鴕鳥源鼠隱孢子蟲蟲種鑒定及動(dòng)物感染試驗(yàn)研究

齊 萌，劉利敏，黃 磊，徐利納，張素梅，張龍現(xiàn)

隱孢子蟲病（Cryptosporidiosis）是由隱孢子蟲（Cryptosporidium）引起的一種重要的機(jī)會(huì)性人獸共患原蟲病，為全球性重要的食源性／水源性疾病之一[1]。隱孢子蟲已公認(rèn)的有效種有27個(gè)，多數(shù)種類具有宿主特異性，其中鼠隱孢子蟲（Cryptosporidiummuris）為人獸共患蟲種，主要寄生于嚙齒類動(dòng)物胃腺粘膜上皮細(xì)胞，包括人在內(nèi)的其他多種哺乳動(dòng)物也有感染報(bào)道[1－4]。禽類中，曾有報(bào)道在茶色蟆口鴟和夜鷹糞便中檢測到C.muris，但是否為糞便被C.muris卵囊污染尚不確定[5]。也有調(diào)查在蛇類糞便中檢測到C.muris和泰澤隱孢子蟲（Cryptosporidiumtyzzeri），調(diào)查者認(rèn)為該兩種隱孢子蟲并非寄生于蛇消化道上皮細(xì)胞，而是蛇攝食隱孢子蟲陽性的嚙齒類動(dòng)物，卵囊通過糞便排出體外[6－7]。

非洲鴕鳥屬鳥綱鴕形目鴕鳥科，是現(xiàn)存體型最大的平胸鳥類，其主要感染貝氏隱孢子蟲（Cryptosporidiumbaileyi）、火雞隱孢子蟲（Cryptosporidiummeleagridis）、隱孢子蟲禽基因型II（avian genotype II）和一個(gè)隱孢子蟲未定種[8－9]。目前已有的研究發(fā)現(xiàn)C.muris僅感染哺乳動(dòng)物，本研究從非洲鴕鳥糞便中分離到一種隱孢子蟲卵囊，經(jīng)形態(tài)學(xué)觀察和分子生物學(xué)鑒定為C.muris。為了解鴕鳥源C.muris傳播能力及生物學(xué)特征，本試驗(yàn)用鴕鳥源C.muris接種羅曼雛雞、Balb／c鼠和蒙古沙鼠，觀察動(dòng)物感染后臨床癥狀和排卵囊規(guī)律，通過組織學(xué)觀察其宿主適應(yīng)性和寄生部位等方面，以期為隱孢子蟲的分類地位及生物學(xué)特性研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 卵囊來源C.muris卵囊分離自鄭州某鴕鳥養(yǎng)殖場10歲以上長期排卵囊的鴕鳥。

1.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與分組 購自鄭州牧業(yè)工程高等專科學(xué)校孵化場1日齡羅曼雛雞20只，10只為感染組，10只為不感染對照組；購自河南省試驗(yàn)動(dòng)物中心20日齡Balb／c鼠15只，10只為感染組，5只為不感染對照組；購自首都醫(yī)科大學(xué)15只20日齡蒙古沙鼠，10只為感染組，5只為不感染對照組。各試驗(yàn)動(dòng)物均于感染前連續(xù)糞檢3d，無腸道寄生蟲感染者用于本試驗(yàn)。感染組動(dòng)物每只接種卵囊劑量為1.0×106個(gè)／mL，不感染對照組每只經(jīng)口灌胃等體積蒸餾水。動(dòng)物接種卵囊后每天收集糞便檢查卵囊。

1.1.3 動(dòng)物組織樣品 感染成功的動(dòng)物于排卵囊高峰期分別剖殺，取其胃、十二指腸和空腸組織樣品，光鏡樣品置10%中性福爾馬林固定液中，常溫保存?zhèn)溆茫婄R樣品保存于pH＝7.2的2.5%戊二醛溶液中固定，置4。C冰箱保存。

1.2 方法

1.2.1 卵囊檢查 采用飽和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法檢查卵囊，用微分干涉差顯微鏡進(jìn)行拍照。

1.2.2 卵囊收集與計(jì)數(shù) 采用不連續(xù)蔗糖密度梯度離心法收集卵囊。用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行卵囊計(jì)數(shù)，計(jì)算每克糞便中的隱孢子蟲卵囊數(shù)（OPG）。

