不同途徑接種鴨源鏈球菌對(duì)雛鴨致病性的影響研究

夏新萌(山東省聊城市動(dòng)物疫病與控制中心，山東聊城252000)

不同途徑接種鴨源鏈球菌對(duì)雛鴨致病性的影響研究

夏新萌
(山東省聊城市動(dòng)物疫病與控制中心，山東聊城252000)

試驗(yàn)選用9日齡櫻桃谷雛鴨30羽，經(jīng)腹腔、皮下、腳蹼、顱內(nèi)途徑接種鴨源鏈球菌，同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照組，觀察不同接種途徑對(duì)雛鴨致病性的影響。結(jié)果表明，經(jīng)不同途徑接種鴨源鏈球菌后，各組發(fā)病率為100%，死亡率:頸部皮下接種66.7%，腹腔33.3%，腳蹼50.0%，顱內(nèi)33.3%。HE染色病理切片鏡檢結(jié)果:肝臟和脾臟細(xì)胞壞死，單核巨噬細(xì)胞浸潤，異嗜性粒細(xì)胞浸潤;法氏囊皮質(zhì)區(qū)與髓質(zhì)區(qū)淋巴細(xì)胞減少，髓質(zhì)區(qū)淋巴細(xì)胞壞死，胸腺皮質(zhì)區(qū)呈星空狀，巨噬細(xì)胞浸潤，腦膜炎，腦水腫。試驗(yàn)表明:該株鏈球菌對(duì)雛鴨致病性較強(qiáng)，臨床癥狀和病理變化特征明顯。

鏈球菌;接種途徑;病理變化;雛鴨

鏈球菌普遍存在于自然界和飼養(yǎng)環(huán)境中，是大部分禽類腸道正常菌群的組成部分。因此，一般認(rèn)為禽鏈球菌為非致病菌，其感染多為繼發(fā)性感染。近年來，隨著集約化養(yǎng)禽業(yè)的快速發(fā)展，該病在我國部分地區(qū)發(fā)病率逐年提高，對(duì)養(yǎng)禽業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。目前國內(nèi)外對(duì)鴨源鏈球菌的研究?jī)H限于生產(chǎn)實(shí)踐中的一般病例報(bào)道和細(xì)菌分離培養(yǎng)與鑒定，對(duì)致病機(jī)制和病理變化研究相對(duì)較少。

本試驗(yàn)選用9日齡櫻桃谷雛鴨，通過不同途徑接種鴨源鏈球菌，觀察雛鴨感染鏈球菌后的臨床癥狀與病理變化，研究不同途徑接種鴨源鏈球菌對(duì)雛鴨的致病性影響，以期為禽類鏈球菌病的臨床診斷和防控提供科學(xué)的理論依據(jù)，為禽類養(yǎng)殖業(yè)中鏈球菌病的預(yù)防、診斷、治療作出合理的綜合分析。現(xiàn)將試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告如下，供參考。

1 材料與方法

1.1 毒株 鴨源鏈球菌，華中農(nóng)業(yè)大學(xué)病理實(shí)驗(yàn)室分離鑒定并保存。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 1日齡櫻桃谷雛鴨30羽(購自武漢市某種鴨場(chǎng))，自由采食飲水正常飼養(yǎng)9 d后，經(jīng)血檢無細(xì)菌感染，隨機(jī)分為5組，每組6羽，接種途徑分別為腹腔、皮下、腳蹼、顱內(nèi)和對(duì)照組。

1.3 菌液制備 供試菌株接種于TSA培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24 h，挑取單個(gè)菌落接種于TSB液體培養(yǎng)基，純培養(yǎng)過夜后，無菌挑取純化菌液接種于TSA培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24 h，觀察細(xì)菌生長情況及菌落形態(tài)，挑取單個(gè)菌落作革蘭氏染色，顯微鏡下觀察細(xì)菌形態(tài)和染色特征。鑒定后挑取TSA培養(yǎng)基上經(jīng)純化的單個(gè)菌落，接種于15 mL TSB液體培養(yǎng)基，搖勻純培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)18 h，利用活菌計(jì)數(shù)法計(jì)算制備菌液中活菌數(shù)為1.5×10 CFU/mL。

1.4 動(dòng)物試驗(yàn)

1.4.1 人工接種 試驗(yàn)組分別采用腹腔接種、皮下接種、腳蹼接種、顱內(nèi)接種方式，接種劑量為0.2 mL/羽，對(duì)照組不作試驗(yàn)處理。

