RP-HPLC測(cè)定益血合劑（無(wú)糖型）中2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量

趙宏峰徐芳菲郭禹彤彌 宏*

（1 吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130012；2 吉林集安益盛藥業(yè)股份有限公司，吉林 集安 134200）

RP-HPLC測(cè)定益血合劑（無(wú)糖型）中2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量

趙宏峰1徐芳菲2郭禹彤1彌 宏1*

（1 吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130012；2 吉林集安益盛藥業(yè)股份有限公司，吉林 集安 134200）

目的 建立益血合劑（無(wú)糖型）中2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量測(cè)定的方法。方法 采用Apollo C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈-水（25∶75）為流動(dòng)相，流速1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)320 nm，柱溫為30 ℃。結(jié)果 2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在15 min內(nèi)達(dá)基線分離，線性關(guān)系良好（r≥0.9994），加樣回收率為97.18%。結(jié)論 該方法簡(jiǎn)便，快速，可作為益血合劑（無(wú)糖型）的質(zhì)量控制指標(biāo)。

益血合劑（無(wú)糖型）；2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷；高效液相色譜法；含量測(cè)定

“益血糖漿”由人參、當(dāng)歸和制何首烏組成，具有補(bǔ)氣養(yǎng)血的功效，用于氣血不足所致的神疲乏力、心悸氣短、失眠多夢(mèng)等癥的治療。在臨床應(yīng)用中因其具備的療效確切、服用方便以及為處方簡(jiǎn)單的純中藥制劑等優(yōu)勢(shì)，深受廣大患者的好評(píng)與喜愛(ài)。但其在實(shí)際應(yīng)用中也有一定的局限性，因原處方中使用的甜味劑為蔗糖，不適宜糖尿病等患者服用，我們通過(guò)實(shí)驗(yàn)將其改為木糖醇，擴(kuò)大了產(chǎn)品的適用人群。在改變處方中輔料的同時(shí)，我們建立了益血合劑（無(wú)糖型）新的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，采用高效液相色譜法測(cè)定了制劑中2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量，同時(shí)規(guī)定其含量限度，現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)方法及數(shù)據(jù)報(bào)道如下。

1　儀器與材料

日本島津LC-10ATVP溶液輸送泵；SPD-10AVP紫外檢測(cè)器；7725i手動(dòng)進(jìn)樣器；浙江大學(xué)N-2000色譜數(shù)據(jù)工作站；瑞士梅特勒AG245電子分析天平（十萬(wàn)分之一）；KQ3200型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

益血合劑（無(wú)糖型）（批號(hào)：120301，120302，120303，120401，120402，120403，120404，120501，120502，120503）由吉林集安益盛藥業(yè)股份有限責(zé)任公司提供。2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品（批號(hào)110844—201109，供含量測(cè)定用，含量94.7%），購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所。甲醇，乙腈均為色譜純，美國(guó)Fisher公司出品，水為蒸餾水，其余試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件：Apollo C185 μm（250 mm×4.6 mm）色譜柱，流動(dòng)相：乙腈-水（25∶75）；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：320 nm；柱溫：30 ℃。理論板數(shù)按2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

2.2對(duì)照品溶液的制備：取2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品0.22 mg的溶液，0.45 μm濾膜濾過(guò)，即得。

2.3供試品溶液的制備：精密量取本品10 mL，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇40 mL，稱定重量，超聲處理15 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，靜置，上清液濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.4線性關(guān)系考察：分別精密吸取2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品溶液4、7、10、13、19 μL注入液相色譜儀，測(cè)定，以對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在0.833～3.958 μg范圍內(nèi)，峰面積與二苯乙烯苷量呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為Y=71183.251+1778924.485X，相關(guān)系數(shù)r=0.9994。

2.5精密度試驗(yàn)：精密吸取供試品溶液10 μL，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次，依法檢測(cè)，結(jié)果2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰面積的RSD值為1.59%，表明儀器系統(tǒng)精密度良好。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液10 μL，分別于放置0，1，2，4，6，8 h時(shí)進(jìn)樣，依法檢測(cè)，結(jié)果2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰面積的RSD值為1.70%，表明供試品溶液在8 h內(nèi)能保持良好的穩(wěn)定性。

圖12，3，5，4′-四羥基二苯乙

Determination of 2，3，5，4′-tetrahydroxy-stilbene-2-O-β-D-glucoside in Free-sugar Yixue Oral Liquid by RP-HPLC

ZHAO Hong-feng1*, XU Fang-fei2, GUO Yu-tong1, MI Hong1*
(1 Jilin Academy of Chinese Medica, Changchun 130012, China; 2 Jilin Ji’an Yisheng Pharmaceutical Co. Ltd., Ji’an 134200, China)

Objective To determine the contents of 2，3，5，4′-tetrahydroxy-stilbene-2-O-β-D-glucoside in free-sugar Yixue oral liquid by HPLC. Method The chromatographic condition of HPLC were as follows：the Apollo C18column （150.0 mm×4.6 mm， 5 μm） was used， the mobile phase was Acetonitrilewater（25∶75）， the flow rate was 1.0 mL/min ， the detection wavelength was at 322 nm， and the column temperature was 30 ）. Result 2，3，5，4′-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside was separated at baseline within 15 min with good linearity （r≥0.9994). The average recovery was 97.18%. Conclusion The method was simple, fast and could control the quality of free-sugar Yixue oral liquid.

Free-sugar yixue oral liquid； 2，3，5，4′-tetrahydroxy-stilbene-2-O-β-D-glucoside； HPLC； Content assay

R9

B

1671-8194（2015）31-0031-02

吉林省科技廳科技成果轉(zhuǎn)化重點(diǎn)項(xiàng)目（20130303104YY）

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