非小細胞肺癌中nueropilin-1的表達及臨床意義

白 珀，董 茜（第二炮兵總醫院呼吸內科，中國人民解放軍6646部隊，北京 00088）

非小細胞肺癌中nueropilin-1的表達及臨床意義

白 珀1，董 茜2（1第二炮兵總醫院呼吸內科，2中國人民解放軍61646部隊，北京 100088）

目的：探討 neropilin-1（NRP-1）在非小細胞肺癌（NSCLC）中的表達及臨床意義．方法：應用免疫組化 SP法檢測68例NSCLC及癌旁組織中 NRP1的表達，分析其表達與NSCLC臨床病理參數之間的關系．結果：NSCLC組織中 NRP-1陽性表達率明顯高于癌旁組織（P<0．05）．NRP-1在NSCLC組織中的表達與腫瘤直徑、P-TNM分期及里淋巴結轉移密切相關（P<0．05）．結論：NRP-1過度表達在NSCLC發生、發展過程中起重要作用，可能與 NSCLC發生侵襲和轉移密切相關．

neropilin-1；非小細胞肺癌；免疫組織化學

0 引言

非小細 胞 肺癌 （non-small cell lung cancer，NSCLC）是肺癌常見的類型，預后較差，術后腫瘤轉移和侵襲是 NSCLC患者治療失敗和死亡的主要原因．neuropilin-1（NRP-1）是神經纖毛蛋白中的一類，神經軸突的生長、血管的生長發育在腫瘤轉移中起重要作用．研究發現，NRP-1在胃癌、乳腺癌等多種腫瘤組織及癌細胞株中表達異常增高，與腫瘤的發生發展密切相關［1－3］，但 NRP-1在NSCLC中的表達研究少見．本研究中采用免疫組化技術觀察了組織中的表達情況，并分析其與臨床病理特征的關系．

1 材料和方法

1．1 材料 NSCLC組織及癌旁組織標本來源于2012-01／2014-12我院行手術切除并經病理證實的NSCLC患者．癌旁組織取距腫塊邊緣 5 cm以上的組織．所有患者術前均未接受放療、化療或其他治療．其中男 52例，女 16例；年齡 42．8±6．5歲（29～65歲），中位年齡52歲；低分化26例，中分化24例，高分化18例；臨床分期按1997年修訂的P-TNM分期標準:Ⅰ～Ⅱ期32例，Ⅲ～Ⅳ期36例；腺癌41例，鱗癌20例，大細胞癌7例；淋巴結轉移35例，無淋巴轉移33例．SP免疫組織化學試劑盒購于福州邁新有限公司．二氨基聯苯胺（DAB）顯色劑購自北京中杉生物技術有限公司．兔抗人NRP-1蛋白多克隆抗體購自美國 Santa Cruz公司產品．

1．2 方法 所有標本均經過甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚連續切片．切片脫蠟至水后用0．01 mol／L檸檬酸緩沖液抗原修復；30 mL／L H2O2室溫下孵育 10 min，PBS沖洗5 min×3次；滴加NRP-1（1∶150），4℃過夜，PBS沖洗5 min×3次，滴加生物素化二抗工作液，室溫孵育 20 min，PBS沖洗 5 min×3次；滴加辣根酶標記鏈霉卵白素工作液，室溫孵育30 min，PBS沖洗5 min×3次；DAB顯色，顯微鏡下觀察，適時終止反應，自來水充分沖洗；蘇木素復染，脫水透明，中性樹脂封片．用已知的 NRP-1陽性片做陽性對照，用PBS代替一抗做陰性對照．NRP-1表達一腫瘤細胞的胞質出現棕黃色顆粒為陽性．每張切片在高倍鏡下隨機選取10個視野，按陽性細胞占同類細胞總數的百分比來計算．≤5為陰性（－），6%～25%為弱陽性（＋），25%～75%為表達陽性（＋＋），陽性細胞數> 75%為表達強陽性（＋＋＋）．將陰性和弱陽性合計為陰性總數，陽性和強陽性合計為陽性總數．