1.2.3 DNA提取 采用日本TOYOBO公司生產(chǎn)的Mag Extractor－Genome提取試劑盒 （購自北京夏斯生物技術(shù)有限公司），按照其說明書提取流程進(jìn)行操作。

1.2.4 PCR擴(kuò)增 18SrRNA基因引物設(shè)計(jì)和反應(yīng)程序參照Xiao等[10]的報(bào)道，引物由上海生工生物工程有限公司合成。

1.2.5 測序 由北京諾賽基因有限公司完成。

1.2.6 組織樣品觀察 光鏡樣品按常規(guī)石蠟組織切片樣品處理方法脫水、HE染色、顯微鏡觀察照相；電鏡樣品按常規(guī)掃描電鏡樣品處理方法脫水、置換乙醇、干燥和噴金，觀察照相。

2 結(jié) 果

2.1C.muris形態(tài)學(xué)觀察 飽和蔗糖溶液中卵囊呈長橢圓形，淡藍(lán)色，卵囊周圍顯黃綠色，部分卵囊囊壁凹陷。微分干涉差顯微鏡下，卵囊呈卵圓形或近圓形，測量76個(gè)卵囊，平均卵囊大小為（7.41±0.12）μm×（5.70±0.07）μm，卵囊指數(shù)為1.30。見圖1。

圖1 微分干涉顯微鏡下的鼠隱孢子蟲卵囊 （比例尺：10 μm）Fig.1 Cryptosporidium muris oocysts under differential interference contrast microscopy（Scale bars：10μm）

2.2 18SrRNA基因的PCR擴(kuò)增和測序 PCR成功擴(kuò)增出隱孢子蟲分離株的18SrRNA基因片段，大小為830～850bp。將PCR進(jìn)行測序，對其序列進(jìn)行Clustalx比對，與C.muris同源性為100%，鑒定出該隱孢子蟲分離株為C.muris。該序列GenBank登錄號(hào)為GQ227706。

2.3 動(dòng)物感染試驗(yàn) 雛雞接種鴕鳥源C.muris30d內(nèi)，各組雛雞均無C.muris卵囊排出，精神狀態(tài)始終良好，剖檢其胃腸道均正常。C.muris卵囊經(jīng)灌胃接種Balb／c鼠，從感染后第9 d（9days post infection，DPI 9）有卵囊排出至DPI 46結(jié)束。潛隱期為8d，顯露期為37d。排卵囊高峰期在DPI 17－DPI 31，最大 OPG為20.5×104個(gè)。感染組與不感染對照組小鼠均無死亡，糞便性狀、食欲、毛質(zhì)和精神狀況良好。詳見圖2。

圖2 Balb／c鼠感染鼠隱孢子蟲排卵囊規(guī)律Fig.2 Development of oocysts shedding of Balb／c mice after inoculation with C.muris oocysts

C.muris卵囊接種蒙古沙鼠后，潛隱期為13 d，DPI 13發(fā)現(xiàn)卵囊排出，沙鼠持續(xù)排出卵囊時(shí)間至DPI 85結(jié)束，顯露期72d，排卵囊高峰期在DPI 31－DPI 64，最大OPG為41.5×104個(gè)。試驗(yàn)前后，感染組與不感染對照組蒙古沙鼠均無死亡，糞便性狀、食欲、毛質(zhì)和精神狀況良好。

2.4 組織粘膜涂片改良抗酸染色觀察 分別在Balb／c鼠和蒙古沙鼠感染隱孢子蟲排卵囊高峰期，各剖殺兩只，取胃腸道粘膜涂片，采用改良抗酸染色法進(jìn)行觀察，十二指腸、空腸、回腸、結(jié)腸和直腸各腸道粘膜涂片中均未發(fā)現(xiàn)C.muris卵囊，僅在鼠胃粘膜涂片中發(fā)現(xiàn)C.muris卵囊。在1 000倍光學(xué)顯微鏡下觀察，卵囊在藍(lán)綠色背景下呈玫瑰紅色，對比明顯。見圖3。

圖3 經(jīng)改良抗酸染色法染色后的鼠胃粘膜涂片中鼠隱孢子蟲卵囊（1 000×）Fig.3 C.muris oocyst in the mice gastric gland stained by modified acid fast stain（1 000×）

