管碟法比較不同廠家的注射用頭孢曲松鈉的抑菌效力

郭新營，臧恒昌，王彥厚

（1.山東大學(xué)藥學(xué)院，山東　濟南　250012；2.瑞陽制藥有限公司，山東　淄博　256100；3.淄博市食品藥品檢驗研究院，山東　淄博　255086）

·制劑研究·

管碟法比較不同廠家的注射用頭孢曲松鈉的抑菌效力

郭新營1，2，臧恒昌1，王彥厚3

（1.山東大學(xué)藥學(xué)院，山東濟南250012；2.瑞陽制藥有限公司，山東淄博256100；
3.淄博市食品藥品檢驗研究院，山東淄博255086）

目的建立比較不同廠家的注射用頭孢曲松鈉抑菌效力的方法。方法以測定效價為反應(yīng)值，按照《中國藥典》2010年版（二部）附錄ⅪA抗生素微生物檢定法中管碟法的二劑量法設(shè)計試驗，對不同廠家的注射用頭孢曲松鈉的抑菌效力進行比較。結(jié)果對于金黃色葡萄球菌，A、B廠樣品與原研樣品抑菌效果基本相同。對于大腸埃希菌，兩個廠家樣品的抑菌效果與原研樣品基本一致，對于肺炎克雷伯菌，兩個廠家樣品的抑菌效果無顯著性差異，原研樣品抑菌效果更好。結(jié)論該方法能用于比較不同廠家的注射用頭孢曲松鈉的抑菌效力。

注射用頭孢曲松鈉；抑菌效力；生物檢定法；管碟法

注射用頭孢曲松鈉由羅氏制藥最先研制，是一種廣譜、長效的第三代半合成頭孢類抗生素，通過抑制細菌細胞壁的合成而發(fā)揮殺菌作用。本品對多種革蘭陽性菌和革蘭陰性菌有效，對腸桿菌科細菌有強大活性，對流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌和腦膜炎奈瑟菌有較強抗菌作用，對溶血性鏈球菌和肺炎球菌亦有良好作用。為了了解不同廠家生產(chǎn)的注射用頭孢曲松鈉與原研樣品臨床療效的差異，筆者選擇2個不同廠家的注射用頭孢曲松鈉樣品，參考相關(guān)文獻［1～6］，通過管碟法測定樣品的效價來間接反應(yīng)樣品的體外抑菌效果，為注射用頭孢曲松鈉仿制藥品與原研樣品臨床療效的差異提供參考。

1　儀器與試藥

1.1儀器精密電子天平（XS105DU）；生化培養(yǎng)箱（北京蘭貝石恒溫技術(shù)有限公司）；脈動真空滅菌器（山東新華醫(yī)療器械股份有限公司）；牛津杯（外徑7.8mm）；抑菌圈電腦測量儀（北京先驅(qū)威鋒技術(shù)開發(fā)公司）。

1.2試藥金黃色葡萄球菌［批號：CMCCB（26003），中國藥品生物制品檢定所］；大腸埃希菌［批號：CMCCB（44103），中國藥品生物制品檢定所］；肺炎克雷伯菌［批號：CMCCB（46117），中國藥品生物制品檢定所］；抗生素微生物檢定培養(yǎng)基II（批號：130217，中國藥品生物制品檢定所）；營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（批號：20130627，青島海博生物技術(shù)有限公司）；頭孢曲松對照品（批號：130480-200903，含量 83.7％，中國藥品生物制品檢定所）；其余試劑均為分析純。

1.3供試品注射用頭孢曲松鈉（羅氏制藥，批號：SH6004；A廠，批號：13092107、13092108、13092109；B廠，批號：314033035、314021031、314041037）。

2　方法與結(jié)果

2.1溶液的制備

2.1.1對照品溶液假定頭孢曲松純品的效價為1 000 U·mg-1，則中檢所對照品的效價為837 U·mg-1。精密稱取頭孢曲松對照品約59.7mg，至25 mL容量瓶中，加pH 7.8磷酸鹽緩沖液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液。分別精密量取儲備液1、2、4 mL至200 mL客量瓶中，加pH 7.8磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度，得到 10、20、40 U·mL-1的頭孢曲松對照品溶液。

