卡馬拉素對HaCaT細胞體外增殖及對白細胞介素 17C、CCL20、NF-κB 表達的影響

馬怡瑩 魏志平 劉彥群

卡馬拉素對HaCaT細胞體外增殖及對白細胞介素 17C、CCL20、NF-κB 表達的影響

馬怡瑩 魏志平 劉彥群

目的 探討卡馬拉素對HaCaT細胞體外增殖及對白細胞介素17C（IL-17C）、趨化因子CCL20、NF-κB表達的影響。方法 用不同濃度卡馬拉素組（0.5、1.0、2.0、4.0 μmol/L）、含與4.0 μmol/L卡馬拉素等體積二甲基亞砜的RPMI 1640培養(yǎng)液（溶媒組）、RPMI 1640培養(yǎng)液（對照組）分別作用于HaCaT細胞。采用CCK8法檢測卡馬拉素作用于HaCaT細胞24、48、72 h對細胞體外增殖的影響；RT-PCR法檢測卡馬拉素對HaCaT細胞IL-17C和CCL20 mRNA表達的影響；Western印跡法檢測卡馬拉素對HaCaT細胞IL-17C、CCL20和NF-κB蛋白表達的影響。統(tǒng)計學(xué)處理采用重復(fù)測量的方差分析、單因素方差分析和Pearson相關(guān)分析。結(jié)果 各濃度組卡馬拉素對HaCaT細胞增殖的抑制作用有隨時間變化的趨勢（F=126.936，P＜0.05），藥物作用時間越長，抑制作用越強；HaCaT細胞增殖的抑制率也隨卡馬拉素濃度的增加而升高（F=838.308，P＜0.05）；不同濃度卡馬拉素組對HaCaT細胞體外增殖的抑制作用隨時間變化的趨勢不同，藥物濃度與時間存在交互作用（F=15.961，P＜0.05）。不同濃度卡馬拉素作用于HaCaT細胞48 h后，IL-17C mRNA及其蛋白、CCL20 mRNA及其蛋白、NF-κB蛋白表達量均隨卡馬拉素濃度的增加而不斷降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（F值分別為206.041、233.887、143.883、162.431、577.915，均P＜0.05）。結(jié)論 卡馬拉素可抑制HaCaT細胞的體外增殖，并可在mRNA和蛋白水平下調(diào)IL-17C、CCL20的表達，而兩者表達量的降低可能與NF-κB表達下調(diào)有關(guān)。

角蛋白細胞；細胞增殖；NF-κB；白細胞介素17；趨化因子CCL20；銀屑病；HaCaT細胞；卡馬拉素

作者單位：221002江蘇，徐州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院（馬怡瑩、魏志平）；江蘇省醫(yī)學(xué)會（劉彥群）

卡馬拉素（rottlerin）是從植物中提取的一種多酚類化合物［1］，在古印度藥典中可作為外用藥治療疥瘡、皰疹性皮膚病，具有抑制細胞增殖、促進細胞凋亡和調(diào)節(jié)多種炎癥性細胞因子表達的作用，并能強烈抑制NF-κB的表達。白細胞介素17C（IL-17C）是一種上皮細胞來源的IL-17家族成員，已證實其在角質(zhì)形成細胞（KC）中以自分泌方式高表達于銀屑病皮損中［2］，依拉西普等能快速緩解病情，同時IL-17C可在早期被顯著下調(diào)。在銀屑病皮損中趨化因子CCL20（CCL20）也呈高表達狀態(tài)，通過與表達于Th17細胞表面的特異性配體CCR6結(jié)合促進Th17細胞向皮損區(qū)定向趨化［3］。本實驗研究了卡馬拉素對HaCaT細胞體外增殖及對IL-17C、CCL20、NF-κB表達的影響，旨在探討卡馬拉素是否能夠成為一種治療銀屑病的潛在新型藥物及其可能的作用機制。

