農藥殘留的色譜分析法應用

黃金洲　王利榮　譚晶

【摘要】：近年來，由于食品安全問題頻頻發生，所以人們更加關注農藥殘留對于人體的身心健康和環境的危害。本文綜述了目前國內的測試農藥殘留色譜分析方法，如氣相色譜法（GC）、液相色譜法（LC）、氣相色譜-質譜連用（GC-MS）以及部分新興的色譜分析方法，如毛細血管電色譜法凝、膠滲透色譜法、免疫親和色譜法等等，對其進行研究和展開介紹。

【關鍵詞】：農藥殘留；色譜分析方法；新興色譜分析法

1 引言

農藥殘留是指某一種農藥由于具有強烈的化學穩定性，當使用一段時間以后很難自我分解，仍有部分殘余摻雜在土壤、作物及環境中。這些殘留在農作物中的農藥在食物鏈中具有極為強烈的富集作用，可以在人類和動物機體內積存下來從而致使他們慢性中毒，嚴重威脅著人類的食品安全，這個問題已成為全世界關注的核心。為了打擊和限制農藥的大量使用，維護人民的財產，全世界的政府制定了許多相關規定。因此，研究農藥殘留分析檢測，對于保障人民生活利益具有很大的幫助。

目前，農藥殘留測試方法有很多種，色譜技術尤為的重要。因為色譜技術擁有相當高的分離效率、應用范圍較為廣泛、分析農殘速度較快、使用添加樣品用量較少，這個優點使其在多種基體中的樣品獲得了較為廣泛的應用。

2 氣相色譜法（GC）

在2O世紀中氣相色譜被用來做分析，60年代開始，此方法被用來測試農藥的殘留量。因為色譜技術擁有相當高的分離效率、應用范圍廣、分析農殘速度較快、使用樣品用量少。因此其在檢測分離氣體與易揮發或易轉化為易揮發的液體及固體樣品起到了很大的作用。目前該方法現在已經成了農藥殘留分析中最普遍也是最重要的方法。與此同時，目前用于農藥殘留檢測的檢測器有捕獲電子的檢測器、捕獲檢微池電子的檢測器、通過檢驗火焰光度的檢測器（FPD）、檢測脈沖火焰的光度檢測器、檢測氮磷元素的檢測器等等。

謝文（2005）在測定茶葉中的有機磷酸的實驗中，分別對樣品的凈化方法進行相應的研究，將農藥的殘留利用乙氰提純，將活性炭與硅膠混合成小柱進行凈化，利用擁有火焰光度檢測器的氣相色譜儀將樣品進行測定，分析結果的特性，發現具有重現性、良好的精密度，較少的干擾雜質。蒜苗、大蒜、姜等含硫蔬菜在進行切碎的同時其內的活性酶會釋放出硫化物，這些所釋放出來的硫化物不容易分解，與此同時在氣相色譜電子捕獲檢測器（GC-ECD）上能夠產生很強烈的反應，會出現假陽性，造成誤判。

3 氣相色譜-質譜聯用法（GC-MC）

氣相色譜一質譜聯用儀（GC—MS）不僅擁有氣相色譜和質譜的各種優點，同時還完善了它們各自的缺點，因此擁有著很高的靈敏度、分析樣品速度快、鑒別樣品能力強等優點，他可以同步的進行待測樣品的分離與鑒定，因此在當前的農藥檢測中運用廣泛。鄭孝華（2004）利用微波輔助萃取和液液微萃取技術讓二者相結合，充分利用氣相色譜一質譜分析技術，開創了了一種便捷、應用方便、回收率較高的蔬菜中多種擬除蟲菊酯殘留的檢測技術。通過基體標準加入回收實驗，并加入其他9種菊酯的l5ng/g的加樣能夠看出其回收率均在80% 以上，并且在國際標準要求的最大殘留限量中可以看出良好的線性關系，這樣能夠使蔬菜、水果中的農殘達到達標水準。陳長弓等（2006）利用GCMS測定方法測定了麝香保心丸中的異龍腦、龍腦苯甲酸芐酯。將正己烷作為相應的溶劑，利用氣相色譜-質譜聯用法選擇性離子檢測（SIM）方式對其中的麝香保心丸中異龍腦、龍腦、苯甲酸芐酯進行含量的測定。DB5（0.1μm*0.25mm*30m）石英毛細管柱；85-265℃的程序升溫；同時選擇m/z95為龍腦、異龍腦作為相應的檢測離子，m/z212為苯甲酸芐酯作為相應的檢測離子。結果顯示龍腦、異龍腦、苯甲酸芐酯的線性范圍分別為0.02-20.00μm/ml（r=0.99993）、0.024-24.00μm/ml（r=0.9990）、0.050-50.00μm/ml（r=0.9992）。平均回收率為97.00；異龍腦96.30；苯甲酸芐酯98.20。說明該方法快速、準確、有效，可用于麝香保心丸的質量控制。

