醫用注射器具中DEHP增塑劑溶出量測定

【作者】鄭建，王敏珠，王安燕，徐萍華，韓銀，文燕，張莉

國家食品藥品監督管理局杭州醫療器械質量監督檢驗中心，杭州市，310009

醫用注射器具中DEHP增塑劑溶出量測定

【作者】鄭建，王敏珠，王安燕，徐萍華，韓銀，文燕，張莉

國家食品藥品監督管理局杭州醫療器械質量監督檢驗中心，杭州市，310009

建立氣相色譜-串聯質譜(GC-MS/MS)測定醫用注射器具醫療器械產品中DEHP溶出量分析方法，探討樣品前處理對測定的影響和評價。通過分析確認，模擬臨床使用條件，在37oC條件下平衡浸提，浸提液經氯仿萃取，萃取液進行氣相色譜-串聯質譜分析。該方法簡便快速，方法檢出限低，定性定量準確。定量下限(S/N =5)為 0.075 μg/mL，平均加標回收率為92%～ 98%，相對標準偏差為1.01%～1.61%。 此方法樣品前處理簡單、干擾少、重現性好、分離效率高, 可做為醫用注射器具醫療器械產品中DEHP溶出量的質量控制的方法之一。

注射器；氣相色譜-質譜法；DEHP；塑化劑

一次性無菌注射器是我國20世紀80年代引進的一種新型醫療器械。它能避免交叉感染，使用方便,是臨床上廣泛使用的一種注射穿刺器械，目前，國內年產量約160億只，年產值約50億元[1]。其結構主要由芯桿、活塞、外套與注射針構成，主要原材料有注射針—奧氏體不銹鋼（GB 18457—2001）、注射器（注射器外套—聚丙烯、芯桿—聚丙烯或聚乙烯、活塞—天然橡膠、潤滑劑—聚二甲基硅氧烷）[2-4]。由高分子材料組成的注射器往往可能加入鄰苯類物質增強注射器的可塑像和柔軟度，特別是注射器所用橡膠活塞采用的天然橡膠[5]部位尤為明顯。因而采用一次性注射器吸取、溶配及注射含脂溶性溶劑的注射液時，則可能溶出鄰苯類物質，而鄰苯類物質應用最多的是DEHP。動物實驗研究表明，DEHP具有廣泛的不良反應，明顯表現為肝臟毒性和睪丸萎縮[7]。“臺灣塑化劑事件”中DEHP是通過胃腸道吸收后對人體產生不良影響，注射器中溶出的DEHP，則能直接進入人體血液、器官和組織，相對于胃腸道吸收可能對患者帶來更嚴重的危害[8]，因此有必要控制注射器中的DEHP含量，從而更有效地加強對注射器的技術監控工作，保證消費者使用其安全性。

1　實驗部分

1.1儀器和試劑

安捷倫7890A/5975C 氣相質譜聯用儀；鄰苯二甲酸二（2-乙基已基）酯（DEHP）標準品（FLUKA公司），三氯甲烷（色譜純），乙醇（色譜純，TEDIA“天地”試劑公司），無水硫酸鈉（色譜純，西格瑪公司）， Milli-Q超純水系統；樣品：一次性使用無菌注射器（帶針）。

1.2浸提液制備

參考行業標準YY/T 0927—2014:聚氯乙烯醫療器械中鄰苯二甲酸二(2一乙基己基)酯(DEHP)溶出量測定指南及醫療器械在臨床中的使用情況，本文選用乙醇水溶液（密度為0.937 8 g/mL）、氯化鈉注射作為浸提液，樣品加浸提液至公稱容量，在37±1°C下恒溫（1 h），將樣品與液體分離，冷卻至室溫作為樣品浸提液。

1.3樣品浸提液的預處理

取“1.2”制備的浸提液于玻璃離心管中，加入氯仿震蕩5 min，離心分離，取氯仿層作為檢驗液待測。

1.4儀器條件[8]

