清開靈注射液中梔子苷的含量測定研究

秦樹森　唐桂興

（1 桂林市婦女兒童醫院，廣西 桂林 541001；2 桂林醫學院藥學院，廣西 桂林 541001）

清開靈注射液中梔子苷的含量測定研究

秦樹森1唐桂興2

（1 桂林市婦女兒童醫院，廣西 桂林 541001；2 桂林醫學院藥學院，廣西 桂林 541001）

目的 建立高效液相色譜（HPLC）法測定清開靈注射液中梔子苷的含量。方法 來用LC-10A VP高效液相色譜儀，Kromasil C18色譜柱（250mm×4.6mm，5 μm），流動相以乙腈-水（體積比10∶90），流速為0.5mL/min。結果 進樣量與峰面積具有良好的線性關系（Y=3658.45X+2568.39，r=0.9998）且精密性（RSD=0.67%）、重現性（RSD=0.65%）、穩定性（RSD=1.23%）與回收率（平均回收率為100.01%，平均RSD值為1.67%）較好。結論 該方法可用于清開靈注射液中梔子苷的測定。

高效液相色譜；清開靈注射液；梔子苷；含量

清開靈注射液由8種中藥加工而成，包括膽酸、豬去氧膽酸、珍珠母、水牛角、梔子、板藍根、金銀花、黃芩苷，有清熱、解毒、涼血、醒神開竅的功能［1-2］。該藥常用于急、慢性肝炎、乙型肝炎、中風偏癱、上呼吸道感染等病的治療。膽酸經常采用薄層掃描法進行檢測，但其影響因素較多，誤差大，所以選用梔子為檢測對象，測定梔子中梔子苷的含量。大部分研究認為采用高效液相色譜法其測定效果較佳，所以本文也采用高效液相色譜（HPLC）法測定清開靈注射液中梔子苷的含量。

1　儀器與試藥

1.1儀器：LC-l0A VP高效液相色譜儀，SPD10AVP檢測器，LCsolution液相工作站均為島津公司產，Kromasil C18色譜柱，梔子苷對照品（中國藥品生物制品鑒定所提供，批號110749-20071），清開靈注射液（市場隨機抽取）。

1.2試藥：乙睛、甲醇為色譜純（Fisher公司），水為高純水，其他試劑為分析純。

2　方法與結果

2.1色譜條件與系統適用試驗：Kromasil C18色譜柱（250mm×4.6mm，5 μm），流動相以乙腈-水（體積比10∶90），流速為0.5mL/min；檢測波長238nm，柱溫25 ℃，進樣量10 μL，基線平穩，分離度超過1.5，理論板數按梔子苷峰計算應不小于3000。

2.2供試品溶液、陰性對照溶液與對照品溶液的制備：精密量取清開靈注射液20mL，置具塞錐形瓶，精密鍵入磷酸溶液1mL，搖勻，冷藏靜置1 h。然后把溶液取出，放置與實驗臺上，直到溶液溫度與室溫相平衡，在對其按照3000 r/min進行離心25min，精密取上層清液1mL置10mL容量瓶中，用甲醇定容，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即為供試品溶液。陰性對照溶液的制備是按處方比例，配置不含梔子，制成空白制劑，按照供試品溶液方法制備。精密稱取梔子苷對照品適量，加甲醇制成1mL含35 μg的溶液，即得對照品溶液。在2.1的色譜條件下，分別測定對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液的色譜圖，圖1～3。

圖1　梔子苷對照色譜圖

圖2　供應品

圖3　陰性對照品色譜圖

2.3線性關系的考察：精密量取梔子苷對照品儲備溶液300、500、700、800、1000、1500 μL，分別置于10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，上述對照品溶液分別進樣10 μL注入高效液相色譜儀，以Y表示峰面積與X表示梔子苷含量，然后對Y與X進行線性回歸，可得Y=3658.45X+2568.39，r=0.9998，梔子苷在1.05～5.25 μg/mL的區間上，進樣量與峰面積具有良好的線性關系。

2.4精密度試驗：精密取梔子苷對照品溶液進樣15 μL，按照相同的條件連續進樣6次，測定峰面積值，計算其RSD值為0.67%，這說明該方法精密度良好。

2.5重現性試驗：按供試品溶液的制備方法制備供試品，精密取同一批號的供試品溶液（批號20000912）進行平行測定6次，精密稱定，進樣15 μL，測定峰面積值，計算其RSD值為0.65%，說明該方法重復性良好。

2.6穩定性試驗：精密吸取同一批號的供試品溶液（批號000604-2），按照2.1的色譜條件，分別于配制后0、2、4、8、16、48 h進樣15 μL，分別測定其峰面積值，計算其RSD值為1.23%，說明供試品溶液在48 h內基本穩定。

2.7加樣回收率試驗：精密量取1mL的同一批供試品溶液（批號20000912）6份，分別精密加入濃度分別為梔子苷對照品溶液適量，按照2.1的色譜條件測定含量，6次測定的平均回收率為100.01%，平均RSD值為1.67%，該方法回收率良好。

2.8樣品測定：按照2.2方法制備樣品及對照品溶液，精密吸取樣品及對照品溶液各15 μL，注入高效液相色譜儀對四批樣品講行測定，結果見表1。

表1　樣品測定

3　討 論

在配制供試品溶液、陰性對照溶液與對照品溶液的過程中，筆者嘗試用70%乙醇、甲醇和50%甲醇等不同的溶劑來溶解梔子苷，經過比較可知甲醇的溶解效果最好，這與劉鋒，黃顯會，付美琴等人的研究不同，而與孫華芳、孫秀玉、王英姿、賀葵邦等人的研究相同［1-3］。在流動相的選擇上，我們嘗試了乙睛-水、乙睛-1%磷酸、甲醇-水等，結果顯示采用流動相乙睛-水（體積比10∶90）可為使色譜圖中梔子苷與其他雜質峰獲得滿意的分離。因此，我們選擇乙睛-水作為流動相。本方法對樣品預處理相對較為簡單，進樣量與峰面積具有良好的線性關系且精密性、重現性、穩定性與回收率較好，可有效控制清開靈注射液的測量質量，達到測量的標準，提高測量的精度。

［1］ 劉鋒，黃顯會，付美琴.高效液相色譜法測定復方清開靈注射液中梔子苷的含量［J］.華南農業大學學報，2010，4（31）：104-107.

［2］ 孫華芳.HPLC法測定清開靈片中梔子苷含量［J］.宜春學院學報，2009，6（31）：128-129.

［3］ 孫秀玉，王英姿，賀葵邦，等.HPLC法測定清開靈注射液中梔子苷的含量［J］.山東中醫藥大學學報，2012，4（36）：352-353.

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1671-8194（2015）09-0037-02