麥冬提取物中總黃酮的含量測(cè)定

魏 明

河南省寧陵縣中醫(yī)院傳染科，河南寧陵 476700

麥冬提取物中總黃酮的含量測(cè)定

魏 明

河南省寧陵縣中醫(yī)院傳染科，河南寧陵 476700

目的 建立麥冬中總黃酮的含量測(cè)定方法。 方法 采用紫外分光光度法，以橙皮苷為對(duì)照品，在283nm對(duì)麥冬總黃酮進(jìn)行含量測(cè)定。 結(jié)果 橙皮苷在 3.1～18.6μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，R2=0.9992，平均回收率為99.69%，RSD 為0.87% 。所測(cè)3批麥冬中總黃酮的平均含量分別為4.19%（RSD=1.85%）、4.31%（RSD=2.16%）、4.26%（RSD=2.39%）。 結(jié)論 所建立的麥冬總黃酮測(cè)定方法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果快速、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可作為麥冬總黃酮含量測(cè)定方法。

麥冬；總黃酮；紫外分光光度法；含量測(cè)定

麥冬為百合科植物麥冬Ophiopogon japonicus（L.f） Ker-Gawl.的干燥塊根。其味甘、微苦，性微寒，歸心、肺、胃經(jīng)[1]，具有養(yǎng)陰生津，清心潤(rùn)肺的功效。麥冬主要化學(xué)成分為甾體皂苷、黃酮、多糖等。現(xiàn)代藥理學(xué)表明，麥冬具有抗心肌缺血、降血糖、抗衰老、抑制腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、耐缺氧等活性[2-7]。麥冬中黃酮類(lèi)成分主要為高異黃酮，具有良好的抗自由基、抗氧化、抗炎、抗應(yīng)激、抗組胺、心血管保護(hù)功能和磷酸化抑制等作用[8]。本研究對(duì)麥冬中總黃酮進(jìn)行了含量測(cè)定，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用這一藥材資源和對(duì)該藥材進(jìn)行質(zhì)量控制提供了參考。

1　儀器與試藥

1.1儀器

JHBE-50閃式提取器（河南金鼎科技發(fā)展有限公司）；XS105型電子分析天平（瑞士梅特勒儀器有限公司）；SHE-D（III）循環(huán)水式真空泵（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）；數(shù)顯電熱恒溫水浴鍋（常州國(guó)華電器有限公司）；KH2200DB型超聲波清洗器（江蘇省昆山市超聲儀器有限公司）；UV-7540紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海精科實(shí)業(yè)有限公司）。

1.2試藥

橙皮苷對(duì)照品（批號(hào)：110721-201014）購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所；麥冬藥材購(gòu)于張仲景大藥房，經(jīng)鑒定為百合科植物麥冬Ophiopogon japonicus（L.f）的干燥塊根；甲醇、乙醇、乙醚等均為分析純；水為超純水。

2　方法與結(jié)果

2.1麥冬總黃酮粗粉的制備

取麥冬飲片，加6倍量75%乙醇于閃式提取器提取2次，每次8min，提取液過(guò)濾，濾液濃縮至無(wú)醇味，浸膏加水混懸，冷凍干燥，即得麥冬總黃酮粗粉。

2.2對(duì)照品溶液的制備

稱(chēng)取干燥至恒重的橙皮苷對(duì)照品約3mg，精密稱(chēng)定，置于10mL容量瓶中，加甲醇溶解并補(bǔ)充至刻度，搖勻，即得（濃度為0.31mg/mL）。

2.3供試品溶液的制備

稱(chēng)取麥冬總黃酮粗粉5mg，精密稱(chēng)定，加甲醇溶解并定容于10mL的容量瓶中，搖勻。用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，即得供試品溶液。

表1　麥冬總黃酮加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

2.4最大吸收波長(zhǎng)的選擇

精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液1.0mL，置于10mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。以相應(yīng)試劑為空白對(duì)照，取稀釋后的對(duì)照品溶液和供試品溶液在波長(zhǎng)200 ～ 400nm范圍內(nèi)掃描，結(jié)果顯示供試品與對(duì)照品在283nm附近均有最大吸收峰，故確定測(cè)定波長(zhǎng)為283nm。