1.4.2 臨床觀察 每天觀察各組臨床癥狀，記錄發(fā)病和死亡時(shí)間及數(shù)量;定期采集血液標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢查。死鴨及時(shí)進(jìn)行尸體剖檢，觀察記錄各組織及臟器病變，采集肝、脾、腦、心臟及心包膜、肺、腎、腔上囊、胸腺、十二指腸等組織器官，中性福爾馬林固定。未死鴨和對(duì)照組繼續(xù)正常飼養(yǎng)，14 d后全部宰殺、剖檢，觀察記錄各組織及臟器病變，取肝、脾、腦、心臟及心包膜、肺、腎、腔上囊、胸腺、十二指腸等組織器官，中性福爾馬林固定，分組編號(hào)，備用。

1.4.3 病菌分離鑒定 解剖病死鴨，采集肝臟涂片，革蘭氏染色。接種于TSA血清平板，37℃培養(yǎng)24 h，觀察細(xì)菌生長情況及菌落形態(tài)，挑取單個(gè)菌落革蘭氏染色，顯微鏡下觀察細(xì)菌形態(tài)和染色特征。

1.4.4 病理組織學(xué)觀察 采集組織器官中性福爾馬林固定2周后，按常規(guī)方法制作石蠟切片，HE染色，顯微鏡觀察病理組織學(xué)變化。

2 結(jié)果與分析

2.1 細(xì)菌學(xué)檢查 經(jīng)細(xì)菌分離，分離菌在TSA血清板上長成表面濕潤、邊緣整齊、灰白色半透明小菌落，直徑約1 mm。革蘭氏染色陽性，單個(gè)、成對(duì)或成短鏈狀排列，與接種菌一致。

2.2 發(fā)病率與死亡率 詳見表1。

表1 不同途徑感染鴨源鏈球菌后雛鴨的發(fā)病率與死亡率

經(jīng)臨床觀察，頸部皮下接種試驗(yàn)組。雛鴨接種后2 d出現(xiàn)臨床癥狀，精神不振，眼瞼腫脹，頭部羽毛蓬松，食欲減退，排黃色稀糞，病程持續(xù)7 d后精神有所好轉(zhuǎn)，但雛鴨眼部分泌物逐漸增多，頸部皮毛較稀，生長緩慢，發(fā)病率100%(6/6)，于接種后第3 d死亡1羽，先后死亡4羽，死亡率66.7%。腹腔接種試驗(yàn)組。雛鴨接種后2 d出現(xiàn)精神不振，食欲減退，頭部羽毛蓬松，眼瞼腫脹，排黃色稀糞，發(fā)病率100%(6/6)，先后死亡2羽，死亡率33.3%。第13 d開始預(yù)后病鴨精神狀態(tài)有所好轉(zhuǎn)，第15 d開始精神狀態(tài)和食欲恢復(fù)正常，但生長緩慢。腳蹼接種試驗(yàn)組。雛鴨接種后第3 d出現(xiàn)精神不振，食欲減退，病程持續(xù)8 d后雛鴨精神有所好轉(zhuǎn)，但腳蹼上長出數(shù)個(gè)米粒大小的腫塊，發(fā)病率100%(6/6)，死亡3羽，死亡率50.0%。顱內(nèi)接種試驗(yàn)組。接種當(dāng)天即死亡1羽，其余供試鴨接種3 d后出現(xiàn)精神不振，眼瞼腫脹，排黃綠色稀糞，發(fā)病率100%(6/6)，死亡2羽，死亡率33.3%。空白對(duì)照組。6羽雛鴨精神狀態(tài)和食欲正常，羽毛光潔，生長速度較快。

2.3 病理學(xué)觀察

圖1 脾臟腫大

圖2 肝臟纖維素性物質(zhì)滲出

圖3 心包膜增厚、纖維素性物質(zhì)滲出

圖4 法氏囊萎縮

表2 不同途徑感染鴨源鏈球菌后病死鴨的剖檢病理變化

2.3.1 剖檢病理變化 詳見表2及圖1～圖4。由表2及圖1～圖4可見，剖檢病理變化主要表現(xiàn)為:脾腫大(圖1)，肝被膜纖維素性物質(zhì)滲出(圖2)，心包膜增厚和纖維素性物質(zhì)滲出(圖3)，肺淤血、水腫，腎腫大、淤血，法氏囊萎縮(圖4)、質(zhì)地變軟，胸腺出血，腦膜充血和水腫。

