氟康唑滴眼凝膠的制備與質(zhì)量控制

滿玉清，魏傳梅，劉明華，左小信，胡麗敏

（1.濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，山東　濱州　256603；2.濱州市人民醫(yī)院，山東　濱州　256603）

氟康唑滴眼凝膠的制備與質(zhì)量控制

滿玉清1，魏傳梅1，劉明華1，左小信2，胡麗敏1

（1.濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，山東濱州256603；2.濱州市人民醫(yī)院，山東濱州256603）

目的制備氟康唑滴眼凝膠并建立質(zhì)量控制方法。方法采用正交設(shè)計(jì)對(duì)基質(zhì)處方進(jìn)行優(yōu)化；用高效液相色譜法測定氟康唑的含量，并進(jìn)行制劑刺激性及穩(wěn)定性考察。結(jié)果氟康唑眼凝膠最佳基質(zhì)處方為（質(zhì)量體積比）：卡波姆-940 0.3％，硼砂0.4％，甘油2％；氟康唑進(jìn)樣量在1.0～8.0 μg的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r= 0.999 8），加樣回收率為99.43％（RSD=0.75％）；制劑無刺激性，穩(wěn)定性好。結(jié)論氟康唑滴眼凝膠處方合理，質(zhì)量可控。

正交試驗(yàn)；氟康唑；卡波姆；硼砂；滴眼凝膠；質(zhì)量控制

真菌性角膜潰瘍是由真菌感染引起的一種頑固的致盲率很高的角膜炎［1］。治療必須選擇對(duì)真菌敏感的藥物，由于真菌常侵入角膜組織內(nèi)，需要藥物與潰瘍面保持持續(xù)的接觸，使藥物在角膜內(nèi)達(dá)到足夠濃度［2］，抗真菌滴眼液滴眼后易被淚液稀釋，并很快從淚道排出，約70％的藥液從眼部溢出，若眨眼，損失可達(dá)90％［3］。眼膏劑雖能使藥物與角膜的接觸時(shí)間延長，但用藥劑量難以控制。療效高、副作用少，作用時(shí)間長的藥物是治療角膜病藥物的發(fā)展方向［4］。為提高局部的藥物濃度，延長藥物的作用時(shí)間，增加臨床療效，本文以氟康唑?yàn)橹魉幹瞥傻窝勰z，采用高效液相色譜法測定氟康唑的含量，對(duì)其刺激性及穩(wěn)定性進(jìn)行考察，報(bào)道如下。

1　儀器和試藥

1.1儀器與材料pH5-3C酸度計(jì)（蕭山市分析儀器廠）；NDJ-79旋轉(zhuǎn)式黏度計(jì)（上海平軒科學(xué)儀器廠）；FA1004N精密電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；UV-100型紫外分光光度計(jì)（日本島津）；LC-20AT高效液相色譜儀，Prominence SPD-20A/UV-VIS檢測器；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：新西蘭兔（山東綠葉制藥有限公司），動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（魯）20090011。

1.2試藥氟康唑?qū)φ掌罚ㄖ袊称匪幤窓z定研究院，批號(hào)：100314-201204）；氟康唑（杭州民生藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號(hào)：20121126）；卡波姆-940（南京威爾化工有限公司，批號(hào)：20130102）；硼砂（湖南爾康制藥有限公司，批號(hào)：20121009）；甘油（湖南爾康制藥有限公司，批號(hào)：20121009）；羥苯乙酯（廣州臺(tái)山新寧制藥廠，批號(hào)：20130306）；紅霉素眼膏（山東魯抗辰欣藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20120402）。

2　方法與結(jié)果

2.1基質(zhì)處方優(yōu)化

2.1.1處方氟康唑0.5g，羥苯乙酯0.03 g，卡波姆、硼砂、甘油適量，注射用水加至100 mL。

2.1.2正交設(shè)計(jì)根據(jù)文獻(xiàn)資料和預(yù)實(shí)驗(yàn)，選取卡波姆-940（A）、硼砂（B）、甘油（C）為考察因素，每個(gè)因素取3個(gè)水平，按L9（34）正交表進(jìn)行設(shè)計(jì)。以對(duì)凝膠劑基質(zhì)影響較大的黏度、可滴性、pH值為考察指標(biāo)。試驗(yàn)設(shè)計(jì)見表1。

表1　正交試驗(yàn)因素水平

2.1.3樣品的制備按表1所列的不同因素水平處方量，取卡波姆撒于適量注射用水中，靜置過夜，充分膨脹［5］；將氟康唑，羥苯乙酯溶于適量注射用水中，加熱溶解，冷至40℃左右，經(jīng)3號(hào)垂熔玻璃漏斗過濾到溶脹好的卡波姆-940中，攪勻；經(jīng)3號(hào)垂熔玻璃漏斗加入10％硼砂溶液、甘油，攪勻；加注射用水至100 mL，充分?jǐn)噭?，高壓蒸汽滅菌，無菌分裝。

