PIK3CA 蛋白表達異常與宮頸病變的關系

郭欣宇，畢娜，歐陽玲

(1.沈陽醫學院附屬第二醫院婦科，遼寧 沈陽 110002;2.中國醫科大學附屬盛京醫院麻醉科)

宮頸癌是婦科最常見惡性腫瘤，在人乳頭狀瘤病毒(HPV)感染的100 多種亞型中，約有10余種與宮頸癌相關。宮頸鱗狀細胞癌大約占女性宮頸惡性腫瘤的80%～90%［1］。近年來國外研究證實PIK3CA 基因是宮頸癌的癌基因。本研究探討宮頸病變組織中PIK3CA 基因的表達情況，探討宮頸癌的發生、發展和轉移中的過程中PIK3CA mRNA 的作用，為明確宮頸癌的演變過程，為進一步確定宮頸癌的發病機制，做好三級預防提供理論基礎。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2001 至2012年在我院治療的宮頸上皮內瘤變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)90例(CINⅠ，Ⅱ，Ⅲ各30例)，年齡22～61 歲，平均年齡(49 ±5.2)歲;宮頸鱗癌60例(Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ各20例)，年齡28～84 歲，平均年齡(60 ±2.1)歲;另選擇因卵巢病變切除子宮的正常宮頸組織10例作為對照組，年齡21～65歲，平均年齡(54 ±3.3)歲。所有標本均在未經任何治療的患者離體標本中取得。宮頸癌的診斷及分期，由有診斷資質的2 名病理科醫生共同完成，參照國際婦產科聯盟(FIGO)分期。本研究經本院倫理委員會批準，患者均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 試劑 PIK3 mRNA 原位雜交檢測試劑盒(博士德生物工程有限公司);二氨基聯苯胺(DAB)顯色劑(福州邁新生物技術有限公司);3%過氧化氫溶液(自行配制)。

1.2.2 原位雜交法檢測PIK3CA mRNA 先將不同分組的離體組織用石蠟固定包埋，連續切成4 μm厚的薄片，將每張切片用二甲苯進行脫蠟處理，用純凈水清洗去除內源性過氧化物酶，37 ℃恒溫雜交過夜，加入封閉液(37 ℃30 min)，加入鏈霉親和素－生物素復合物SABC (37 ℃恒溫箱30 min)，DAB 顯色，蘇木素復染，梯度酒精脫水，用樹膠封片后顯微鏡下觀察。用已知PIK3CA mRNA 陽性的宮頸鱗癌切片作為陽性對照，室溫下以磷酸鹽緩沖液(PBS)作為陰性對照。

1.3 統計學方法 采用EPIData 3.1 建立數據庫，采用SPSS 17.0 進行統計學處理，組間比較采用t檢驗、方差分析及精確概率法。

2 結果

2.1 宮頸病變組織中PIK3CA mRNA 表達情況PIK3CA 蛋白的陽性表達產物定位于宮頸病變組織上皮細胞的胞漿中，顆粒呈棕黃色或棕褐色。宮頸鱗癌組織中的PIK3CA mRNA 表達水平與正常宮頸組織和宮頸輕、中度不典型增生組織差異有統計學意義(t=4.397，P ＜0.01);PIK3CA mRNA 在宮頸癌組與CINⅢ組比較(t=2.971，P ＜0.01)，以及CINⅡ/CINⅠ組與正常宮頸上皮組比較(t=4.097，P＜0.01)，差異均有統計學意義。見表1。

2.2 PIK3CA mRNA 表達與宮頸鱗癌臨床病理參數的關系 宮頸鱗癌Ⅰ、Ⅱ期組織PIK3CA mRNA表達水平與Ⅲ期比較差異有統計學意義(t=－5.940、－5.229，P ＜0.01);PIK3CA mRNA 表達水平在高分化和中、低分化宮頸鱗癌組織比較差異有統計學意義 (t=－ 5.422，P ＜0.01);PIK3CA mRNA 表達在有淋巴結轉移組和無淋巴結轉移組間比較差異無統計學意義(P ＞0.05)。