材料與方法

一、細胞與試劑

人永生化角質(zhì)形成細胞株（HaCaT細胞）由上海復(fù)祥生物科技有限公司提供。卡馬拉素為美國Santa Cruz公司產(chǎn)品，用二甲基亞砜（DMSO）配制成2×104μmol/L儲存液（DMSO≤1‰），-20℃避光保存，使用時用培養(yǎng)液稀釋至所需濃度。RPMI 1640培養(yǎng)基（美國Gibco公司），胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司），兔抗人IL-17C多克隆抗體、兔抗人CCL20多克隆抗體（北京博奧森生物技術(shù)有限公司），兔抗人NF-κB p65單克隆抗體（美國Cell Signaling公司），鼠抗人β肌動蛋白單克隆抗體、堿性磷酸酶標(biāo)記山羊抗兔IgG、馬抗小鼠IgG抗體（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司），BCA試劑盒（上海碧云天生物技術(shù)研究所）。RT-PCR引物設(shè)計合成于生工生物工程（上海）股份有限公司，RTPCR試劑盒［天根生化科技（北京）有限公司］。

二、HaCaT細胞培養(yǎng)與實驗分組

HaCaT細胞常規(guī)培養(yǎng)于含10%胎牛血清、100 U/ml青霉素、100 mg/L鏈霉素的RPMI 1640培養(yǎng)液中，37℃，5%CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細胞生長處于對數(shù)生長期時用胰酶消化后培養(yǎng)于無血清、無雙抗RPMI 1640培養(yǎng)液中，24 h后加入不同濃度卡馬拉素。預(yù)實驗中，36 h時IL-17C的表達量很低，48 h時目的條帶較亮，72 h時RNA和蛋白濃度均較低，參考相關(guān)文獻［4-5］，選擇IL-17C等因子的分泌高峰48 h時檢測各指標(biāo)。實驗分組如下：①對照組：RPMI 1640培養(yǎng)液；②溶媒組：含與4.0 μmol/L卡馬拉素等體積DMSO的RPMI 1640培養(yǎng)液；③0.5 μmol/L 卡馬拉素組；④1.0 μmol/L 卡馬拉素組；⑤2.0 μmol/L 卡馬拉素組；⑥4.0 μmol/L 卡馬拉素組。

三、CCK8法檢測卡馬拉素對HaCaT細胞體外增殖的抑制作用

取HaCaT細胞6×103個/ml接種于96孔培養(yǎng)板，每孔 100 μl，培養(yǎng) 24 h，細胞貼壁后，各實驗組按上述設(shè)計分別加入不同濃度的卡馬拉素稀釋液。每組設(shè)4個復(fù)孔，分別培養(yǎng)24、48、72 h后終止培養(yǎng)，棄去原培養(yǎng)基，將各實驗組所需濃度的培養(yǎng)液與CCK8 試劑 10∶1 混勻后，每孔加入 100 μl，孵育 3 h，酶標(biāo)儀測定450 nm波長處每孔的吸光度（A值），實驗重復(fù)3次，計算細胞增殖抑制率，抑制率 =（1－給藥組A值/對照組A值）×100%。

四、Western印跡法測定HaCaT細胞IL-17C、CCL20及NF-κB的表達

培養(yǎng)48 h后收集各組細胞，提取總蛋白，用BCA法檢測蛋白濃度，上樣80 μg電泳、轉(zhuǎn)膜及封閉，一抗孵育（兔抗人IL-17C、CCL20多克隆抗體滴度為1∶200，兔抗人NF-κB單克隆抗體為1∶1 000，鼠抗人β肌動蛋白單克隆抗體為1∶500），4℃過夜，二抗孵育（山羊抗兔IgG抗體滴度為1∶500，馬抗小鼠IgG抗體為1∶500）2 h，BCIP/NBT顯色液顯色，凝膠成像系統(tǒng)觀察結(jié)果，目的蛋白條帶IL-17C、CCL20、NF-κB與相應(yīng)內(nèi)參β肌動蛋白條帶的灰度值比值作為其蛋白水平的半定量指標(biāo)。

