA-PCR inspection on skin during the second proliferation cycle，and to record examination results. Results The process of medication on the 31 patients，there were approximately 20 cases recurrence in every skin proliferation cycle.The HPV-DNA-PCR negative rate was 35.5% during the first skin proliferation cycle without wart outgrown on skin surface，which was 74.2% during the second cycle，and which was 80.6% during the third cycle with 20% of positive pathological without wart outgrown.The highest positive rate was HPV6 of all the docimastic DNA typing，the 95% probability appearance on the six type of DNA were HPV6，HPV11，HPV42，HPV18，HPV52，HPV56. Conclusion Keratin lysis method in the treatment of human papillomavirus infection duiring subclinical stage has better effect and little side effect.

[Key words] Keratin；Intermediate filament protein；Human papillomavirus；Peracetic diamide；Acetic acid；Glycerol

尖銳濕疣（condyloma acuminatum，CA）主要發生于生殖器部位的表皮，具有相當高的發病率和復發率。皮膚經過摩擦和揉搓后表面的角質層會出現微裂痕，HPV病毒顆粒經過表皮的微裂痕侵染正常的組織，最終定居在真皮的層棘和基底層[1]，在此復制繁衍并改變了正常皮膚組織的結構，感染的皮膚病灶離散型分布，有的能融合成一個整體形成一個區域。在做醋酸白檢驗時，病變的區域太過于小，由于局部的組織的角質層吸光能力不明顯，變色不明顯。因此感染初期和沒有明顯的疣體生長出來時的HPV病變是不能通過手術清除。經過長時間進化，HPV病毒可以已經進化出免疫逃逸機制，使得病毒得以在人體生存[2]。經過HPV-DNA-PCR檢驗陽性的患者，未發現疣體就可以認為處于亞臨床階段。利用HPV 感染過的表皮角蛋白結構與正常相關性蛋白表達之間的對于特定小分子化學物質的吸收特性的差異，為治療和藥物的研發提供了一種新的途徑。endprint

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年3月～2015年2月在我院門診就診的患者31例，所有患者均為人乳頭瘤病毒第一次發病患者。患者能明確提供從發現肉瘤生長之前能回溯追查有野游史的病例。到我院就診前沒有經過其他的治療。選取外觀形態能確定為典型尖銳濕疣的病例。患者沒有皮損和其他明顯的皮膚病變。排除患者為過敏性體質。患者的年齡不限。研究對象均為男性。疣體生長的部位選在生長在陰莖上，肛門周圍病變的患者。患者經過離子刀行外科手術治療。大約經過一周至半個月，創口愈合后。收集皮膚表面脫落皮屑做HPV-DNA-PCR檢驗仍為陽性的患者。確定為有亞臨床感染繼續存在。

1.2 藥物配置

藥物為自行配置，藥物的主要成分為乙酸、乙酸鈉（別名醋酸鈉，本實驗中因為需要用醋酸白反應的機理，考慮到研究的需要統一用乙酸鈉標注）、甘油（1，2，3-三羥基丙醇）、過氧碳酰胺。以上藥物的純度均為分析純藥物試劑，嚴格把關確保嚴格進行無菌操作。

1.3 方法

1.3.1 患者確定為亞臨床患者標準和方法 選取門診就診的在外陰部肉眼明顯識別能確定為乳頭瘤病毒感染的男性患者，年齡21～69歲。排除有皮膚過敏和其他皮膚病的患者作為施治對象。對外陰皮膚表面有疣體生長的局部皮膚消毒局麻后，把疣體切除。囑咐患者自行用碘伏消毒外陰皮膚表面每天一次。連續用大約十天左右。待皮膚傷口愈合后。用沾有0.9%氯化鈉鹽水的棉棒，在患部的局部皮膚表面擦拭。取到表面脫落細胞后做HPV-DNA-PCR檢驗。檢查結果為陽性的患者可以認為為亞臨床感染患者。

1.3.2 患者局部皮膚表面的處理 用無菌用水清洗干凈外陰部。用75%的酒精棉球擦拭干凈，晾干。

1.3.3 藥物的配制 用甘油作溶劑配制5%的過氧碳酰胺溶液，加入少量乙酸鈉，隨后按質量比加入36%乙酸溶液，配制成乙酸濃度為3%的溶液，再加入少量的焦磷酸鈉。用攪拌機攪拌均勻，形成乳化液待用。

1.3.4 藥物的應用方法 局部皮膚表面處理好后，用棉棒沾取配置好的溶液，均勻的擦整個外陰表皮和肛周表皮。以擦拭完后皮膚表面不粘稠為度。涂完后自然晾干不用包覆。每天涂用兩次，早晚各一次。以30天為1個治療周期。總共記錄三個周期。

