益氣復脈膠囊中五味子醇甲的含量測定

王軍花 段廣勛

摘要：目的：建立益氣復脈膠囊中五味子醇甲含量的反相高效液相色譜法（RP-HPLC）測定方法。方法：采用Shimadzu VP-ODS （150 mm×4.6 mm， 5 μm）為色譜柱，填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，流動相為甲醇-水（65∶35），檢測波長為 250 nm，流速為 1.0 mL/min，柱溫為 30 ℃，測定其含量。結果：五味子醇甲濃度在 10.60～31.80 μg/mL 范圍內，其直線回歸方程為 A=91 289 C+10 392（r=0.999 9），呈現良好的線性關系，平均回收率為 100.06%。 結論：本法操作簡便，分離效果與重現性較好，適用于益氣復脈膠囊中五味子醇甲的含量測定。

關鍵詞：HPLC；益氣復脈膠囊；五味子醇甲；質量控制

為控制益氣復脈膠囊的質量指標，筆者建立了益氣復脈膠囊中北五味子主要成分五味子醇甲的反相高效液相色譜法（RP-HPLC）含量測定方法，以有效控制該制劑的質量，為新藥開發提供試驗數據。

1.儀器和試劑

1.1儀器

SPD-10Avp檢測器（日本島津）、LC-10ATvp高壓泵（日本島津）、工作站：N2010色譜工作站（浙江大學智能信息工程研究院）、UV-1700型紫外分光光度計（日本島津）。

1.2試劑與用藥

乙醚、甲醇（色譜純）、超純水、五味子對照品（由中國藥品生物制品檢定所提供，批號：110857-200405供含量測定用）。

益氣復脈膠囊：海口奇力制藥有限公司生產。規格：每粒重0.37g，批號：120201。

2.方法與結果

2.1色譜條件的選擇

2.1.1檢測波長的選擇

取五味子醇甲對照品適量，加流動相溶解并稀釋制成一定濃度的溶液。取上述溶液，以流動相為空白，在200nm～400nm范圍內掃描，試驗結果表明五味子醇甲在250nm處附近有最大吸收。同時，參考中國藥典2005年版一部五味子藥材標準中五味子醇甲含量測定的檢測方法，擬選用250nm作為本品檢測波長的選擇。

2.1.2流動相的選擇

流動相1：甲醇-水=73：27；檢測波長為250nm。色譜柱為Shimadzu VP-ODS （150×4.6mm）（日本島津），進行檢測，結果五味子醇甲色譜峰的保留時間為4.399min，與相鄰雜峰的分離度為1.177〈1.5，拖尾因子為1.050，理論塔板數為3709.8>2500；試驗結果表明色譜條件不能滿足含量測定的要求，因此暫不選用該流動相體系。

流動相2：甲醇-水=65：35；檢測波長為250nm。色譜柱為Shimadzu VP-ODS （150×4.6mm）（日本島津），進行檢測，結果五味子醇甲色譜峰的保留時間為6.886min，分離度為5.278，拖尾因子為0.994，理論塔板數為3001.4>2500；試驗結果表明該色譜條件可滿足含量測定的要求，因此，決定選用該流動相體系。

2.2色譜條件與系統適用性試驗

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以Shimadzu VP-ODS （150×4.6mm）（日本島津）為色譜柱；流動相為甲醇-水=65：35；檢測波長為250nm，流速：1.0ml/min，柱溫：30℃。理論板數按五味子醇甲峰計應不低于2500，五味子醇甲峰與各其他成分峰的分離度應符合要求。

2.3溶劑空白試驗

取甲醇20ul注入液相色譜儀。試驗結果表明溶劑對本品含量測定無干擾。

2.4陰性樣品試驗

按處方工藝自制成不含五味子藥材的陰性樣品，同含量測定項下供試品溶液的制備方法，制備成陰性樣品溶液。取20ul注入液相色譜儀。試驗結果表明陰性樣品溶液對本品含量測定無干擾。

2.5線性關系試驗

精密稱取于60℃真空干燥至恒重的五味子醇甲對照品5.3mg，置于50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成母液。分別精密量取上述母液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml置于10ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度。取上述溶液各20ul注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結果見表1.1，如下圖：

表1.1 線性關系試驗結果

經線性回歸分析，在10.60～31.80μg/ml范圍內，直線方程Y=91289x+10392，r=0.9999，線性關系良好。

2.6進樣精密度試驗

取重復性試驗項下的一份供試液，連續進樣6針，記錄色譜圖。試驗測定結果見表1.2：

表1.2 進樣精密度測定結果

試驗結果表明，其RSD%為0.23%<2.0%，進樣精密度能滿足本品的含量測定要求。

2.7重復性試驗

試驗結果表明：其RSD%為1.61為<2.0%，本法測定結果重復性較好，符合含量測定的要求。

2.8溶液穩定性試驗

取重復性試驗項下的一份供試液，分別于0、2、4、6、8、12h取樣20ul注入液相色譜儀，記錄色譜圖。試驗結果表明，其RSD%為0.17%< 2.0%，說明樣品室溫條件下放置12h，溶液穩定。