五、RT-PCR測定 HaCaT細胞 IL-17C、CCL20 mRNA的表達

各組細胞培養(yǎng)48 h后提取細胞總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，目的基因IL-17C上游引物：5′-CTTCCACACCGAGTTCATCC-3′，下游引物：5′-GAC AGGGAGCCAAGGTACAG-3′，擴增片段為327 bp。CCL20 上游引物：5′-GCGAATCAGAAGCAAGCAA C-3′，下游引物：5′-ACAAGTCCAGTGAGGCACAA-3′，擴增片段為354 bp。內(nèi)參β肌動蛋白上游引物：5′-TGACGTGGACATCCGCAAAG-3′，下游引物：5′-CT GGAAGGTGGACAGCGAGG-3′，擴增片段為 205 bp。采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將其逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA。PCR反應(yīng)體系為25 μl，擴增條件為：β肌動蛋白和CCL20：94℃預(yù)變性 3 min，94℃變性 30 s，57℃退火 30 s，72℃延伸50 s，共35個循環(huán)，最后72℃延伸5 min；IL-17C：94℃預(yù)變性 3 min，94℃變性 30 s，55℃退火30 s，72℃延伸45 s，共35個循環(huán)，最后72℃延伸5 min。PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳后，用凝膠成像系統(tǒng)掃描拍照，檢測各電泳條帶的灰度值，計算與β肌動蛋白比值，得到目的產(chǎn)物的相對含量。

六、統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進行分析，計量資料

結(jié) 果

一、卡馬拉素對HaCaT細胞體外增殖的影響

見圖1。培養(yǎng)24、48、72 h時，溶媒組對HaCaT細胞體外增殖的抑制率分別為0.84%±0.54%、1.07%±0.58%、1.20%±0.73%，與對照組（抑制率為0）相比，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），故可排除溶解藥物的DMSO對本實驗結(jié)果的影響。重復(fù)測量的方差分析結(jié)果顯示，各濃度組卡馬拉素對HaCaT細胞體外增殖均有抑制作用，各組對HaCaT細胞體外增殖的抑制作用在不同時間點有差異（F=126.936，P＜0.05），藥物作用時間越長，抑制作用越強；不同濃度組間HaCaT細胞體外增殖的抑制率比較也有差異（F=838.308，P＜ 0.05），卡馬拉素濃度越高，抑制作用越強；藥物濃度與時間之間存在交互效應(yīng)（F=15.961，P＜0.05）。各濃度卡馬拉素作用24 h就開始表現(xiàn)出對HaCaT細胞增殖的抑制作用，與溶媒組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），且隨著作用時間的延長呈現(xiàn)出逐漸上升的趨勢，24～48 h的抑制率較48～72 h上升的更快，故選擇48 h為后續(xù)實驗的時間點。

圖1 卡馬拉素對HaCaT細胞增殖的抑制率

表1 卡馬拉素對HaCaT細胞IL-17C、CCL20 mRNA及其蛋白表達以及NF-κB蛋白表達的影響（與β肌動蛋白比值，±s）

表1 卡馬拉素對HaCaT細胞IL-17C、CCL20 mRNA及其蛋白表達以及NF-κB蛋白表達的影響（與β肌動蛋白比值，±s）

注：n=3。a：與對照組相比，P ＞ 0.05；b：與溶媒組相比，P ＜ 0.05

組別 IL-17C CCL20 NF-κB蛋白mRNA 蛋白 mRNA 蛋白對照組 0.874±0.053 0.898±0.032 0.842±0.051 0.754±0.033 0.856±0.015溶媒組 0.884±0.028a 0.826±0.045a 0.837±0.054a 0.734±0.051a 0.829±0.009a 0.5 μmol/L卡馬拉素組 0.652±0.031b 0.642±0.041b 0.583±0.034b 0.532±0.042b 0.557±0.026b 1.0 μmol/L卡馬拉素組 0.503±0.020b 0.466±0.032b 0.450±0.025b 0.367±0.026b 0.433±0.023b 2.0 μmol/L卡馬拉素組 0.383±0.022b 0.285±0.023b 0.334±0.018b 0.250±0.027b 0.290±0.016b 4.0 μmol/L卡馬拉素組 0.271±0.017b 0.178±0.015b 0.227±0.024b 0.133±0.021b 0.188±0.025b F值 206.041 233.887 143.883 162.431 577.915 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