2.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密吸取對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.4、0.5、0.6、0.8mL，分別置于10mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。以不含對(duì)照品溶液作為空白，采用紫外分光光度法，在283nm處測(cè)定其吸收度，以吸光度A對(duì)對(duì)照品濃度C（μg/mL）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：A=0.029C-0.005（R2=0.9992），表明橙皮苷在3.1～18.6μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.6精密度試驗(yàn)

精密量取對(duì)照品溶液1.0mL，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下方法操作，于283nm波長(zhǎng)處連續(xù)測(cè)定吸光度6次，RSD為1.30%，說(shuō)明精密度良好。

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下方法操作，分別在0、30、60、90、120、180、240min測(cè)定吸光度，RSD為1.33%，結(jié)果顯示供試品溶液在240min內(nèi)其吸光度基本穩(wěn)定。

2.8重復(fù)性試驗(yàn)

平行稱(chēng)取麥冬總黃酮粗粉5mg共6份，按“2.3”項(xiàng)下制備供試品溶液，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下方法操作，結(jié)果麥冬總黃酮含量的RSD為1.44%，說(shuō)明重復(fù)性符合含量測(cè)定的要求。

2.9加樣回收率試驗(yàn)

稱(chēng)取已知含量的同一批樣品9份，精密稱(chēng)定，分別精密加入不同量的對(duì)照品溶液，按供試品溶液制備方法制備，測(cè)定，計(jì)算回收率，平均回收率為99.69%，RSD為0.87%，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.10樣品含量測(cè)定

精密稱(chēng)取3批麥冬總黃酮粗粉各2.5mg（各5份），按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下操作。以不含供試品溶液為空白，測(cè)定吸收度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線。計(jì)算樣品中總黃酮的平均含量分別為4.19%（RSD=1.85%）、4.31%（RSD=2.16%）、4.26%（RSD=2.39%）。

3　討論

本實(shí)驗(yàn)采用紫外分光光度法對(duì)麥冬總黃酮進(jìn)行測(cè)定，以橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)品為對(duì)照品，經(jīng)全波長(zhǎng)掃描確定其最大吸收波長(zhǎng)為283nm?？傸S酮在檢測(cè)濃度范圍內(nèi)線性良好，回收率符合要求。紫外可見(jiàn)分光光度法測(cè)定麥冬中總黃酮，具有準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，為中藥麥冬的定量分析和品質(zhì)評(píng)價(jià)及含量測(cè)定提供了快速、準(zhǔn)確、有效的分析方法。黃酮類(lèi)化合物的提取方法有水提法、有機(jī)溶劑提取法、超聲波法、超濾法、超臨界提取法、微波法等[9-13]。本研究采用閃式提取方法提取麥冬總黃酮，具有操作迅速、提取完全等特點(diǎn)。且含量測(cè)定過(guò)程不需要顯色，操作簡(jiǎn)便、穩(wěn)定性好，為從麥冬中提取總黃酮提供了簡(jiǎn)便的實(shí)驗(yàn)方法。

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Content determination of total flavonoids in radix ophiopogonis extracts

WEI Ming
Department of Contagious, Ningling County TCM Hospital, Ningling 476700, China

Objective To establish the determination methods of total flavonoids in Radix Ophiopogonis extracts. Methods To determine the total flavonoids in Radix Ophiopogonis extracts in UV of 283nm adopt UV spectrophotometry and use hesperidin as control sample. Results The linear relationship of hesperidin in (3.1～18.6) μg/mL was better, R2=0.9992, the average recovery rate was 99.69%, RSD was 0.87%. The average content of total flavonoids of the 3 batchs of Radix Ophiopogonis were 4.19%（RSD=1.85%）, 4.31%（RSD=2.16%）, 4.26%（RSD=2.39%）. Conclusion The determination methods of total flavonoids in Radix Ophiopogonis has simple operation, has fast and accurate result, has good reproducibility, could be used as the determination methods of total flavonoids in Radix Ophiopogonis.

Radix ophiopogonis; Total flavonoids; UV spectrophotometry; Content determination

R284.2

B

2095-0616（2015）09-58-03

（2015-02-02）