2.1.4評(píng)價(jià)指標(biāo)及評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)以滴眼凝膠的pH值，黏度，可滴性為評(píng)價(jià)指標(biāo)，綜合評(píng)分滿分為100分。其中pH 40分，黏度40分，可滴性20分。pH考察：按《中國藥典》2010年版（二部）［6］pH值測定項(xiàng)下方法，取樣品5 g，加純化水25 mL稀釋后測定，pH值6.0～7.0為40分，每增加或減少0.2減5分。黏度考察：測定溫度25℃，采用 NDJ-79型旋轉(zhuǎn)黏度計(jì)測量各處方樣品的平均黏度（n=5），平均黏度30～35 Pa·s為40分，每增加或減少5 Pa·s 減5分。可滴性考察：測定溫度25℃，用自制帶塞孔（內(nèi)徑1.5mm）的50 mL塑料瓶裝入樣品進(jìn)行可滴性試驗(yàn)，觀察滴出的難易程度，樣品由3位有10年以上工作經(jīng)驗(yàn)的制劑人員評(píng)分，取平均值，不加壓力自行流出為0分；不加壓力很易滴下為10分；稍加壓力才能滴下為20分；加大力度后才能滴下為10分；加大力度后也難以滴下為0分。

2.1.5結(jié)果與分析對(duì)凝膠的pH、黏度、可滴性分別評(píng)分并計(jì)算綜合評(píng)分（單項(xiàng)評(píng)分之和）數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表2、3。

表2　正交試驗(yàn)及結(jié)果

表3　方差分析表

由表2可知，最佳基質(zhì)處方為A3B2C1，卡波姆-940 0.3g，硼砂0.4g，甘油2 g。最優(yōu)處方為處方8。由表3結(jié)果可知，因素A對(duì)基質(zhì)處方影響最顯著，因素 B次之，因素 C再次之。

2.2含量測定

2.2.1色譜條件色譜柱：Hypersil BDS-C18（4.6mm×200 mm，5 μm）；流動(dòng)相：磷酸鹽緩沖液（pH 7.0）-甲醇（55∶45）；流速：1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量20 μL；檢測波長：261 nm。

2.2.2供試品溶液的制備取本品4 g，精密稱定，加入15％氯化鈉溶液20 mL，邊滴加邊攪拌，使基質(zhì)沉淀，濾過，用15 mL氯化鈉溶液分3次洗滌，沉淀，濾過，合并濾液，加流動(dòng)相稀釋至100 mL，經(jīng) 0.45 μm微孔濾膜濾過作為供試品溶液。

2.2.3陰性對(duì)照溶液的制備按處方比例和工藝制成不含氟康唑的陰性對(duì)照樣品，按供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.2.4系統(tǒng)適用性試驗(yàn)分別取對(duì)照品溶液（0.2mg·mL-1）、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。在此色譜條件下氟康唑峰與其它峰分離度良好，陰性對(duì)照溶液在氟康唑峰的位置處無干擾，結(jié)果見圖1。

2.2.5線性關(guān)系考察精密稱取氟康唑?qū)φ掌愤m量，加流動(dòng)相制成1 mg·mL-1的溶液。精密量取0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL分別置10 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，以峰面積Y對(duì)進(jìn)樣量X繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：Y=39 659X-5.253 0（r=0.999 8），表明氟康唑進(jìn)樣量在1.0～8.0 μg的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖1　高效液相色譜圖

2.2.6精密度試驗(yàn)取同一供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，對(duì)氟康唑峰面積進(jìn)行考察，RSD=0.58％，表明精密度良好。

2.2.7重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(hào)樣品5份，分別制備供試品溶液，依法測定，對(duì)氟康唑峰面積進(jìn)行考察，RSD為1.09％，表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.8穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，分別在0、1、2、4、8、12 h分別進(jìn)樣，依法測定，對(duì)氟康唑峰面積進(jìn)行考察，結(jié)果RSD=1.25％。表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.9加樣回收率試驗(yàn)取已知含量的樣品（氟康唑約為處方量的50％）精密加入氟康唑?qū)φ掌罚瞥珊颠蛱幏奖壤?0％、100％、120％的樣品，按照“2.2.3”項(xiàng)制得樣品供試液，進(jìn)樣測定峰面積，將測得峰面積代入回歸方程按外標(biāo)法計(jì)算樣品中氟康唑的含量，測得氟康唑的回收率，結(jié)果見表4。

表4　回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.2.10樣品測定 按上述方法測定3批樣品（20130303、20130304、20130305），氟康唑的含量分別為標(biāo)示量的99.58％、100.06％、99.62％。

3　刺激性實(shí)驗(yàn)

取健康雌性新西蘭兔24只，體重約2.0 kg，分為實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組眼內(nèi)涂氟康唑眼凝膠，對(duì)照組眼內(nèi)滴加無菌生理鹽水，兩組均為1次用藥0.2g，每天3次，均連用7 d。每次用藥后15、30、45、60、120 min分別記錄角膜、結(jié)膜等部位變化情況。7天后應(yīng)用熒光素鈉檢查角膜、結(jié)膜損害情況。結(jié)果實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組均未出現(xiàn)結(jié)膜紅腫、角膜充血、分泌物等刺激反應(yīng)，用藥7 d未發(fā)現(xiàn)角膜、結(jié)膜損害情況，表明該滴眼凝膠無刺激性。