二、卡馬拉素對HaCaT細胞IL-17C mRNA及其蛋白表達的影響

見表1及圖2、3。不同濃度卡馬拉素作用于HaCaT細胞48 h后，IL-17C mRNA及其蛋白的表達量隨藥物濃度的增加不斷降低，各組IL-17C mRNA/β肌動蛋白mRNA灰度比比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=206.041，P＜ 0.05），且各組 IL-17C/β 肌動蛋白灰度比比較，差異也有統(tǒng)計學(xué)意義（F=233.887，P＜0.05）。q檢驗顯示，各濃度卡馬拉素組間以及卡馬拉素組與溶媒組間兩兩多重比較，IL-17C mRNA及其蛋白表達差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），而溶媒組與對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

三、卡馬拉素對HaCaT細胞CCL20 mRNA及其蛋白表達的影響

見表1及圖4、5。不同濃度卡馬拉素作用于HaCaT細胞48 h后，CCL20 mRNA及其蛋白的表達呈逐漸降低趨勢，各組 CCL20 mRNA/β肌動蛋白mRNA灰度比比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=143.883，P＜ 0.05），且各組 CCL20/β肌動蛋白灰度比比較，差異也有統(tǒng)計學(xué)意義（F=162.431，P＜0.05）。q檢驗顯示，各濃度卡馬拉素組間以及卡馬拉素組與溶媒組間兩兩多重比較，CCL20 mRNA及其蛋白表達差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而溶媒組與對照組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

四、卡馬拉素對HaCaT細胞NF-κB蛋白表達的影響

見表1、圖6。不同濃度卡馬拉素作用于HaCaT細胞48 h后，NF-κB蛋白的表達量均降低，各組NF-κB/β肌動蛋白灰度比比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=577.915，P＜0.05）。q檢驗顯示，各濃度卡馬拉素組間以及卡馬拉素組與溶媒組間兩兩多重比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而溶媒組與對照組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

五、HaCaT細胞 NF-κB 與 IL-17C、CCL20蛋白表達量以及IL-17C mRNA與CCL20 mRNA表達量的相關(guān)性分析

不同濃度卡馬拉素處理HaCaT細胞后，NF-κB與IL-17C、CCL20蛋白表達量均呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r分別為 0.986、0.990，均P＜ 0.05；IL-17C mRNA 與CCL20 mRNA表達量也呈正相關(guān)，r=0.992，P＜0.05。

圖2 卡馬拉素對HaCaT細胞IL-17C mRNA表達的影響 1：標(biāo)準(zhǔn)參照物；2：對照組；3：溶媒組；4 ～ 7：分別為 0.5、1.0、2.0、4.0 μmol/L卡馬拉素組

圖3 卡馬拉素對HaCaT細胞IL-17C蛋白表達的影響 1：對照組；2：溶媒組；3 ～ 6：分別為 0.5、1.0、2.0、4.0 μmol/L 卡馬拉素組

圖4 卡馬拉素對HaCaT細胞CCL20 mRNA表達的影響 1：標(biāo)準(zhǔn)參照物；2：對照組；3：溶媒組；4 ～ 7：分別為 0.5、1.0、2.0、4.0 μmol/L卡馬拉素組