2.5 病理組織學(xué)觀察 剖檢可見，感染組Balb／c鼠和蒙古沙鼠的胃和對照組相比，均萎縮變小，內(nèi)容物少，胃壁變薄。通過對組織切片HE染色觀察，結(jié)果在胃腺小凹發(fā)現(xiàn)大量C.muris蟲體寄生，在胃腺內(nèi)，可觀察到C.muris各發(fā)育階段，腸道組織內(nèi)未發(fā)現(xiàn)蟲體，見圖4。對照組未見異常。

2.6 電子掃描顯微鏡觀察 取感染組Balb／c鼠胃組織進(jìn)行電鏡觀察，在5 000倍掃描電鏡下，胃腺部位發(fā)現(xiàn)大量各階段C.muris蟲體寄生，帶蟲空泡嵌在胃腺粘膜內(nèi)，蟲體在帶蟲空泡內(nèi)發(fā)育，Ⅰ型裂殖體8個(gè)裂殖子清晰可見，見圖5。

3 討 論

3.1 鴕鳥自然感染的隱孢子蟲蟲種 1994年，Gajadhar[11]報(bào)道鴕鳥可感染隱孢子蟲，顯微鏡觀察其卵囊形態(tài)不同于C.baileyi和C.meleagridis，分離的隱孢子蟲卵囊不能感染乳鼠、雛雞、火雞和鵪鶉，提出該鴕鳥源隱孢子蟲可能是一個(gè)新種。2006年，Meireles等[12]報(bào)道其發(fā)現(xiàn)的鴕鳥隱孢子蟲分離株與C.baileyi分子遺傳特征有差異，但需對其卵囊的形態(tài)特征和生物學(xué)特性進(jìn)行研究以確定其是否為新的隱孢子蟲種類／基因型。國內(nèi)，孫銘飛等[13]對鴕鳥源隱孢子蟲分離株進(jìn)行生物學(xué)特性研究，結(jié)果顯示獲得的分離株均為C.baileyi，可感染雛雞和幼齡鴕鳥，但不能感染小鼠，主要寄生部位為泄殖腔和法氏囊。Wang等[14]報(bào)道鄭州地區(qū)鴕鳥隱孢子蟲感染率為11.7%，主要感染6月齡以下鴕鳥，基于18srRNA基因?qū)?3個(gè)隱孢子蟲分離株進(jìn)行鑒定，均為C.baileyi。本研究從形態(tài)學(xué)觀察，分子生物學(xué)方法和動(dòng)物感染試驗(yàn)證明分離的鴕鳥源隱孢子蟲為C.muris，且長期排卵囊，其在鴕鳥體內(nèi)的寄生部位有待于進(jìn)一步研究。

3.2C.muris人獸共患性C.muris具有較為廣泛的宿主譜，可感染人、小鼠、倉鼠、松鼠、田鼠、巖貍、雙峰駝、野生白山羊、犬、貓、山狗、非洲蹄兔、短尾猴和豬等多種哺乳動(dòng)物，在肯尼亞、泰國、法國、秘魯、印度尼西亞和埃及等國的免疫力低下人群中及健康人群中均有感染C.muris的報(bào)道[1－4]。先前研究認(rèn)為，C.muris只感染哺乳動(dòng)物，禽類曾有報(bào)道糞便中發(fā)現(xiàn)C.muris，但不清楚是否為通過卵囊機(jī)械傳播造成的[5]。基于多位點(diǎn)序列分型（MLST），本研究中的鴕鳥源C.muris亞型結(jié)構(gòu)（M5、M4、M6、M4）顯著不同于來自于捷克共和國、肯尼亞、埃及、秘魯、日本和中國的多種人源／動(dòng)物源C.muris亞型結(jié)構(gòu)，表明鼠隱孢子蟲與宿主存在共進(jìn)化，其人獸共患性經(jīng)長期宿主適應(yīng)存在協(xié)同進(jìn)化[15－16]。

圖4 蒙古沙鼠胃腺中鼠隱孢子蟲各階段蟲體形態(tài)（1 000×）Fig.4 Morphological characterization of C.muris developed in Mongolian gerbils gastric gland（1 000×）