4 高效液相色譜法（HPLC）及液相色譜一質譜聯用法（LC—MS）

當前，在農藥殘留的檢測與分析中，高效液相色譜法已經慢慢成為一種主要的分析手段，它擁有較高的分離效率、分析速度快、測試的靈敏度高與應用范圍廣的優點，尤其適合于非揮發性、大分子、強極性和熱穩定性差的農藥的分離分析。楊容（2004）等為了測定食物中的異丙威和溴氰菊酯其利用基質固相分散技術和高效液相色譜法進行分析表征，測得異丙威檢測限為1.2ng/g，回收率大約為89.11% ，溴氰菊酯檢測限約為2.5ng/g，回收率大約為83.92% 。陳珠靈（2005）等為了對水果中甲基對硫磷、乙基對硫磷、甲拌磷的有效測定其采用了高效液相色譜法，利用shim—pack和VP—ODS作為分離柱，流動相為甲醇：V水，=85：15，其紫外檢測波長通常為250nm，利用此方法所測得的多種有機磷在0.02～2.Oμg/L范圍內具有著很好的線性關系，并且檢出限達（1.0—5.0）μg/L，回收率在97.44%～ 101.22% 。利用SPE與HPLC來分析農藥殘留在當前的形勢下已經成為了一中趨勢，SPE具有著單一萃取方法所不能替代的優點。

因為HPLC具有一定的選擇性，液相色譜儀就會在測試樣品中有著一定的局限性。考慮到HPLC高靈敏度的眾多優點，當前最熱門的檢測方法是使用液質聯用方法，此方法中質譜檢測器起到了關鍵作用。

5 新興起的色譜方法

近年，色譜技術的發展尤為迅猛，大量新起興的色譜技術在生物、醫藥、化工等領域中已有較多應用變性高效液相色譜、高速逆流色譜、全二維氣相色譜質譜等：國內農藥殘留的色譜分析法研究進展把物相色譜和質譜以及其串聯質譜并用、超流體色譜等。

毛細管電色譜（CEC）是一種當代新發展的微柱電分離技術，它是石英毛細管中填充高效的液相色譜，利用高壓電源。這種分離模式包含了毛細管電泳和HPLC的各自的優點，使其擁有了良好的選擇性和分離柱效高等優點，常用于手性化合物的拆分，近幾年開始用于農藥分離。

免疫親和色譜是指利用抗體或者與抗體相關的材料作為固定相的色譜。抗體對抗原性物質的選擇結合，使該技術越來越多地應用于生物物質以及非生物物質的分離、純化和分析。與HPLC結合的免疫親和和色譜稱為高效免疫親和色譜。將待測樣品通過色譜柱，其中待測抗原以及類似物與固定的抗體結合，其他樣品基質由于不與固定相結合而被除去。這樣，結合的待測物質被洗脫以后利用在線或非在線的方法直接測定。測定方法一般采用紫外-可見吸收光譜法和熒光光譜法等。與傳統的免疫分析相比，該技術具有操作簡單、分析快速、精密度高且可以實現自動分析等的優點。但是，采用該方法時需要選擇合適的抗體固定方式，也就是說在洗脫待測抗原時應保證固定的抗體不被解離下來。一般來講，如果用蛋白A或蛋白G作為抗體支持擔體，由于抗體與它們之間是通過弱的吸附作用相結合，因此這種固定方式的抗體在待測物洗脫或柱子再生時容易流失。比較好的抗體固定方法是通過共價結合的方式將抗體與支持擔體連接，或首先將蛋白A或蛋白G固定化，然后通過交聯的方法將抗體共價結合到蛋白A或蛋白G上，另外一種常用方法是將生物素化的抗體與固定的親和素結合。

6 展望

近些年來，在農藥的使用已經變成了復合農藥的利用，因此，在農藥殘留的檢測當中也變得更加嚴格。從而導致色譜技術與其他高效的技術進行聯合應用。這對我國的農藥殘留檢測提出了更高的要求，所以我國色譜技術必將向著靈活、可靠、多用型、環保等許多性能上發展。

【參考文獻】

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