應用高效液相色譜法測定纈沙坦氨氯地平片有關物質

羅愛輝

摘要：目的：采用高效液相色譜（HPLC）法測定纈沙坦氨氯地平片的有關物質。方法：填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動相：三乙胺溶液（應用磷酸將PH值調至2.8）-甲醇（A）-乙腈（B），流速1.0ml/min，梯度洗脫，柱溫37℃，檢測波長為239nm，進樣量15μl。結果：其降解產物與主峰在該色譜條件下能夠有效分離。結論：應用高效液相色譜法可準確、簡便的測定纈沙坦氨氯地平片有關物質。

關鍵詞： 高效液相色譜；纈沙坦氨氯地平片；有關物質

纈沙坦氨氯地平片為復方制劑，結合我國生產的工藝，為控制藥品檢測質量，參考美國藥典對纈沙坦、氨氯地平有關物質的測定方法，對纈沙坦氨氯地平片的有關物質進行測定分析[1]。3個已知雜質為：纈沙坦的已知雜質（S） -N-（1-戊酰基）-N-[4-[2-（1H-四氮唑-5-基） 苯基]芐基]-L-纈氨酸芐酯（雜質C）和（S） -N-（ 1-丁酰基）-N-[4-[2-（ 1H-四氮唑-5-基） 苯基]芐基]-L-纈氨酸（ 雜質B）。氨氯地平的已知雜質3-乙基-5-甲基-2-[（ 2-氨基乙氧基） 甲基]-4-（ 2-氯苯基） -6-甲基吡啶-3，5-二羧酸酯（ 雜質D）[2]。本實驗采用高效液相色譜法測定纈沙坦氨氯地平片中的有關物質，取得了不錯的效果，該方法可靠、準確、簡便，可用于纈沙坦氨氯地平片有關物質的測定。

1 資料與方法

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀（生產廠家：美國安捷倫；型號：DE54627713）；電子分析天平（生產廠家：上海精科儀器廠；型號：BP61）；纈沙坦雜質C（生產廠家：USP；批號：H1J021）；纈沙坦雜質B（生產廠家：USP；批號：HOK089）；氨氯地平雜質D（生產廠家：USP；批號：FOI143）；苯磺酸氨氯地平（生產廠家：中國藥品生物制品檢定所；批號：100374-200903）；纈沙坦（生產廠家：中國藥品生物制品檢定所；批號：100651-200902）；水為雙蒸水；乙腈、甲醇為色譜純；其余試劑為分析純。

1.2方法

1.2.1 色譜條件

填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動相A：三乙胺10ml加H2O稀釋至1000ml，用磷酸調節PH值至2.8；流動相B：甲醇；流動相C：乙腈，梯度洗脫，檢測波長為239nm；柱溫37℃[3]。見表1

1.2.2 專屬性試驗

（1）光照試驗：取樣品適量，陽光下照射10小時，流動相溶解，搖勻，稀釋定容，抽濾后測定（2）高溫試驗：取樣品適量，加入適量流動相，100℃水浴4小時后冷卻，流動相稀釋定容，搖勻，抽濾后得高溫破壞樣品溶液（3）氧化試驗：取樣品適量，加10%雙氧水10ml，60℃加熱30min后冷卻，流動相稀釋定容，搖勻，抽濾后得氧化破壞樣品溶液（4）堿破壞試驗：取樣品適量，精密稱量，加入5ml氫氧化鈉溶液（1mol/L），60℃加熱25min，加入5ml鹽酸溶液（1mol/L）中和，加流動相稀釋定容，搖勻，抽濾后得堿破壞樣品溶液（5）酸破壞樣品：取樣品適量，精密稱量，加入5ml鹽酸溶液（1mol/L），60℃加熱20min，加入5ml氫氧化鈉溶液（1mol/L）中和，加流動相稀釋定容，搖勻，抽濾后得堿破壞樣品溶液[4]。另取纈沙坦原料樣品適量，氨氯地平原料樣品適量，空白輔料樣品適量進行實驗，方法同上。

1.2.3 定量限、檢測限的測定

取纈沙坦對照品、氨氯地平對照品、纈沙坦雜質C對照品、纈沙坦雜質B對照品、氨氯地平雜質D對照品適量，精密稱量，加入流動相溶解，稀釋定容，精密吸取10μl，分別注入液相色譜儀[5]。

1.2.4 線性關系的考察及校正因子的計算

取纈沙坦雜質C對照品、纈沙坦雜質B對照品、氨氯地平雜質D對照品適量，流動相配液，相應物質的測定條件下測定，線性回歸，橫坐標：濃度，縱坐標：峰面積A，記錄峰面積，繪制標準曲線，計算線性范圍及校正因子[6]。

1.2.5 溶液精密度、穩定性試驗

取自身對照溶液、供試品溶液、纈沙坦雜質C對照品溶液、纈沙坦雜質B對照品溶液及氨氯地平雜質D對照品溶液，對有關物質溶液精密度、穩定性進行測定[7]。

1.2.6 樣品測定 取三批供試樣品：精密稱量80mg、5mg，流動相稀釋溶解定容至50ml，搖勻，抽濾后作為供試品溶液；吸取1ml供試品溶液，流動相稀釋溶解定容至100ml，搖勻，抽濾后作為自身對照溶液；雜質對照品溶液，對三批溶液進行高效液相色譜儀分析，記錄色譜圖，計算總雜質、最大單個雜質及單個雜質[8]。

2 結果

2.1 專屬性試驗

結果顯示，各破壞試驗下，兩個主要成分的原料、制劑的降解物峰均可良好的分離于纈沙坦、氨氯地平的主峰，且未知雜質與已知雜質的分離度也符合要求。

2.2 定量限、檢測限的測定

分別記錄各儀器色譜圖，使用定量限：S/N約為10時的進樣量，使用檢測限：S/N約為3時的進樣量。見表2

2.3 溶液精密度、穩定性試驗

結果顯示，溶液在8小時內穩定，RSD=1.37%（n=6）；自身對照溶液、供試品溶液、纈沙坦雜質C對照品溶液、纈沙坦雜質C對照品溶液及氨氯地平雜質D對照品溶液進樣精密度良好，RSD分別為0.68%，1.46%，0.89%，0.78%，0.58%（n=6）。

2.4 樣品測定

對三批樣品的測定，結果如表3所示。

3 討論

纈沙坦氨氯地平片，生產廠家為瑞士諾華公司，其商品名為倍博特，規格為纈沙80mg、氨氯地平5mg，在美國于2007年批準上市，在中國于2009年批準進口并上市，主要用于抗高血壓病癥[9]。纈沙坦為血管緊張素ⅡAT1受體拮抗劑、氨氯地平為鈣離子拮抗劑，二者合用作為抗高血壓藥物，具有較好的治療效果。纈沙坦氨氯地平片合用療效比單獨使用療效顯著，且耐藥性、安全性也同樣優于單獨使用，擬開發的產品規格、劑型與市售品相同，具有很好的市場前景。所以，建立對于纈沙坦氨氯地平片有關物質的檢測方法來對纈沙坦氨氯地平片質量進行控制是十分重要[10]。

本文采用高效液相色譜法檢測纈沙坦氨氯地平片有關物質，可準確的檢測出纈沙坦氨氯地平片有關物質，對產品的質量加以監督。該測定方法操作簡便、準確性高、專屬性強，值得推廣應用。

參考文獻：

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[9] 吳迪，郭偉英.hplc色譜法同時測定纈沙坦氫氯噻嗪膠囊中纈沙坦和氫氯噻嗪的含量[J].中國藥房，2012，23（9）：846-847.

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