圖5 掃描電鏡觀察Balb／c鼠胃腺寄生的鼠隱孢子蟲（5 000×）Fig.5 C.muris developed in Balb／c mice gastric gland observed by SEM （5 000×）

3.3C.muris動(dòng)物感染試驗(yàn)C.muris由Tyzzer于1907年首次在試驗(yàn)鼠胃內(nèi)發(fā)現(xiàn)并命名，隨后研究發(fā)現(xiàn)C.muris所有發(fā)育階段均在胃腺完成[17]。日本研究人員先后用家鼠源C.muris分離株（RN66株）進(jìn)行動(dòng)物感染試驗(yàn)，但結(jié)果存在較大差異。1989年，Iseki[18]等報(bào)道 RN66株卵囊感染小鼠、貓、豚鼠、兔子和犬，試驗(yàn)動(dòng)物個(gè)體接種卵囊量均為1.0×106個(gè)，卵囊接種3周齡的SPF小鼠后，潛隱期為5 d，顯露期為DPI 34－75，高峰期為DPI 16－26，在高峰期每只小鼠每天排卵囊量達(dá)11×106～46×106個(gè)，寄生部位為胃腺。1999年，Taylor等[19]等分別用400個(gè)、2.0×104個(gè)和1.0×106個(gè) RN66株卵囊感染6周齡小鼠，卵囊潛隱期為10～18d，排卵囊持續(xù)至DPI 89，不同劑量感染組小鼠均未表現(xiàn)臨床癥狀，感染組小鼠和不感染對照組體重變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；剖檢可見，胃腺腫大增生，充血，組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)蟲體寄生于胃腺，細(xì)胞壞死，粘膜固有層嗜酸性粒細(xì)胞浸潤、變形。2001年，Toshihiro等[20]用低劑量RN66株卵囊對3周齡ICR小鼠進(jìn)行感染試驗(yàn)，25只小鼠接種24個(gè)卵囊，僅1只發(fā)現(xiàn)有卵囊排出，潛隱期為21d；25只小鼠接種240個(gè)卵囊，19只感染成功，潛隱期為14～17d；50只小鼠每天接種24個(gè)卵囊，連續(xù)接種10d，4只感染成功，潛隱期為14－19d；而5只接種2.4×106個(gè)卵囊的小鼠均感染成功，潛隱期為6～7d。上述研究表明，使用同一個(gè)C.muris分離株進(jìn)行動(dòng)物感染試驗(yàn)，不同的試驗(yàn)動(dòng)物和不同的感染量均可使其感染力、潛隱期及顯露期不同。

不同C.muris分離株存在宿主特異性。自然條件下，野生田鼠可感染C.muris，然而 Modry等[21]用C.muris卵囊人工接種5種田鼠，每只接種1.0×105個(gè)卵囊，結(jié)果發(fā)現(xiàn)均不感染。同樣，非人靈長類可自然感染C.muris，而近來一個(gè)研究發(fā)現(xiàn)，免疫力正常和免疫抑制的食蟹猴接種1.0×107個(gè) RN66株卵囊，均未發(fā)現(xiàn)感染。Kvac等[23－24]人工感染試驗(yàn)顯示，家鼠源C.muris不能感染8周齡仔豬，但可感染蒙古沙鼠，接種7日齡和8周齡蒙古沙鼠，每只接種1.0×106個(gè)卵囊，潛隱期分別為18d和21d，前者顯露期大于90d，排卵囊最大OPG值為12×106，后者顯露期為93～100d，個(gè)體每日排卵囊最大OPG值為1.7×106，試驗(yàn)過程中，均未出現(xiàn)臨床癥狀。Melicherova等[25]用兩種實(shí)驗(yàn)鼠對C.muris進(jìn)行了生活史研究，分別接種Balb／c鼠和白鼻乳鼠1.0×108個(gè)C.muris分離株（TS03株），兩者潛隱期和顯露期存在較大差異，Balb／c鼠潛隱期和顯露期分別為7.5～10d和10～15d，而白鼻乳鼠潛隱期長達(dá)18～21d，顯露期呈慢性長期感染。內(nèi)生發(fā)育過程研究顯示，兩種實(shí)驗(yàn)鼠均于接種C.muris卵囊后5d形成厚壁形卵囊，在Balb／c鼠胃內(nèi)薄壁型卵囊和卵囊最早形成于DPI 5和DPI 7.5，而顯著不同的是，在白鼻乳鼠胃內(nèi)薄壁型卵囊和卵囊最早形成于DPI 14和DPI 18，進(jìn)一步表明不同源C.muris分離株存在宿主差異并與宿主共進(jìn)化。