4　穩(wěn)定性試驗(yàn)

4.1離心試驗(yàn)取本品10 g，置于離心管中，3 000 rpm離心30 min，結(jié)果無分層現(xiàn)象。

4.2耐熱耐寒試驗(yàn)取本品3批適量，裝于密閉聚乙烯眼藥瓶中，置于55℃恒溫箱中48 h，結(jié)果無分層變色現(xiàn)象；-15℃冰箱中放置24 h，恢復(fù)至室溫，結(jié)果無分層變色現(xiàn)象。

5　討論

5.1凝膠基質(zhì)中的卡波姆是影響制劑黏度的主要因素，樣品黏度隨卡波姆用量的增大而增大；硼砂與卡波姆質(zhì)量比是調(diào)節(jié)pH的主要因素，質(zhì)量比在一定范圍內(nèi)與黏度成正比，但質(zhì)量比大于4時(shí)黏度明顯變?。?］。

5.2卡波姆為酸性物質(zhì)，其1％水分散體的pH值為3.11，此時(shí)的pH值和黏度均低，當(dāng)用堿中和時(shí)，隨pH值的增高，黏度逐漸上升，配制制劑時(shí)先將氟康唑水溶液與卡波姆的水分散體混勻后，再緩慢的加入堿性中和劑，這樣可使氟康唑更易均勻分布，且制劑成品氣泡少，性狀好。

5.3凝膠堿性中和劑常用氫氧化鈉或三乙醇胺等強(qiáng)堿溶液［8］，氟康唑滴眼凝膠選用硼砂做堿性中和劑，既能中和卡波姆的酸性，又發(fā)揮了其調(diào)節(jié)滴眼劑滲透壓和抗菌消炎的治療作用，還降低了刺激性。優(yōu)化基質(zhì)處方將制劑的粘稠度、pH、可滴性作為制劑的評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，能更好的反應(yīng)制劑的質(zhì)量與適用性。

5.4含量測定時(shí)供試品溶液的制備如果直接稀釋，黏度較大，不易過濾，因此用15％NaCl使基質(zhì)沉淀，過濾后得供試品溶液。

5.5皮膚和黏膜部位給藥要求制劑與黏膜有良好親和性、涂展性和黏著性［3］，氟康唑滴眼凝膠能夠增加氟康唑與角膜的接觸時(shí)間，減少局部藥物的流失，提高病變部位的氟康唑濃度，適用性及治療效果更好。

［1］成新蓮，王玉，劉秀蓮，等.氟康唑眼凝膠治療真菌性角膜潰瘍的應(yīng)用研究［J］.濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，30（5）：393-394.

［2］李風(fēng)鳴.眼科全書［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1999：1397.

［3］崔福德.藥劑學(xué)［M］.第5版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2004：87.

［4］陳家祺，劉祖國.加強(qiáng)對(duì)角膜病的基礎(chǔ)與臨床研究［J］.中華眼科雜志，2000，36（1）：10-12.

［5］薄明香，成文娜，汪風(fēng)芹，等.復(fù)方黃芩苷凝膠的制備及質(zhì)量控制研究［J］.藥學(xué)研究，2014，3（2）：98-99.

［6］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典2010年版（二部）［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

［7］曹維，童春暉，胡一橋.利巴韋林眼凝膠的研制及質(zhì)量控制［J］.中國新藥雜志，2006，15（10）：793-796.

［8］張立波.阿昔洛韋眼用凝膠制劑的研究［D］.沈陽：沈陽藥科大學(xué)，2006.

Preparation and quality control of Fluconazole Ophthalmic Gel

MAN Yu-qing1，WEI Chuan-mei1，LIU Ming-hua1，ZUO Xiao-xin2，HU Li-min1
（1.The Affiliated Hospital of Binzhou Medical College，Binzhou 256603，China；
2.Binzhou People′s Hospital，Binzhou 256603，China）

Objective To prepare Fluconazole Ophthalmic Gel and establish its quality control standards.Methods the matrix formulation was optimized by orthogonal design；HPLC was used to determine the content of fluconazole，and investigate the stimulating and stability of the preparation.Results The best prescription of Fluconazole Ophthalmic Gel for quality（mass to volume ratio）were：carbomer-940 0.3％，borax 0.4％and glycerol 2％.The linear range of fluconazole was 1.0～8.0 μg（r=0.999 8），and the average recovery was 99.43％（RSD=0.75％）；The prescription was stable and nonirritating.Conclusion The prescription of Fluconazole Ophthalmic Gel was reasonable，and the quality was controllable.

Orthogonal test；Fluconazole；Carbomer；Borax；Ophthalmic gel；Quality control

R927.1

A

2095-5375（2015）12-0719-004

滿玉清，男，主管藥師，研究方向：醫(yī)院制劑與藥品檢驗(yàn)，E-mail：myq388@126.com

胡麗敏，女，研究方向：醫(yī)院制劑，Tel：0543-3256752，E-mail：byfywy@163.com