2.1.2供試品溶液參照《中國藥典》2010年版注射用頭孢曲松鈉含量測定的方法，對原研樣品和2個不同廠家樣品進行含量測定，結(jié)果見表1。

表1　注射用頭孢曲松鈉含量測定結(jié)果

按照“2.1.1”項下的方法制備10、20、40 U·mL-1的頭孢曲松供試品溶液。

2.2菌懸液的制備將金黃色葡萄球菌，大腸埃希菌，肺炎克雷伯菌的營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物劃線接種于營養(yǎng)瓊脂斜面，37℃培養(yǎng)21 h，挑選3代菌種的營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，用氯化鈉注射液將菌苔洗下，制成菌懸液，保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3雙碟的制備［7，8］按照《中國藥典》2010年版（二部）附錄ⅪA抗生素微生物檢定法，選用抗生素培養(yǎng)基Ⅱ、Ⅳ作為試驗培養(yǎng)基。取培養(yǎng)基按照說明書配制，滅菌后備用。取平底雙碟，分別注入抗生素微生物檢定培養(yǎng)基Ⅱ（用于金黃色葡萄球菌，肺炎克雷伯菌）、抗生素微生物檢定培養(yǎng)基Ⅳ（用于大腸埃希菌）20 mL，使其在碟底均勻涂布，放置水平面上使其凝固，作為底層。另取培養(yǎng)基適量，加熱溶化后放冷至50℃，加入1％菌懸液，混合均勻，在每一雙碟中分別加入5 mL作為菌層，放置冷卻后，在每一雙碟中等距均勻安置牛津杯4個，用陶瓦蓋覆蓋，備用。

2.4試驗設(shè)計按照《中國藥典》2010年版（二部）附錄ⅪA抗生素微生物檢定法中管碟法的二劑量法，取制備好的雙碟，在每一雙碟中對角的2個牛津杯中分別裝高，低質(zhì)量濃度的對照品溶液和供試品溶液各0.3mL，在37℃培養(yǎng)15 h后取出，用抑菌圈電腦測量儀測量供試品的效價，結(jié)果見表2～4。

表2　注射用頭孢曲松鈉的效價測定（金黃色葡萄球菌）

對于金黃色葡萄球菌的抑菌效果，A廠和B廠生產(chǎn)的注射用頭孢曲松鈉樣品之間無顯著性差異（P＞0.05），并且與羅氏制藥的抑菌效果基本一致。

表3　注射用頭孢曲松鈉的效價測定（大腸埃希菌）

對于大腸埃希菌的抑菌效果，2個廠家生產(chǎn)的注射用頭孢曲松鈉之間無顯著性差異（P＞0.05），并且與羅氏制藥的抑菌效果基本一致。

表　4 注射用頭孢曲松鈉的效價測定（肺炎克雷伯菌）

對于肺炎克雷伯菌的抑菌效果，2個廠家生產(chǎn)的注射用頭孢曲松鈉之間無顯著性差異（P＞0.05），羅氏制藥的抑菌效果更好。

3　討論

3.1金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌對于頭孢曲松鈉可以形成邊緣清晰、完整的抑菌圈，直徑在16～22 cm范圍內(nèi)，有利于效價的測定，而枯草芽孢桿菌，短小桿菌和銅綠假單胞菌對于頭孢曲松鈉沒有形成很好的抑菌圈，無法測定效價。

3.22個不同廠家生產(chǎn)的注射用頭孢曲松鈉含量測定結(jié)果無顯著性差異（P＞0.05），并且與原研樣品基本一致，但是不同廠家的樣品對于不同菌株的抑菌效果卻有所差別，其中原研樣品的抑菌效果最好，可能是因為藥物的晶型、晶格能、粒度不一致，在體內(nèi)的溶解度不一致，在血液中與血漿蛋白的結(jié)合度不一致，從而導(dǎo)致療效的不一致。若想達到原研樣品的治療效果，還需在晶型、晶格能、粒度等方面進行深入的研究。