圖5 卡馬拉素對HaCaT細胞CCL20蛋白表達的影響 1：對照組；2：溶媒組；3 ～ 6：分別為 0.5、1.0、2.0、4.0 μmol/L 卡馬拉素組

圖6 卡馬拉素對HaCaT細胞NF-κB蛋白表達的影響 1：對照組；2：溶媒組；3 ～ 6：分別為 0.5、1.0、2.0、4.0 μmol/L 卡馬拉素組

討 論

研究發(fā)現(xiàn)，卡馬拉素對人類多種腫瘤細胞（HCT-29、Hela、MCF-7等）均具有增殖抑制和細胞毒作用［6］，并發(fā)現(xiàn)卡馬拉素能夠顯著抑制某些癌細胞內(nèi) NF-κB 信號的活化，尤其是 NF-κB p65［1］，而該信號通路的活化在銀屑病的發(fā)生和發(fā)展過程中具有十分重要的作用。近年來研究表明，Th17細胞在銀屑病的發(fā)病機制中占有十分重要的地位，其分泌的細胞因子以IL-17家族研究最為廣泛（IL-17A和 IL-17F）。Johansen 等［7］首次在銀屑病皮損中發(fā)現(xiàn)了IL-17家族中另一細胞因子IL-17C，主要表達于KC，能夠與KC表面的特異性異二聚體受體IL-17RA/RE 結(jié)合，活化下游的信號通路［2］，上調(diào)KC促炎癥性細胞因子、趨化因子及抗菌肽的表達，與IL-17A和IL-17F所介導(dǎo)作用的十分類似，并能以自分泌的方式進一步表達［8］，是銀屑病發(fā)病機制中一種新的重要致病因子，很可能成為治療的靶點。臨床研究表明，依那西普（TNF-α抑制劑）治療后［9-10］，IL-17C 的表達量先于 IL-17A下降，臨床表現(xiàn)很快得到改善，而IL-17C的表達很可能受 NF-κB 信號通路的調(diào)節(jié)［11］。

本實驗采用CCK8法檢測到不同濃度卡馬拉素對HaCaT細胞體外增殖均具有顯著抑制作用，24～48 h間抑制率上升最快，4.0 μmol/L卡馬拉素作用72 h抑制率達到最高。這一結(jié)果與Valacchi等［5］研究結(jié)果相一致，其機制可能與通過降低基礎(chǔ)和由過氧化氫誘導(dǎo)的NF-κB活化，下調(diào)細胞增殖周期蛋白D1表達有關(guān)。Western印跡法檢測結(jié)果表明，卡馬拉素對HaCaT細胞NF-κB的表達具有顯著抑制作用，隨著卡馬拉素濃度的增加和作用時間的延長，HaCaT細胞NF-κB蛋白的表達量逐步下降。RT-PCR法和Western印跡法檢測結(jié)果表明，卡馬拉素可顯著下調(diào)HaCaT細胞IL-17C mRNA和蛋白的表達，且隨著卡馬拉素濃度增加和作用時間延長，抑制作用顯著增強。相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，NF-κB的下調(diào)與IL-17C的表達量減弱呈顯著正相關(guān)（r=0.986，P＜0.05）。推測卡馬拉素可以抑制NF-κB信號通路的活化，阻斷NF-κB向細胞核內(nèi)的轉(zhuǎn)移，從而阻止NF-κB的活化片段與核內(nèi)IL-17C啟動子的結(jié)合，使得IL-17C的表達量下降。

CCL20在銀屑病皮損中主要表達于KC，能與其特異性配體 CCR6相結(jié)合［3］，使 CCR6+的 Th17細胞直接趨化到銀屑病皮損區(qū)，繼而與其他細胞和細胞因子共同作用于KC，進一步促進CCL20、IL-17C的表達［12］。一方面在CCL20的作用下聚集更多Th17細胞到病灶處，另一方面IL-17C與其受體結(jié)合促進自身大量分泌，從而形成一種CCL20-Th17-IL-17C正反饋環(huán)路，這在維持銀屑病的持續(xù)中發(fā)揮著關(guān)鍵性作用。RT-PCR和Western印跡法檢測到不同濃度卡馬拉素均能在mRNA和蛋白水平上顯著下調(diào)CCL20表達。研究提示，CCL20的表達與NF-κB p65 信號密切相關(guān)［4］，而本研究結(jié)果也發(fā)現(xiàn)，兩者密切正相關(guān)性。卡馬拉素通過下調(diào)CCL20在KC的表達，減弱了發(fā)病關(guān)鍵性Th17細胞的定向趨化，進而減少了多種Th17細胞相關(guān)的致病性細胞因子的表達及與其他細胞之間的相互作用，阻斷這種趨化細胞-細胞因子-KC之間形成的反饋性通路，也可能是其發(fā)揮疾病治療作用的一種機制。

本研究結(jié)果表明，卡馬拉素能抑制HaCaT細胞體外增殖，抑制致病性信號通路NF-κB的活化和關(guān)鍵性細胞因子IL-17C和趨化因子CCL20的表達，很可能具備治療銀屑病的潛能。但IL-17C能否誘導(dǎo)KC表達CCL20，CCL20是在卡馬拉素下調(diào)NF-κB后表達下降還是在IL-17C表達降低后被下調(diào)，尚需進一步研究。

