散斑竹根七的組織培養與快速繁殖體系的建立

蔣天儀等

摘要：以散斑竹根七[Disporopsis aspera （Hua） Engl.ex Krause]的嫩莖段作為外植體，研究了其組織培養和快速繁殖體系。結果表明，外植體預處理后，經過75%的乙醇消毒20 s，再用0.1% HgCl2處理6 min的滅菌效果最好，啟動率達到78.40%，污染率僅為23.75%。初代培養最適宜的培養基是MS+ 6-BA 1.0 mg/L+2，4-D 0.01 mg/L+NAA 0.1 mg/L+IAA 1.0 mg/L；MS+ 6-BA 0.5 mg/L+KT 1.5 mg/L +NAA 0.2 mg/L+IBA 1.0 mg/L適用于繼代增殖培養，叢生芽的增殖系數達到6.10；適宜生根的培養基為NAA 1.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L+1/2MS，生根率達到96.13%。

關鍵詞：散斑竹根七[Disporopsis aspera （Hua） Engl.ex Krause]；組織培養；快速繁殖體系

中圖分類號：Q943.1 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2015）16-4070-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.16.062

Establishment of Rapid Propagation System for Disporopsis aspera （Hua） Engl.ex Krause by Tissue Culture

JIANG Tian-Yi1，TANG Min1，YANG Shu1，WANG Bo2，SHI Da-xing3

（1.Department of Agriculture and Horticulture，Chengdu Vocational College of Agricultural Science and Technology，Chengdu 611130， China； 2.Construction Engineering Department of Sichuan Engineering Technical College，Deyang 618000，Sichuan， China；

3.College of Forest Science， Sichuan Agricultural University，Yaan 625014， Sichuan， China）

Abstract： Tissue culture and rapid propagation system of Disporopsis aspera （Hua） Engl.ex Krause were studied by using the tender stem as explants.The results showed that after 75% alcohol disinfection for 20 s ，with another 0.1% HgCL2 for 6 min was the best disinfection method， the survival rate was 78.40% and the contamination rate was only 23.75%. The optimum initial medium was MS+ 6-BA 1.0 mg/L+2，4-D 0.01 mg/L+NAA 0.1 g/L+IAA 1.0 mg/L； MS+ 6-BA 0.5 mg/L+KT 1.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L+IBA 1.0 mg/L was the suitable medium for buds multiplication，tufted bud proliferation coefficient reached 6.10. The suitable rooting culture medium was NAA 1.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L+1/2MS，which gave a rooting rate as high as 96.13%.

Key words： Disporopsis aspera （Hua） Engl.ex Krause；tissue culture；rapid propagarion system

散斑竹根七[Disporopsis aspera （Hua） Engl.ex Krause]是百合科竹根七屬植物，為多年生草本[1]，其葉厚紙質，花黃綠色，具紫色斑點，花被鐘狀[2]，春季開花，花朵俯垂，枝形優美。該種原產于林下、陰蔽山谷或溪邊，是一種耐陰性很好的植物，可應用于風景林地下或建筑邊緣物作地被植物，也可盆栽觀賞[3]。地被植物在園林中的應用量一般很大，快速繁殖是滿足園林應用的一個方面，而工廠化生產是保證苗木整齊的另一個方面。目前，工廠化生產種苗的公司并不多，專業生產地被植物的更少[4，5]。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

散斑竹根七植株采自四川省雅安市的周邊山上，采回后種植于苗圃，選在5月取材，剪取3～4 cm的帶芽莖段作為外植體。

1.2 試驗方法

1.2.1 外植體表面滅菌 將外植體在加有洗衣粉的洗滌液中浸泡10 min，接著用自來水沖洗2～3次，然后放入75%乙醇中處理20 s后用無菌水沖洗3次，再用0.1% HgCl2溶液分別處理3、6和9 min，期間不停地振蕩，最后使用無菌水沖洗5次。每處理接種20個外植體，重復3次，滅菌后的外植體接入啟動培養基先暗培養7 d，再進行光照培養（12 h/d），35 d后統計啟動率和污染率。

1.2.2 初代培養 將處理好的帶芽嫩莖段作為外植體進行接種，基本培養基為MS。設置基本培養基MS，加入6-BA（0、0.5、1.0、2.0 mg/L）、2，4-D（0.01、0.05、0.1、0.5 mg/L）、NAA（0、0.05、0.1、0.5 mg/L）和IAA（ 0、0.1、0.5、1.0 mg/L），共16個處理。每處理接種10株外植體，重復3次，培養30 d觀察統計芽啟動率。endprint

1.2.3 繼代增殖培養 將初代培養獲得的莖段叢生芽切割為帶1個芽的小塊，轉接到繼代增殖培養基上，以MS為基本培養基，加入6-BA（0.5、1.0、2.0 mg/L）、KT（0.5、1.0、1.5 mg/L）、NAA（0.01、0.1、0.2 mg/L）和IBA（0.1、0.5、1.0 mg/L），共12個處理。每個處理接種20株外植體，重復3次，40 d后統計增殖系數及有效苗數。