本試驗(yàn)采用鴕鳥源C.muris感染雛雞、Balb／c鼠和蒙古沙鼠，感染量均為1.0×106個(gè)卵囊，發(fā)現(xiàn)雛雞不能感染C.muris，Balb／c鼠和蒙古沙鼠均可感染成功。其中Balb／c鼠感染C.muris卵囊后，潛隱期8d，顯露期37d，排卵囊高峰期在DPI 17－DPI 31；蒙古沙鼠的潛隱期為12d，顯露期72d，排卵囊高峰期在DPI 31－DPI 64；兩種實(shí)驗(yàn)鼠的感染差異同Melicherova等[25]的研究，但接種鴕鳥源C.muris分離株的Balb／c鼠顯露期明顯長于接種TS03株的Balb／c鼠，表明鴕鳥源C.muris分離株與TS03株存在不同感染情況。本試驗(yàn)中感染成功的動(dòng)物試驗(yàn)前后精神狀態(tài)良好，無臨床癥狀，組織學(xué)和電鏡掃描觀察，僅在胃內(nèi)發(fā)現(xiàn)大量C.muris蟲體寄生，并可見其各發(fā)育階段，與前人研究相一致。結(jié)果表明鴕鳥源C.muris與鼠源C.muris感染實(shí)驗(yàn)鼠后在其排卵囊規(guī)律各有差異，臨床表現(xiàn)、寄生部位、內(nèi)生發(fā)育過程相同，存在人獸共患風(fēng)險(xiǎn)，但其如何寄生于鴕鳥及其在鴕鳥體內(nèi)寄生部位和繁殖發(fā)育階段有待進(jìn)一步研究。

[1]Xiao L.Molecular epidemiology of cryptosporidiosis：An update[J].Exp Parasitol，2010，124（1）：80－89.DOI：10.1016／j.exppara.2009.03.018

[2]Ren X，Zhao J，Zhang L，et al.Cryptosporidiumtyzzerin.sp.（Apicomplexa：Cryptosporidiidae）in domestic mice（Musmusculus）[J].Exp Parasitol，2012，130（3）：274－281.DOI：10.1016／j.exppara.2011.07.012

[3]Kvac M，Hofmannova L，Hlaskova L，et al.Cryptosporidium erinacein.sp.（Apicomplexa：Cryptosporidiidae）in hedgehogs[J].Vet Parasitol，2014，201（1－2）：9－17.DOI：10.1016／j.vetpar.2014.01.014

[4]Pavlasek I，Ryan U.The first finding of a natural infection ofCryptosporidiummurisin a cat[J].Vet Parasitol，2007，144（3－4）：349－352.

[5]Ng J，Pavlasek I，Ryan U.Identification of novelCryptosporidiumgenotypes from avian hosts[J].Appl Environ Microbiol，2006，72（12）：7548－7553.

[6]Richter B，Nedorost N，Maderner A，et al.Detection ofCryptosporidiumspecies in feces or gastric contents from snakes and lizards as determined by polymerase chain reaction analysis and partial sequencing of the 18Sribosomal RNA gene[J].J Vet Diagn Invest， 2011， 23 （3）： 430－435. DOI： 10.1177／1040638711403415

[7]da Silva DC，Paiva PR，Nakamura AA，et al.The detection ofCryptosporidiumserpentisin snake fecal samples by real－time PCR[J].Vet Parasitol，2014，204（3－4）：134－138.DOI：10.1016／j.vetpar.2014.05.012

[8]Fayer R.Taxonomy and species delimitation inCryptosporidium[J].Exp Parasitol，2010，124（1）：90－97.DOI：10.1016／j.exppara.2009.03.005

[9]Nguyen ST，F(xiàn)ukuda Y，Tada C，et al.Prevalence and molecular characterization ofCryptosporidiumin ostriches（Struthiocamelus）on a farm in central Vietnam[J].Exp Parasitol，2013，133（1）：8－11.DOI：10.1016／j.exppara.2012.10.010

[10]Xiao L，Escalante H，Yang CF，et al.Phylogenetic analysis ofCryptosporidiumparasites based on the small－subunit rRNA gene locus[J].Appl Environ Microbiol，1999，65（4）：1578－1583.

