H PLC測定止咳清肺口服液中橙皮苷的含量

張宇博　劉光斌

（酒鋼醫(yī)院藥學(xué)部，甘肅嘉峪關(guān)735100）

H PLC測定止咳清肺口服液中橙皮苷的含量

張宇博劉光斌

（酒鋼醫(yī)院藥學(xué)部，甘肅嘉峪關(guān)735100）

目的：建立止咳清肺口服液中橙皮苷的含量測定方法。方法：采用高效液相色譜法測定制劑中橙皮苷含量。色譜柱為Inertsil C18（150 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸（22∶78，v/v），流速為1.0 mL/min，檢測波長283 nm。結(jié)果：橙皮苷在0.8～9.6 μg（r=0.999 1）范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，平均回收率分別為99.9%（RSD=0.80%，n=9）。結(jié)論：本方法可用于止咳清肺口服液的質(zhì)量控制。

止咳清肺口服液；橙皮苷；高效液相色譜

止咳清肺口服液是在我院使用多年的經(jīng)驗(yàn)處方基礎(chǔ)上經(jīng)多年的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究和臨床應(yīng)用研究，根據(jù)現(xiàn)代制劑工藝制備的醫(yī)院制劑。主要由陳皮、茯苓、法半夏、桑葉、枇杷葉、川貝、前胡、甘草組成，具有化痰、止咳、宣肺之功效；用于痰邪阻滯、肺氣不宣。依據(jù)《中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則》［1］，采用高效液相色譜法（HPLC）測定制劑中陳皮的主要成分橙皮苷的含量，從而建立控制止咳清肺口服液質(zhì)量的含量測定方法。

1　儀器與材料

Agilent 1100高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；CP225型十萬分之一電子天平（德國賽多利斯公司）；Branson型超聲波清洗器（中國上海）。

橙皮苷對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院提供，供含量測定用，批號(hào)：110721-200613）；乙腈為色譜純，水為重蒸水，其余試劑為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：Inertsil C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸（22∶78）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：283 nm；柱溫：30℃。

2.2對(duì)照品溶液的制備

精密稱取橙皮苷對(duì)照品0.004 0 g，置于5 mL容量瓶中，加甲醇定溶至刻度，配制成濃度為0.80 mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.3供試品及陰性對(duì)照品溶液的制備

精密吸取本品2.0 mL于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，靜置30 min，取上清液過0.45 μm濾膜，作為供試品溶液。

取按處方比例及工藝制備的缺陳皮樣品，同供試品溶液制備方法制得陰性對(duì)照品溶液。

2.4專屬性試驗(yàn)

分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣分析，HPLC色譜圖見圖1。結(jié)果表明，供試品溶液在該色譜條件下分離度良好，陰性無干擾，理論塔板數(shù)＞3 000。

2.5線性關(guān)系考察

分別精密吸取對(duì)照品溶液50，100，200，300，400，500，600 μL于1 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，依次吸取上述溶液20 μL，進(jìn)行高效液相色譜分析，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，濃度（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，

Y=328 056X-2.358 72×106（r=0.999 1）。

表明橙皮苷在0.8～9.6 μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。標(biāo)準(zhǔn)曲線圖見圖2。

圖1　橙皮苷HPLC圖

圖2　橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.6精密度試驗(yàn)

精密吸取稀釋后的對(duì)照品溶液20 μL，重復(fù)進(jìn)樣，測得橙皮苷含量的RSD為0.86%（n=6）。結(jié)果見表1。

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液于0，2，4，6，8，10，24 h，分別精密吸取20 μL注入液相色譜儀，測得橙皮苷含量的RSD為1.36%，結(jié)果見表2，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8重復(fù)性試驗(yàn)

表1　精密度試驗(yàn)

表2　穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批號(hào)本品，精密吸取上清液2.0 mL，共6份，按“供試品溶液制備方法”制備，按上述色譜條件進(jìn)行測定，測得橙皮苷的平均含量為0.784 mg/mL，RSD為1.68%（n=6）。結(jié)果見表3。

2.9加樣回收率試驗(yàn)