1.3.5 試驗對象的用藥方法 根據皮膚表層細胞的生長周期約為28天設計用藥周期。以7d為1個觀察周期。每周記錄皮損情況。并記錄是否有病理復發情況。考慮到自身病毒顆粒的擴散情況，在皮膚的第二個增殖周期是做HPV-DNA-PCR檢查。并記錄檢查的結果。如果HPV-DNA-PCR為陰性不在作為下一個治療周期的研究對象。病例的發病部位選在陰莖、陰囊、腹股溝和肛周。

1.3.6 效果的記錄和確定的標準 藥物濃度選在3%～8%沒有明顯的皮損，記錄DNA分型，用藥時間及皮損出現情況，病情變化。

2 結果

31例研究對象在用藥過程中，第一個用藥周期內部分患者表皮有微癢和灼熱感，主要發生在陰囊和腹股溝部位。在陰阜區和陰莖涂藥的皮膚區域上，皮損表現為變淡白和微紅，輕微的有些水腫。在一個皮膚增殖周期內有約20例復發。復發的疣體外觀呈現萎縮狀（如圖1）。說明藥物影響到了病理細胞的增殖。在第一個皮膚增殖周期中沒見有疣體長出皮膚表面。HPV-DNA-PCR 陰性率為35.5%（11/31）。第二個周期是為74.2%（23/31）。第三個周期時為80.6%（25/31）。仍然約有20%的病理查出HPV-DNA陽性。但是未見有疣體長出。在檢驗出的DNA分型中其中HPV6型陽性率最高，HPV6，HPV11，HPV42，HPV18，HPV52，HPV56這六種DNA分型出現約95%的概率。見表1。

3 討論

人類乳頭瘤病毒是一類感染表皮和黏膜鱗狀

表1 治療效果及確定的標準

HPV分型 用藥周期

（d） 皮損癥狀出現 皮損體征 治療期間復發和中斷用藥 最終PCR結果

6，11，16，18，42，52，56 1～7 感覺微癢，灼熱感 皮膚淡白嬌嫩 復發13例。疣體生長不旺盛 不做PCR考核周期

8～14 未見明顯皮損 皮膚淡白嬌嫩 復發6例。疣體生長不旺盛 不做PCR考核周期

15～30 未見明顯皮損 皮膚淡白嬌嫩 復發1例。疣體明顯萎縮狀增生 不做PCR考核周期

31～50 未見明顯皮損 皮膚呈淡紅色 肉眼未見疣體生長 HPV-DNA-PCR 陽20例，陰11例

18，42 ，52 50～70 未見明顯皮損 皮膚呈淡紅色 肉眼未見疣體生長 HPV-DNA-PCR 陽8例，陰12例

18，52 70～90 未見明顯皮損 皮膚呈淡紅色 肉眼未見疣體生長 HPV-DNA-PCR 陽6例，陰2例

a

b

圖1 復發的疣體外觀

上皮的小DNA病毒，具有高度種屬特異性和特殊嗜上皮性[3-4]。表皮角質形成細胞和黏膜鱗狀上皮細胞的是其天然宿主[5]。人表皮的角質層位于表皮的最外層，由10～20層扁平的角化細胞組成[6]，無細胞核或者其他細胞器結構，只殘余有角蛋白絲和基質。角質層細胞內含有直徑約為6～8nm的a-角蛋白絲及鑲嵌在無定型基質中的纖維蛋白中，新生細胞向上移動產生堅韌的纖維角蛋白[7]。表皮層組織每層的蛋白質種類有差異。基底細胞主要表達具有增殖特異性角蛋白cK5，cK14，進入棘層后分化特異性角蛋白cK1，cK10的表達不斷增加[8]。角蛋白相關蛋白filaggrin的表達出現于分化特異性角蛋白cK1，cK10表達之后，主要位于顆粒層細胞中，它與cK1，cK10均為角質形成細胞分化的標志[9]。cK16在正常表皮中不表達，是角質形成細胞過度增殖的標志[10]。病毒進入細胞后，僅在一定分化程度的上皮細胞內增殖，感染表皮細胞中有增殖能力的基底細胞，并嚴格跟隨角質形成細胞的角化過程而分化成熟。在被感染的角質形成細胞中進行病毒早期和晚期基因的轉錄翻譯，組裝形成病毒顆粒。被HPV感染的病理組織中角蛋白cK10的表達缺失[11]，和正常的皮膚組織相對比cK14 在顆粒層中仍有較強的表達并且分布不均勻，提示病理細胞合成蛋白質的功能受到了影響[8]。角質層增厚角化不全細胞有輕度異型性棘層細胞明顯增生，上皮釘突增厚延長在上皮層中上部可見多少不等的散在或成群的挖空細胞，核大而且大小不等.可見雙核[11]。在生殖器和肛周以 HPV6、11、16、18為常見[12]。HPV16、18、31、33、35-39、45、51-52、56、58常可導致皮膚癌變[13-15]。endprint