3.3不同廠家的注射用頭孢曲松鈉抑菌效果有所差別，提示本品在臨床使用過程中可能存在差別，臨床使用前有必要進行藥敏試驗［9］。

3.4臨床用藥一般選擇療效確切，治療費用相對低的國產(chǎn)品牌，根據(jù)試驗結(jié)果，對于金黃色葡萄球菌，大腸埃希菌所致的感染，可以選擇A、B廠的產(chǎn)品，對于肺炎克雷伯菌所致的感染，羅氏制藥的注射用頭孢曲松鈉可以產(chǎn)生更好的效果［10］。

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［2］胡云建，陳東科，張秀珍.頭孢哌酮/他唑巴坦體外抗菌活性研究［J］.中國臨床藥理學(xué)雜志，2001，17（6）：410-414.

［3］羅予，孟林敏，趙國新，等.黃連聯(lián)合頭孢菌素類抗生素的抑菌作用研究［J］.中醫(yī)藥學(xué)刊，2004，22（11）：2033-2034.

［4］王健，劉剛，趙廷坤.加替沙星與頭孢他啶對臨床分離革蘭陰性致病菌的體外抗菌活性比較［J］.川北醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2005，20（1）：87-89.

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［6］劉晉，房霞.管碟法測定琥乙紅霉素效價的影響因素分析及控制方法［J］.藥學(xué)研究，2013，32（12）：705-707.

［7］國家藥典委員會，中華人民共和國藥典2010年版（二部）［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：1.

［8］羅楊，吳宗芬，陳錫龍.紅霉素效價測定的不確定度分析［A］.獸醫(yī)藥品學(xué)——2010第三屆中國獸藥大會論文集［C］.2010：96-99.

［9］劉麗萍，夏泉，王中新.國產(chǎn)和進口頭孢哌酮鈉/舒巴坦鈉體外抗菌作用的比較［J］.中國藥師，2004，7（8）：615-616.

［10］張峰，袁菊萍.不同廠家頭孢他啶體外抑菌作用及藥物費用分析［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報，2008，27（4）：478-479.

Comparison of antimicrobial potency of Ceftriaxone Sodium Injection from different manufactures by cup-plate method

GUO Xin-ying1，2，ZANG Heng-chang1，WANG Yan-hou3
（1.School of Pharmaceutical Sciences，Shandong University，Jinan 250012，China；2.Reyoung Pharmaceutical Co.，Ltd.，Zibo 256100，China；3.Zibo Institute for Food and Drug，Zibo 255086，China）

Objective To establish a method for comparing the antimicrobial potency of Ceftriaxone Sodium Injection from different manufactures.Methods With the potency determined as response value，the test was designed by the two dose method of antibiotic bioassay cup-plate method in the appendixⅪ A of Chinese Pharmacopoeia（edition 2010，part 2），then compared the antibacterial effect of Ceftriaxone Sodium Injection from different factories.Results As to Staphylococcus aureus，samples of A，B factories and samples of original research had the same antibacterial effect.As to Escherichia coli，the antibacterial effect was same between the samples of different factories and samples of original research.As to Klebsiella pneumoniae，the antibacterial effect was no difference between samples from different factories，while the effect of the original research sample was relatively stronger.Conclusion The method could be used for testing the antimicrobial potency of Ceftriaxone Sodium Injection from different manufacturers.

Ceftriaxone Sodium Injection；Antimicrobial potency；Biological assay；Cup-plate method

R927.1

A

2095-5375（2015）12-0711-003

郭新營，男，研究方向：藥品生產(chǎn)工藝研究，E-mail：guoxinying@reyoung.cn

王彥厚，男，主任藥師，碩士生導(dǎo)師，研究方向：藥物分析與質(zhì)量控制，Tel：0533-7868966，E-mail：wyhzb@163.com