[11]Gajadhar AA.Host specificity studies and oocyst description of aCryptosporidiumsp.isolated from ostriches[J].Parasitol Res，1994，80（4）：316－319.

[12]Meireles MV，Soares RM，dos Santos MM，et al.Biological studies and molecular characterization of aCryptosporidiumisolate from ostriches（Struthiocamelus）[J].J Parasitol，2006，92（3）：623－626.

[13]Sun MF，Zhang LX，Ning CS，et al.Identification ofCryptosporidaisolate from ostrich in China and biological characters studies[J].Sci Agric Sin，2007，40（7）：1528－1534.（in Chinese）孫銘飛，張龍現(xiàn)，寧長申，等.鴕鳥源隱孢子蟲的種類鑒定及其生物學(xué)特性研究[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，40（7）：1528－1534.

[14]Wang R，Qi M，Jingjing Z，et al.Prevalence ofCryptosporidiumbaileyiin ostriches（Struthiocamelus）in Zhengzhou，China[J].Vet Parasitol，2011，175（1／2）：151－154.DOI：10.1016／j.vetpar.2010.10.005

[15]Feng Y，Yang W，Ryan U，et al.Development of a multilocus sequence tool for typingCryptosporidiummurisandCryptosporidiumandersoni[J].J Clin Microbiol，2011，49（1）：34－41.DOI：10.1128／JCM.01329－10

[16]Wang R，Jian F，Zhang L，et al.Multilocus sequence subtyping and genetic structure ofCryptosporidiummurisandCryptosporidiumandersoni[J].PLoS One，2012，7（8）：e43782.DOI：10.1371／journal.pone.0043782

[17]Tyzzer E.An extracelluar coccidium，Cryptosporidiummurisof the gastric glands of the common mouse[J].Med Res，1910，18：487－509.

[18]Iseki M，Maekawa T，Moriya K，et al.Infectivity ofCryptosporidiummuris（strain RN 66）in various laboratory animals[J].Parasitol Res，1989，75（3）：218－222.

[19]Taylor MA，Marshall RN，Green JA，et al.The pathogenesis of experimental infections ofCryptosporidiummuris（strain RN 66）in outbred nude mice[J].Vet Parasitol，1999，86（1）：41－48.

[20]Mstsue T，F(xiàn)ujino T，Kajima J，et al.Infectivity and oocyst excretion patterns ofCryptosporidiummurisin slightly infected mice[J].J Vet Med Sci，2001，63（3）：319－320.

[21]Modry D，Hofmannova L，Antalova Z，et al.Variability in susceptibility of voles（Arvicolinae）to experimental infection withCryptosporidiummurisandCryptosporidiumandersoni[J].Parasitol Res，2012，111（1）：471－473.DOI：10.1007／s00436－012－2821－1

[22]Masuno K，F(xiàn)ukuda Y，Kubo M，et al.Infectivity ofCryptosporidiumandersoniandCryptosporidiummuristo normal and immunosuppressive cynomolgus monkeys[J].J Vet Med Sci，2014，76（2）：169－172.

[23]Kvac M，Kestranova M，Kvetonova D，et al.Cryptosporidium tyzzeriandCryptosporidiummurisoriginated from wild West－European house mice（Mus musculus domesticus）and East－European house mice（Musmusculusmusculus）are non－infectious for pigs[J].Exp Parasitol，2012，131（1）：107－110.DOI：10.1016／j.exppara.2012.03.016

[24]Kvac M，Sak B，Kvetonova D，et al.Infectivity of gastric and intestinalCryptosporidiumspecies in immunocompetent Mongolian gerbils （Merionesunguiculatus）[J].Vet Parasitol，2009，163（1－2）：33－38.DOI：10.1016／j.vetpar.2009.03.047

[25]Melicherova J，Ilgova J，Kvac M，et al.Life cycle ofCryptosporidiummurisin two rodents with different responses to parasitization[J].Parasitology，2014，141（2）：287－303.DOI：10.1017／S0031182013001637