表1 宮頸病變組織中PIK3CA mRNA 表達情況

表2 PIK3CA mRNA 表達與宮頸鱗癌臨床病理參數的關系

3 討論

宮頸癌在女性惡性腫瘤中僅次于乳腺癌，位居第2 位，約占女性生殖道腫瘤的1%～5%［1］。近年來，CIN 的發病率在年輕女性中不斷上升是導致其高發的主要原因［1］。宮頸癌中以鱗癌為主，占80%～90%，而且宮頸癌的患者易發尿潴留、輸尿管漏、淋巴囊腫等并發癥，甚至可能造成嚴重的功能障礙，雖然經過手術、放療可能緩解患者不同程度的癥狀，但仍可以造成患者軀體及心理健康。所以，目前查找宮頸癌發生發展的主要原因，明確其發病機制，對宮頸癌的三級預防具有積極的推動作用。

3.1 PIK3CA 的發生及與腫瘤的關系 PIK3CA 基因是1994年由Vilonia等通過原位雜交技術獲得的癌基因。PIK3CA 基因在人類的消化系統、呼吸系統、生殖系統等組織中均有表達［2－5］，反映了它與人體細胞的正常生理變化及基本功能均有密切關系［6］。PIK3CA 以基因擴增或點突變等形式激活時，可以加速促進細胞生長與增殖及最大限度抑制細胞的凋亡，引起細胞調節失衡，最終導致腫瘤的發生。

3.2 PIK3CA mRNA 表達在不同發展階段宮頸病變組織中的臨床意義 本研究結果表明:宮頸鱗癌組織中的PIK3CA mRNA 表達水平與正常宮頸組織和宮頸輕、中度不典型增生組織差異均有統計學意義(P ＜0.01);PIK3CA mRNA 在宮頸癌組與CINⅢ組，以及CINⅡ/CINⅠ組與正常宮頸組織之間差異均有統計學意義(P ＜0.01)。宮頸鱗癌的PIK3CA mRNA 表達水平明顯高于后兩者，CINⅡ/CINⅠ組PIK3CA mRNA 表達水平明顯高于正常的宮頸組織。證明PIK3CA mRNA 的表達水平與宮頸鱗癌的發生發展有緊密的聯系。說明PIK3CA mRNA 表達在宮頸鱗癌臨床分期及組織學分化程度的各組間比較差異有統計學意義，而在有無淋巴結轉移組間比較差異無統計學意義。進一步表明PIK3CA mRNA 表達水平與宮頸鱗癌的嚴重程度密切相關。以上表明PIK3CA mRNA 可能參與了宮頸癌的發生、發展及演變加重的全過程。

目前本研究已從PIK3CA mRNA 表達水平發現其在宮頸鱗癌的發生發展過程中起到至關主要的作用。未來將在分子生物水平檢測PIK3CA 蛋白來判斷宮頸病變的發生發展及宮頸鱗癌的早期診斷、早期預防、預后評估，治療方案的調整等。近年來由于廣泛的HPV 篩查，證明HPV16、18、33等高危型HPV 可以通過激活PI3K/Akt 通路促進宮頸癌的發生［7］。染色體拷貝數目增加的頻率與宮頸癌關系密切，發現 PIK3CA 定位于染色體3q26.3［8］。Bertelsen等［9］使用RT-PCR 同樣證明了在40例宮頸腫瘤組織中有28例PIK3CA 拷貝數成3 倍多擴增。這表明PIK3CA 蛋白通過染色體拷貝數目增加及基因擴增在HPV 的影響下進一步發展成為宮頸癌。下一步將繼續研究如何利用基因擴增來抑制宮頸癌的發生發展及轉歸。

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