乳頭瘤病毒感染皮膚后破壞了皮膚的完整性，亞臨床階段的感染，難以準確的定位，不能通過外科手術的辦法清除。被感染的表皮細胞，細胞器架構被破壞，細胞間質橋聯角蛋白變性。角蛋白的組分和三維螺旋折疊結構與正常表皮的角蛋白明顯不同。極性小分子物質滲入表皮后，藥物滲入的劑量和速度的差異，表皮可見光譜吸收不均勻有顯色反應。本研究依據這一機制合成強滲透性和生物學毒性的藥物過氧二酰胺，在配制成乙酸甘油溶液。乙酸浸潤皮膚后，過氧二酰胺潤脹病變組織。過氧基裂解被感染區域的角蛋白和病變細胞器。滅活病毒微粒和被感染的真皮層細胞，阻止了潛伏期病毒的復制傳染。

本研究方法采用裂解法治療，本身患病皮膚缺失有效組織成分的表皮發生了錯構弱化了正常表皮的屏障作用，使得帶電的小分子化學物質有了進入深層組織的通道。由于大量負電荷引起強烈的分子推斥力導致蛋白質分子的溶脹和裂解，部分埋藏在蛋白質分子內部的羧基、酚羥基和巰基離子化，這些離子化基團趨向于將自己暴露在水環境中，因此造成角蛋白多肽鏈的散開[16]。過氧乙酸滲入角蛋白分子內部，打開角蛋白二硫鍵和氫鍵的作用力增大，拆分的分子增多，滲入病變組織中的藥物就會提高，同樣帶有細胞毒性的其他帶電小分子也可以進入，用過氧碳酰胺和乙酸分子協同應用時藥物可以比正常組織高的多濃度的滲入病變組織中裂解病變的角蛋白，溶膠細胞間質脂質膜。同時還能滅活細胞器和細胞核，達到治療的效果。

綜上，本法治療亞臨床階段人乳頭瘤病毒感染尖銳濕疣患者31例，臨床上治療有效率為100%，轉陰率能達到80%，效果良好，副作用小。

[參考文獻]

[1] 付曼妮，朱中梁.陰道鏡活檢與人乳頭瘤病毒檢測在宮頸病變診斷中的對比研究[J].中國性科學，2015，24（1）：70-72.

（下轉第頁）

（上接第頁）

[2] 徐又先，濮德敏.宮頸病變與人乳頭瘤病毒的免疫逃逸機制[J].中國生育健康雜志，2012，23（4）：319-320，封3.

[3] 李彥，張守民，李振魯.尖銳濕疣患者人乳頭狀瘤病毒感染細胞免疫功能的相關性研究[J].中華醫院感染學雜志，2014，24（12）：2874-2876.

[4] 顧科峰，葛丹丹.尖銳濕疣患者人乳頭狀瘤病毒感染類型與臨床復發的相關性研究[J].中華醫院感染學雜志，2014，24（7）：1633-1634，1637.

[5] 高興華，楊陽.人乳頭瘤病毒感染相關皮膚腫瘤的研究進展[J].中國醫科大學學報，2014，43（2）：97-100.

[6] 蔄茂強，劉俐，呂成志.角質層的含水量及其對皮膚生物功能的影響[J].臨床皮膚科雜志，2008，37（12）：816-818.

[7] 胡晉紅.皮膚藥理學[M].北京：化學工業出版社，2008：14，97.

[8] 龐曉文.尖銳濕統患者表皮角蛋白及其相關蛋白表達模式的研究[J].臨床皮膚科雜志，2006，35（6）：354-356.

[9] Brysk MM，Arany I，Brysk H，et al.Gene expression of markers associated with proliferation and differentiation in human keratinocytes cultured from epidermis and from buccal mucosa[J].Arch Oral Biol，1995，40（9）：855-862.

[10] 陳曦曦.宮頸上皮內瘤變與生殖道感染的相關性研究[D].合肥：安徽醫科大學，2014：35-42.

[11] 劉念斌.尖銳濕疣臨床病理分析[J].濟寧醫學院學報，2007，30（2）：143.

[12] 王鶴，喬友林.人乳頭瘤病毒型別及其相關疾病[J].中國醫學科學院學報，2007，29（5）：678-684.

[13] 趙辨.臨床皮膚病學[M].第3版.南京：江蘇科學技術出版社，2001：68-73.

[14] 陳汶，劉彬，戎壽德，等.人乳頭狀瘤病毒DNA檢測進展[J].中華檢驗醫學雜志，2005，28（5）：552-554.

[15] 王璋，許時嬰，湯堅.食品化學[M].北京：中國輕工業出版社，1999：59-65.

（收稿日期：2015-06-03）endprint