氣相-質譜聯用儀： 安捷倫7890A-5975C。

色譜柱：HP-5MS石英毛細管柱30 m×0.25 mm×0.25 μm。

柱溫：150°C保持0.5 min，然后以10°C/min的速度升溫至280°C，保持7 min。

進樣口溫度：280°C。

EI離子源溫度：230°C， 四級桿溫度：150°C。進樣體積：1 μL。載氣：氦氣，純度≥99.99%， 流速：1.5 mL/min。測定方式：全掃描總離子圖（TIC）定性，選擇離子檢測（SIM）定量。

1.5標準溶液制備

準確稱取標準物的DEHP約1.0 g，用氯仿配成100 mg/mL的儲備液，再用氯仿配置0.5～10 μg/mL 5個系列DEHP標準溶液待測。

2　結果與討論

2.1樣品浸提液預處理方法的選擇

水或鹽溶液容易對柱子及離子源造成污染，縮短使用壽命，不能將“1.2”制備出的浸提液直接進儀器分析，因此需要對浸提液進行預處理將水和鹽成分去除。若參考行業標準YY/T 0927—2014，即采用將浸提液在50°C真空干燥箱中干燥，待浸提液完全消失再用等體積正己烷溶解的方法[9]，試驗發現浸提液中水分子很難被蒸發，特別是鹽溶液中的水分子更不容易去除，同時一般注射器醫療器械產品中DEHP含量很微量，用等體積的正己烷溶解后，供試液中待測物一般在儀器檢出限以下。因此本文根據DEHP微溶于水而易溶于氯仿的性質，采用浸提液中加入氯仿震蕩5 min，離心分離，取氯仿層作為檢驗液的方法。該方法快速，簡單，又降低方法檢出限。

2.2定性分析

通過測定DEHP標準溶液，可以確定在“1.4”儀器條件下DEHP色譜峰的保留時間在7.62 min，DEHP總離子圖及特征離子圖見圖1、圖2。樣品液檢出的色譜峰不受其他峰干擾與標準溶液色譜峰的保留時間一致，并且樣品扣除背景的質譜圖中DEHP的全部特征離子均出現。

圖1　DEHP總離子圖Fig.1 Full scan pr°duct i°n spectrum

2.3定量分析

采用外標法，選擇DEHP的定量選擇離子為m/z=70、149、167，在氣相-質譜聯用儀的SIM掃描模式下，分別對“1.5”工作標準溶液和“1.3”的樣品檢驗液進行分析。由DEHP的濃度對響應值建立工作標準曲線及回歸方程，根據工作標準曲線計算樣品檢驗液中DEHP的含量，最終計算出每副樣品中DEHP的溶出含量。

2.4方法學驗證

2.4.1校準曲線、線性范圍及檢出限

在分析確認的色譜條件下測定DEHP標準系列的響應值，在0.5～10 μg/mL的線性范圍內曲線方程y=5.561E+004x（回歸方程強制過零），r2=0.999 4。以3倍信噪比S/N對應作檢出限0.015 μg/mL，將5倍的檢出限作為方法定量下限0.075 μg/mL。

2.4.2精密度及準確度

配制0.5 μg/mL的DEHP標準溶液試樣進行6次測定。得精密度（RSD）為1.71%，回收率97.3%。結果表明精密度準確度良好。

2.4.3加標回收率試驗

準備6份一次性使用注射器（帶針）樣品，分別采用乙醇水及生理鹽水浸提制備檢驗液，檢驗液經處理后分別精密加入標準溶液0.5、1.0、2.0 mL，每種濃度制備3份。按上述方法測定DEHP含量。結果顯示：乙醇水為浸提液，回收率在92%～98%（表1）、生理鹽水為浸提液，回收率在90%～98%（表2），表明回收率情況良好。

表2　生理鹽水為浸提介質的回收率試驗結果(n=3)Tab.2 The rec°very rate °f water as extracti°n medium test results