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復(fù)方甘草酸苷膠囊（甘樂）征文通知

皮炎濕疹與蕁麻疹是皮膚科常見病，病情常反復(fù)，復(fù)方甘草酸苷膠囊（甘樂）是治療該類皮膚病的有效藥物之一。為了更好地發(fā)揮甘樂在皮膚病治療中的作用，中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會皮膚性病專業(yè)委員會與北京凱因科技股份有限公司共同開展2015年度凱因甘樂有獎?wù)魑幕顒樱瑲g迎各級皮膚科醫(yī)師積極參與。

征文范圍：不同劑量復(fù)方甘草酸苷膠囊治療皮炎濕疹療效觀察；復(fù)方甘草酸苷治療急性蕁麻疹療效觀察。

活動內(nèi)容：本次征文活動將在2016年中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會皮膚性病專業(yè)委員會年會上進行評比。前3名將分別獲得3萬元、2萬元、1萬元臨床研究基金并頒發(fā)中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會皮膚性病專業(yè)委員會環(huán)境與職業(yè)性皮膚病學(xué)組研究基金及獲獎證書；優(yōu)秀獎4名，獲得5 000元獎勵；入圍獎10名，獲得1 000元獎勵。參加者請將論文電子版發(fā)至電子郵箱annlingchen@126.com，并注明“學(xué)會征文”。

論文提交截止日期：2015年12月30日。

北京凱因科技股份有限公司對本次活動擁有最終解釋權(quán)。

Effects of rottlerin onin vitroproliferation of and expressions of interleukin-17C,CCL20 and nuclear factor-κB in a human keratinocyte cell line HaCaT

Ma Yiying*,Wei Zhiping,Liu Yanqun.
*Affiliated Hospital of Xuzhou Medical College,Xuzhou 221002,Jiangsu,China

Wei Zhiping,Email:xzwzp1961@aliyun.com

Objective To investigate the effects of rottlerin onin vitroproliferation of and expressions of interleukin （IL）-17C,CCL20 chemokine,and nuclear factor （NF）-κB in cultured human HaCaT keratinocytes.Methods Some HaCaT cells were divided into several test groups treated with rottlerin at concentrations of 0.5,1.0,2.0 and 4.0 μmol/L,a solvent group treated with RPMI 1640 culture solution containing the same volume of dimethyl sulfoxide （DMSO）as that of 4.0 μmol/L rottlerin,and a control group treated with RPMI 1640 culture solution.Cell counting kit-8 （CCK8）assay was conducted to estimate the proliferative activity of HaCaT cells after 24-,48-and 72-hour culture,RT-PCR to determine the mRNA expressions of IL-17C and CCL20 after 48-hour culture,and Western blot to measure the protein expressions of IL-17C,CCL20 and NF-κB after 48-hour culture.Statistical analysis was carried out by using repeated-measures analysis of variance,one-way analysis of variance and Pearson correlation analysis with the SPSS16.0 software.Results Rottlerin showed an inhibitory effect on the proliferation of HaCaT cells,and the inhibitory effect increased over time（F=126.936,P＜0.05）and with the increase of rottlerin concentrations（F=838.308,P＜0.05）,with a significant interaction effect between rottlerin concentrations and treatment duration （F=15.961,P ＜ 0.05）.After 48-hour treatment,a significant decrease was observed in the mRNA and protein expressions of IL-17C（F=206.041,233.887,respectively,bothP＜0.05）and CCL20（F=143.883,162.431,respectively,bothP＜0.05）,as well as in the protein expression of NF-κB （F=577.915,P ＜ 0.05）in the test groups with the increase in rottlerin concentrations.Conclusions Rottlerin can inhibit the proliferation of HaCaT cellsin vitro,and decrease the mRNA and protein expressions of IL-17C and CCL20 likely by downregulating the protein expression of NF-κB.

Keratinocytes;Cell proliferation;NF-kappa B;Interleukin-17;Chemokine CCL20;Psoriasis;HaCaT cells;Rottlerin

10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2015.07.009

魏志平，Email:xzwzp1961@aliyun.com

2014-10-13）

（本文編輯：周良佳 顏艷）