1.2.4 生根培養 在增殖培養中選取高約3 cm的健壯叢生芽，切割成單苗，接種于生根培養基中，基本培養基為MS，加入NAA（0.1、0.5、1.0 mg/L）、IBA（0.05、0.1、0.5 mg/L）和MS培養基（MS、1/2MS、1/4MS），共9個處理。每個處理接種20株外植體，重復3次，40 d后觀察統計生根率。

2 結果與分析

2.1 不同表面滅菌方式對滅菌效果的影響

對散斑竹根七在不同滅菌時間處理中的啟動率和污染率進行顯著性差異SSR檢驗，結果見表1。從表1中可以看出，隨著0.1% HgCl2處理時間的增加，污染率逐漸降低，啟動率則表現為先上升后下降。處理3 min時，外植體啟動率較高，為76.39%，但污染率也高（48.61%）；處理6 min時啟動率最高，達到78.40%，污染率較低，為23.75%。而隨著滅菌處理的時間延長，污染率降至最低（14.29%），但啟動率僅有51.26%，為各處理中最低。綜合來看，采用0.1% HgCl2滅菌6 min是較為適宜的外植體表面滅菌時間。

2.2 不同激素組合對初代培養的影響

接種1周后，接種的莖段腋芽開始萌動，大約3～5 mm，30 d絕大部分的芽苗長至2 cm。從表2中可以看出，處理9（MS+ 6-BA 1.0 mg/L+2，4-D 0.01 mg/L+NAA 0.1 mg/L+IAA 1.0 mg/L）對散斑竹根七芽的誘導效果最好，啟動率達到85.20%，與其他處理差異極顯著。隨著6-BA濃度的升高，芽啟動率逐漸升高，當6-BA達到1.0 mg/L的時候，處理9、10、11、12的芽啟動率均達到70%以上。但當6-BA達到2.0 mg/L的時候，啟動率又開始下降。同時，經過方差分析發現，2，4-D對啟動誘導影響不顯著。

2.3 不同激素組合對繼代增殖培養的影響

從表3可以看出，對于叢生芽的誘導，3號處理效果最好，增殖系數達到6.10。各處理多數增殖系數都在4.0～5.0之間。經過方差分析發現，6-BA對繼代增殖的影響呈極顯著差異，NAA呈顯著差異。當6-BA濃度為最低水平，而NAA的水平為最高值時，增殖系數最大。

2.4 不同激素組合對生根培養的影響

從表4中可以看出，在生根培養中，7號處理（NAA 1.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L+1/2MS）的效果極顯著高于其他處理，生根率達到96.13%，其次是9號處理，生根率為91.8%，與其他處理的差異也達極顯著水平，經過方差分析發現，NAA對生根的影響極顯著。隨著NAA的濃度升高，生根率逐漸升高，而在NAA處于最高值水平時，1/2MS培養基的生根率最高，說明適當降低無機鹽的濃度有利于散斑竹根七瓶苗的生根培養。

3 小結與討論

帶芽莖段的初代誘導時，6-BA、NAA以及二者的配合使用促進了莖段芽的啟動。在一定范圍內，隨著6-BA濃度的升高，啟動率也升高，說明6-BA濃度過高對芽的誘導起抑制作用，同時還發現2，4-D與IBA對散斑竹根七芽的啟動誘導影響不顯著。本試驗中NAA對生根培養影響極顯著，且隨著NAA用量的減少生根率也呈下降的趨勢。這與許多研究中低濃度的NAA促進生根、使生根時間縮短的結論相反[4]。這說明不同植物對激素濃度反應不同，與植株本身體內激素種類和水平相關。在組織培養生根階段，一般認為低濃度的無機鹽對壯苗生根有利，而生根狀況的好壞直接影響著組培成功的最后一步。本試驗的生根培養中，采用了MS、1/2MS、1/4MS為基本培養基，其中1/2MS生根效果最好，生根率達96%。在之前的培養中，經過外源激素的使用和轉瓶繼代的培養，培養物本身積累了許多生長激素，低鹽的培養基有利于過多激素的釋放，防止植株徒長、黃化等。因此，在散斑竹根七的生根培養中1/2MS的培養基生根效果最佳。

參考文獻：

[1] 中國科學院中國植物志編輯委員會.中國植物志[M].北京：科學出版社，2013.

[2] 李明銀，郭 英，陳 娟，等.龍門山地區常見斑葉觀葉植物調查[J].江蘇農業科學，2011， 39 （2）：260-263.

[3] 袁桂美，王海洋，彭先濤.縉云山野生觀賞植物資源及其園林應用[J].南方農業（園林花卉版），2007（8）：26-29.

[4] 劉 敏.花卉組織培養與工廠化生產[M].北京：地質出版社，2002.45.

[5] 陳志萍，虞志軍，閔 瑋.幾種野生地被的引種栽培[J].北方園藝，2011（20）：92-94.endprint