2.5樣品測定

采用本方法對10批市售一次性使用注射器（帶針）樣品進行測試，實驗中發現，注射器活塞的頂端（活塞—天然橡膠）有一層薄薄的油狀物質，對此進行氯仿萃取分析，發現注射器活塞中有相當高的DEHP溶出量，采用生理鹽水作為浸提液，則發現注射器活塞中DEHP溶出含量在0.82～1.67 μg/副，乙醇作為浸提介質溶出量在1.86～6.55 μg/副；注射器（帶針）整個產品以生理鹽水作為浸提介質DEHP溶出量在1.02～2.03 μg/副，乙醇作為浸提介質DEHP溶出量在1.99～7.24 μg/副。

2.6結論

根據DEHP微溶于水而易溶于三氯甲烷的性質，采用在浸提液中加入氯仿震蕩5 min，離心分離，取氯仿層作為檢驗液的方法。該方法快速，簡單，定性定量準確，定量下限低，特別適合注射器（DEHP含量較低）產品的分析。可做為一次性使用注射器樣品中DEHP溶出量控制的方法之一。

通過實驗發現，目前部分國內非聚氯乙烯材料的醫療器械產品注射器被檢測出有DEHP溶出量，則可能是注射器組成部件活塞材料中添加DEHP導致。希望本次試驗的發現能夠引起相關企業及監管部門的重視。

[1] 李靜莉, 楊婉娟, 郝擎, 等. 一次性使用無菌注射器上市后質量現狀分析與思考[J]. 中國醫療器械雜志, 2012, 36(6): 441-443.

[2] 國家食品藥品監督管理局. YY/T 0242—2007 醫用輸液, 輸血,注射器具用聚丙烯專用料[S].

[3] 國家食品藥品監督管理局. YY/T 0114—2008 醫用輸液, 輸血,注射器具用聚乙烯專用料[S].

[4] 國家食品藥品監督管理局. YY/T 0243—2003 一次性使用無菌注射器用活塞[S].

[5] 商務部對外貿易司. 一次性使用注射器出口質量控制指南[Z].中國醫藥保健品進出口商會, 2010.

[6] 于樂云, 王朦夏, 秦櫟媛, 等. 鄰苯二甲酸二異辛酯對雄性小鼠主要臟器及生殖功能的影響[J]. 新鄉醫學院學報, 2008, 25(5): 505.

[7] 陳琳, 錢青, 張吉吉, 等. 醫療途徑中增塑劑DEHP的溶出及其安全性研究概況[J]. 中國藥房, 2011, 22(33): 3073-3075.

[8] 國家食品藥品監督管理局. YY/T 0927—2014 聚氯乙烯醫療器械中鄰苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)溶出量測定指南[S].

Determination of Plasticizer DEHP Released from Medical Injection Equipment

【 Writers 】ZHENG Jian, WANG Minzhu, WANG Anyan, XU Pinghua, HAN Yin, WEN Yan, ZHANG Li Medical Device Supervising and Testing Center of Hangzhou, State Food and Drug Administration, Hangzhou, 310009

【 Abstract 】To established an effective GC-MS /MS method for the contents determination of the residual DEHP in injection equipment, and investigate the effect of the pretreatment on the measurement. To simulate the clinical conditions of use, under the condition of 37oC balance extraction, extract liquor by chloroform extraction, then the extract followed by analysis of GC-MS /MS. The method was simple, rapid, sensitive and accurate. The limits of quantitation( LOQ, S/N = 5) of cyclohexanone was 0.075 μg/mL, The spiked average recoveries ranged from 92% to 98%.The relative standard deviations( RSDs) of the method ranged from 1.01% to 1.61%, The method was simple, fast,sensitive and accurate,and may serve as a mass control method for residual DEHP in injection equipment.

injection equipment, gas chromatography tandem mass spectrometry, DEHP, plasticizer

X132

A

10.3969/j.issn.1671-7104.2015.06.017

1671-7104(2015)06-0451-03

2015-06-11

浙江省科技廳計劃項目(2015F30009)

鄭建，工程師，E-mail: fancyzl1@163.c°m