1．3 統計學處理 采用 SPSS13．0統計軟件包，計數資料運用 χ2檢驗．以 P<0．05為差異具有統計學意義．

2 結果

2．1 NRP-1在 NSCLC和癌旁組織的表達 68例NSCLC組織中有47例NRP-1呈陽性表達（69．1%），而對應癌旁組織中NRP-1均呈陰性表達．NSCLC組織中NRP-1陽性表達率明顯高于癌旁組織（P＜0．05，表1）．

2．2 NRP-1在 NSCLC臨床病理學參數的相關性

NRP-1在 NSCLC組織中的表達與腫瘤直徑、P-TNM分期及淋巴結轉移密切相關（P＜0．05），而與其他臨床病理學參數無關．

表1 NRP-1的表達與 NSCLC臨床病理學參數的相關性

3 討論

肺癌一直是發病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一，嚴重地威脅著人類健康與生命．隨著腫瘤分子生物學的發展和化療及分子靶向藥物的開發應用，人們對非小細胞肺癌（NSCLC）的發病機制有了進一步的認識，其治療效果較前有所改善，但患者總體預后仍然較差．目前認為肺癌發生發展是一個多個基因或多個分子水平各自發揮或相互協調作用的復雜過程，因此尋找、研究和揭示腫瘤的有價值分子標志物或標志物與腫瘤的關系將有助于揭示NSCLC發生與發展的分子機制，為腫瘤診斷、有效防治、預測預后及術后輔助治療提供科學依據［4－5］．NRP-1是近年來發現的VEGF的新型受體，NRP-1在胃癌、乳腺癌、前列腺癌等多種腫瘤中均呈高表達，與腫瘤細胞生長和腫瘤血管生成密切相關，可能作為許多腫瘤進展的標志物之一［6－7］．本研究結果顯示，68例NSCLC組織中NRP-1均呈高表達，而對應癌旁組織中 NRP-1呈陰性表達，NSCLC組織中 NRP-1陽性表達率明顯高于癌旁組織（P<0．05）．提示NRP-1可能參與了 NSCLC的惡變、發生過程，在其中可能扮演重要角色．同時本研究結果發現，NRP-1在 NSCLC組織中的表達與腫瘤直徑、P-TNM分期及淋巴結轉移密切相關（P<0．05），而與組織分化、組織學類型等臨床病理學參數無關，說明NRP-1過度表達在 NSCLC發生、發展過程中起重要作用，可能與NSCLC發生侵襲和轉移密切相關，但在不同病理類型和不同分化程度 NSCLC的發生發展中可能具有普遍意義．但目前對 NRP-1在 NSCLC發生、侵潤和轉移過程中所發揮的具體作用機制尚不清楚．

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Expression of nueropilin-1 in non-small cell lung cancer and its clincal significance

BAIPo1，DONGQian21Second Artillery General Hospital PLA，2No．61646 PLA，Beijing 100088，China

AIM:To investigate the expression of nueropilin-1 in non-small cell lung cancer（NSCLC）and its clincal significance．METHODS:The expression of nueropilin-1 protein was detected with immunohistochemical technique in 68 cases of NSCLC and normal lung tissues．RESULTS:The positive expression rates of nueropilin-1 protein in NSCLC was significantly higher than that in normal lung tissues（P<0．05）．The expression of nueropilin-1 protein in NSCLC were positively related to tumor diamete，P-TNM stage and lymphnode metastasis（P＜0．05）．CONCLUSION:Nueropilin-1 may play an improtant role in the oncogenesis and progression of NSCLC，and itmay be relevant to invasion and metastasis of NSCLC．

nueropilin-1；non-small cell lung；immunohistochemical technique

R365

A

2095-6894（2015）03-032-02

2015-01-10；接受日期：2015-01-28

白 珀．碩士．研究方向:呼吸內科．E-mail:danger_0_0_0@ sina．com