精密量取1 mL已知含量的同一批供試品溶液，共9份，于10 mL容量瓶中，加入一定量的橙皮苷對(duì)照品溶液（橙皮苷濃度為0.303 3 mg/mL），按樣品測定項(xiàng)下所述方法測定，計(jì)算回收率，平均回收率為99.9%，RSD為0.80%。結(jié)果見表4。

2.10樣品含量測定

按“供試品溶液的制備”項(xiàng)下操作制備不同批號(hào)的樣品溶液各3份，按上述色譜條件進(jìn)行測定。

表3　重復(fù)性試驗(yàn)

測定結(jié)果見表5。

表4　加樣回收率試驗(yàn)

表5　止咳清肺口服液中橙皮苷的含量（mg/mL）

3　討論

止咳清肺口服液由二陳湯加味組成，方中君藥陳皮的主要化學(xué)成分為橙皮苷，本研究采用HPLC建立了止咳清肺口服液中橙皮苷的含量測定法。

《中國藥典》2010年版陳皮中橙皮苷測定流動(dòng)相為甲醇-醋酸-水（35∶4∶61）［1］，供試品溶液的制備需要用索氏提取器回流提取，提取過程比較繁瑣，容易造成操作誤差。止咳清肺口服液中橙皮苷的測定在藥典規(guī)定流動(dòng)相條件下分離度不能達(dá)到要求，參照有關(guān)文獻(xiàn)［2-3］，考察了甲醇-水、乙腈-水、乙腈-磷酸、乙腈-醋酸系統(tǒng)，結(jié)果表明以乙腈-0.1%磷酸（22∶78）為流動(dòng)相時(shí)，橙皮苷的分離度良好，峰形較理想。止咳清肺口服液經(jīng)甲醇稀釋、定容、微孔濾膜濾過后直接進(jìn)樣，無繁雜的提取過程，可減少操作過程中由于儀器、人員造成的系統(tǒng)誤差。

本研究對(duì)建立的檢測方法進(jìn)行驗(yàn)證，專屬性、重復(fù)性均良好，準(zhǔn)確度也較高。對(duì)多批次樣品進(jìn)行了測定，發(fā)現(xiàn)建立的檢測方法可很好地控制制劑的內(nèi)在質(zhì)量。本品3批樣品經(jīng)測定橙皮苷的平均含量為0.933 mg/mL，以該值的80%計(jì)，每毫升含陳皮以橙皮苷（C28H34O15）計(jì)，不得少于0.75 mg。

［1］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（一部）［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄ⅩⅤⅢA，176.

［2］崔永青，劉光斌，毛和平，等.高效液相色譜法測定和胃散中橙皮苷的含量［J］.航空航天醫(yī)藥，2010，21（4）：440-441.

［3］張捷，譚生建，王歡，等.高效液相色譜法測定小兒潤肺止咳口服液中橙皮苷和黃芩苷的含量［J］.藥物分析雜志，2010，30（8）：1451-1453.

Determination of Hesperidin Content in Zhike Qingfei Oral Liquid by HPLC

Zhang Yubo，Liu Guangbin
（Department of Pharmacy，Jiugang Hospital，Gansu Jiayuguan 735100，China）

Objective：To develop a method for determination of hesperidin content in zhike qingfei oral liquid. Methods：The hesperidin content in the oral liquid was determined by high performance liquid chromatography（HPLC）.Inertsil C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）column was used with acetonitrile-0.1%acetic acid（22∶78，v/v）as the mobile phase.The flow rate was 1.0 ml/min while the detection wavelength was 283 nm.Results：The linear range of hesperidin concentration was 0.8～9.6 μg（r=0.999 1）.The mean recovery rate of hesperidin was 99.9%（RSD=0.80%，n=9）.Conclusion：The method may be used for the quality control of Zhike Qingfei oral liquid.

Zhike Qingfei Oral Liquid；Hesperidin；High Performance Liquid Chromatography（HPLC）

10.3969/j.issn.1672-5433.2015.12.006

2015-07-24）

劉光斌，男，主任藥師。研究方向：臨床藥學(xué)、醫(yī)院藥學(xué)。通訊作者E-mail：jgyylgb@sina.com