2.9準確度試驗

精密稱取已知含量為0.638 mg/g的本品6份，每份約0.4g，分別置25ml容量瓶中，分別加入五味子醇甲對照品溶液 （0.053mg/ml） 5ml，按擬定含量測定項下供試品溶液處理方法處理，所得溶液作為供試品溶液。照含量測定項下的方法進行試驗，測定回收率。本品回收率為100.06%，其RSD%為1.16%<2.0%試驗結果表明本法準確度較好，符合含量測定的要求。

2.10含量測定方法的確定

2.10.1色譜條件與系統適用性試驗

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水=65：35為流動相；Shimadzu VP-ODS （150×4.6mm）（日本島津）為色譜柱；檢測波長為250nm；流速為1.0ml/min；柱溫為30℃。理論板數按五味子醇甲峰計應不低于2500[7]。

2.10.2對照品溶液的制備

精密稱取五味子醇甲對照品5.0mg，置50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度。精密吸取上述溶液5ml至25ml量瓶中，用甲醇定容，即可。（每1ml溶液中含五味子醇甲20.00μg）。

2.10.3供試品溶液的制備

取重量差異項下的本品，研細，精密稱定約0.8g，置25ml量瓶中，加水約20ml，超聲處理使完全溶散，放冷，加水稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液10ml，置分液漏斗中，用乙醚提取5次，每次15ml，合并醚液，用水洗滌2次，每次10ml，水洗滌液再用乙醚10ml回提一次，合并醚液，60℃～80℃減壓濃縮至干，殘渣加甲醇適量使溶解，并分次轉移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.10.4測定法

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.10.5含量測定結果

精密稱取樣品，照含量測定項下的方法測定，結果見下表1.6。

表1.6 五味子醇甲含量測定結果（n=2）

3討論和結論

益氣復脈膠囊是由紅參、麥冬、北五味子3味常用中藥組成的，是臨床治療冠心病的一種治療或輔助治療的有效藥。現代醫學藥理作用研究表明[2]：本處方中人參能改善心肌的代謝，增加心肌能量儲備，促進DNA和RNA的合成，提高機體耐缺氧能力，從而增強心肌收縮力，擴張外周血管。特別對衰竭或中毒的心臟作用更為明顯。并且紅參能夠提高血漿cAMP值，抑制血小板聚集，降低血漿中纖維蛋白原，清除微血栓，起到改善微循環的作用。人參還可抑制Na+-K+-ATP酶的活性，影響Na+-K+和Na+-Ca2+的交換，使Ca2+內流增加，從而增加心肌收縮力，降低血管阻力，還可清除自由基，增加心肌抗缺氧能力，并兼有抗心律失常作用，同時還具有調節免疫功能的反應。麥冬可穩定細胞膜，能夠提高機體的耐缺氧能力；擴張周圍血管，減輕心臟負荷，具有正性肌力的作用。五味子能增強機體對各種刺激的非特異性抵抗能力，三藥協同應用具有擴血管，增強冠脈血流量和心肌營養血流量，強心，改善心肌組織代謝，促進損傷心肌功能恢復的作用，可以從根本上改善心肌功能。實驗研究也證實[3]，益氣復脈膠囊對實驗性休克有保護、強心、升壓作用；并能改善微循環，提高心肌耐缺氧功能。

3.1討論

3.1.1檢測波長的選擇

本實驗檢測波長為250nm，是根據紫外測定。在250nm處，五味子醇甲具有最大吸收峰，選擇此處波長，所得結果最明顯，結果容易判斷。

3.1.2流動相的選擇

本文在選擇流動相方面對兩種流動相進行了嘗試。其中流動相1：甲醇-水（73：27），檢測的結果中保留時間、分離度、拖尾因子和理論塔板數等不滿足含量測定的要求，故不能使用流動相1；而流動相2所檢測的結果可滿足含量測定要求，因此，決定選用該流動相體系。

3.2結論

經過線性關系、精密度、重復性、穩定性、準確度等試驗，證明HPLC法操作簡便、準確、快速，是測定益氣復脈膠囊中北五味子的五味子醇甲的含量的理想方法。

參考文獻：

[1] 楊曉敏. 冠心病心絞痛中醫藥治療進展. 臨床合理用藥，2013；6（8）：1

[2] 周軍.生脈注射液治療氣陰兩虛型冠心病心絞痛 60 例.中國中醫藥現代遠程教育，2013；11（3）：28～29

[3] 劉小娟，蘇丹，路秀云，等. 生脈膠囊的臨床應用研究進展.現代中西醫結合雜志，1010；19（19）：2468