2.3.2 組織學(xué)病理變化 詳見表3及圖5～圖22。

表3 不同途徑感染鴨源鏈球菌后病死鴨的組織學(xué)病理變化

圖5 脾臟局灶性壞死

圖6 脾臟異嗜性粒細(xì)胞浸潤，單核細(xì)胞增多

圖7 肝被膜增厚、纖維素性滲出

圖8 肝血管淤血、炎性細(xì)胞浸潤

圖9 肝細(xì)胞脂肪變性、細(xì)菌團(tuán)塊

圖10 心包膜增厚、纖維素性滲出

圖11 心外膜增厚

圖12 心肌纖維間炎性細(xì)胞浸潤

圖13 腦膜增厚、壞死灶、淤血

圖14 腦血管壁周圍異嗜性粒細(xì)胞浸潤

圖17 腦膜血管壁細(xì)胞淀粉樣變

圖18 法氏囊皮質(zhì)和髓質(zhì)淋巴細(xì)胞減少

圖19 胸腺淋巴細(xì)胞減少

圖20 胸腺巨噬細(xì)胞浸潤

圖21 腎臟細(xì)菌團(tuán)塊

圖22 腎小管上皮細(xì)胞壞死

由表3及圖5～圖22可見，組織學(xué)病理變化主要表現(xiàn)為脾淤血、細(xì)胞壞死，可見局灶性壞死，壞死灶均質(zhì)紅染(圖5)，單核細(xì)胞、異嗜性粒細(xì)胞浸潤(圖6)。肝臟被膜增厚，有紅色絲網(wǎng)狀纖維素性滲出(圖7)，血管擴(kuò)張、淤血、血管周圍有炎性細(xì)胞浸潤(圖8)，肝細(xì)胞脂肪變性，肝竇內(nèi)皮細(xì)胞可見藍(lán)色粉末狀細(xì)菌團(tuán)塊(圖9);心包膜增厚，包膜上血管和淋巴管擴(kuò)張、少量炎性細(xì)胞浸潤，心包膜下有漿液性纖維滲出物(圖10)，心外膜增厚、炎性細(xì)胞浸潤(圖11)心肌纖維增寬、心肌纖維間有少量炎性細(xì)胞(圖12);大腦，腦膜增厚(圖 13)，有多量局限性壞死灶、壞死灶周圍有大量異嗜性粒細(xì)胞浸潤及纖維素性滲出(圖14、圖16)，腦膜處及腦血管周圍可見大量細(xì)菌團(tuán)塊(圖15)，腦膜血管壁細(xì)胞呈淀粉樣變( 圖17)，腦組織水腫、淤血(圖13);法氏囊皮質(zhì)區(qū)和髓質(zhì)區(qū)可見淋巴細(xì)胞減少，髓質(zhì)區(qū)淋巴細(xì)胞壞死(圖18)，偶見細(xì)菌團(tuán)塊;胸腺皮質(zhì)區(qū)淋巴細(xì)胞減少，呈星空狀(圖19)，巨噬細(xì)胞浸潤(圖20);肺泡壁淤血，肺泡腔狹窄;腎小球細(xì)菌栓塞(圖21)，腎小管上皮細(xì)胞壞死(圖22)。

3 小結(jié)與討論

試驗(yàn)證實(shí)，經(jīng)頸部皮下接種鴨源鏈球菌感染雛鴨的病變最嚴(yán)重，死亡率最高，病變特征最明顯，主要表現(xiàn)為脾腫大，心內(nèi)膜炎，肝、脾、腎有局灶性壞死，腦膜炎等典型癥狀。腹腔和腳蹼接種途徑病變較為明顯，顱內(nèi)接種途徑致病性最弱。

頸部皮下接種表現(xiàn)出的高致病性，可能與接種途徑較接近于雛鴨胸腺有關(guān)。胸腺在機(jī)體中作為免疫中樞器官，在雛鴨早期個(gè)體免疫系統(tǒng)發(fā)育中起著重要作用，鏈球菌最先在胸腺附近大量增殖，可明顯降低機(jī)體的免疫功能，加劇病變進(jìn)程，故死亡率最高。腹腔接種組的雛鴨致病性較高于其他各組，可能與直接接種腹腔內(nèi)，突破了皮膚和粘膜屏障，使病菌直接在腹腔臟器大量增殖，對(duì)脾、肝、腎組織致病性較強(qiáng)有關(guān)。腳蹼感染組的致病性較高，反應(yīng)出在實(shí)際生產(chǎn)中，由于腳蹼外傷，可能造成鏈球菌感染，應(yīng)當(dāng)引起特別注意。顱內(nèi)組作為接毒途徑致病力較弱，操作較困難，不宜作為人工復(fù)制鏈球菌感染雛鴨試驗(yàn)的最佳途徑。

臨床治療過程中鴨源鏈球菌對(duì)青霉素或頭孢等抗生素普遍敏感，但對(duì)紅霉素、克林霉素、四環(huán)素等耐藥。預(yù)防禽鏈球菌病，進(jìn)行疫苗免疫一般采用頸部皮下接種或腹腔接種途徑效果較好。

S858.32

A

1005-7307(2015)05-0006-006

2015-03-25