HPLC—ELSD法測定香菊片中黃芪甲苷的含量

魏紅立 劉俊霞 呂勤芝

摘要 [目的]建立了采用蒸發光散射檢測器測定香菊片中黃芪甲苷含量的高效液相色譜法。[方法]色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（250 mm×4.6 mm，5 μm）。流動相為乙腈∶水（32∶68），蒸發光散射檢測器。[結果]以峰面積積分值的常用對數（X）對進樣量的常用對數（Y）線性回歸方程為：Y=1.334 6X+5.929 3（r=0.997 7），線性范圍為0.516～10.320 μg，回收率為91.0%，RSD為1.8%。[結論]該方法操作簡便、測定結果準確、重復性好，可用于香菊片中黃芪甲苷的含量測定。

關鍵詞 高效液相色譜法；蒸發光散射檢測器；香菊片；黃芪甲苷；含量

中圖分類號 S567 文獻標識碼

A 文章編號 05176611（2015）34-144-02

香菊片執行國家食品藥品監督管理局標準（試行）YBZ12122004，由化香樹果序（除去種子）、夏枯草、野菊花、生黃芪、辛夷、防風、白芷、甘草、川芎水煎煮提取加工制成[1]，具有辛散祛風、清熱通竅，用于治療急、慢性鼻竇炎、鼻炎[2-3]。香菊片質量標準中黃芪甲苷含量測定方法為薄層掃描法，文獻報道中有關黃芪甲苷的含量測定方法為高效液相色譜法[4-6]，但采用高效液相色譜法測定香菊片中黃芪甲苷含量未見報道。筆者在此建立了采用蒸發光散射檢測器測定香菊片中黃芪甲苷含量的高效液相色譜法。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要儀器。高效液相色譜儀（Waters e2695）、2424蒸發光散射檢測器。

1.1.2 試藥和試劑。黃芪甲苷對照品（110781-200613）購于中國藥品生物制品鑒定研究院，乙腈為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。香菊片（規格：每片重0.32 g）由陜西白云制藥有限公司生產（批號130504）。

1.2 方法

1.2.1 對照品溶液制備。取黃芪甲苷對照品適量，精密稱定，置25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成含黃芪甲苷0.5 mg/ml的對照品溶液。

1.2.2 供試品溶液制備。取香菊片30片，除去包衣，精密稱定，研細，精密稱取6 g，加甲醇30 ml置水浴上加熱回流1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20 ml使溶解，用氯仿提取3次，每次20 ml，棄去氯仿液，水液用水飽和的正丁醇提取4次，每次15 ml，合并正丁醇液，用1%氫氧化鈉溶液洗滌3次，每次15 ml，棄去堿液。正丁醇液用水洗至中性，蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉移至5 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過濾，取續濾液作為供試品溶液。

1.2.3 陰性對照溶液的制備。按香菊片處方比例稱取適量除生黃芪的其余藥味，按香菊片的前處理和制劑生產工藝制成缺生黃芪的陰性對照品，按照“1.2.2”方法制成缺生黃芪的陰性對照溶液。

1.2.4 色譜條件。色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（250 mm×4.6 mm，5 μm）。流動相為乙腈∶水（32∶68），蒸發光散射檢測器。

1.2.5 方法學考察。

1.2.5.1 專屬性。在“1.2.4”色譜條件下，分別取對照品溶液、黃芪甲苷陰性對照溶液和香菊片供試品溶液各10 μl，分別進樣，記錄色譜圖，考察方法專屬性。

1.2.5.2 線性關系考察。分別精密吸取對照品溶液1、2、5、10、15、20 μl，按“1.2.4”色譜條件進行測定，以峰面積積分值的常用對數為縱坐標、黃芪甲苷量的常用對數為橫坐標繪制標準曲線，計算回歸方程。

1.2.5.3 穩定性試驗。取同一供試品溶液，在放置0、1、2、4、8、12 h后精密吸取10 μl進樣，測定峰面積值，計算RSD。

1.2.5.4 精密度試驗。取對照品溶液重復進樣6次，按“1.2.4”色譜條件測定黃芪甲苷的峰面積，計算RSD。

1.2.5.5 重復性試驗。取同一個批號樣品，按“1.2.2”方法制備6份供試品溶液，分別測定峰面積，計算RSD。

1.2.5.6 加樣回收試驗。取已知含有量（黃芪甲苷0.306 mg/g）的同一批樣品（批號130504）適量，研細，取約4 g，精密稱定，分別精密加入黃芪甲苷對照品溶液2 ml。按照“1.2.2”制備加標樣供試液。精密吸取加標樣供試液10 μl，按照上述測定方法測定其峰面積，計算回收率和RSD。

1.2.6 樣品含量的測定。取生產廠家為陜西白云制藥有限公司批號為130504的樣品，按“1.2.5.2”方法對樣品進行含量測定，通過標準曲線計算香菊片中黃芪甲苷的含量。

2 結果與分析

2.1 方法學考察

2.1.1 專屬性。圖1表明，在“1.2.5.1”條件下樣品色譜圖中與黃芪甲苷對照品色譜圖相同的保留時間（約16 min）處有吸收峰，而陰性對照品溶液色譜圖在相同保留時間處未顯吸收峰，說明樣品溶液中的其他成分不影響主成分黃芪甲苷的測定，該方法的專屬性良好。

2.1.2 線性關系的考察。按照“1.2.5.2”方法操作，計算得回歸方程Y=1.334 6X+5.929 3（r=0.997 7），表明黃芪甲苷在0.516～10.320 μg范圍內進樣量與峰面積線性關系良好。

2.1.3 穩定性試驗。按照“1.2.5.3”方法操作，計算得出峰面積積分值的RSD為1.7%，表明供試品溶液在12 h內基本穩定。

2.1.4 精密度試驗。按“1.2.5.4”方法操作，計算得出峰面積積分值的RSD為1.9%，表明在此試驗條件下精密度良好。

2.1.5 重復性試驗。按照“1.2.5.5”方法操作，計算含量的RSD為1.8%，表明該方法具有較好的重復性。

2.1.6 加樣回收試驗。由表1可見，平均回收率為91.0%，RSD為1.8%，表明該方法準確、可靠，可用于香菊片中黃芪甲苷的含量測定。

2.2 樣品含量測定 按“1.2.6”方法進行含量測定，結果測得黃芪甲苷的含量為0.306 mg/g，而按其現行標準國家食品藥品監督管理局標準（試行）YBZ12122004檢驗，含量測定結果為0.312 mg/g，RSD為1.4%。表明該方法可行。

3 結論與討論

生黃芪為方中主要藥物，黃芪甲苷是黃芪的主要成分[1]。該試驗采用HPLC-ELSD法代替薄層掃描法測定黃芪甲苷的含量，結果表明，以峰面積積分值的常用對數（X）對進樣量的常用對數（Y）線性回歸方程為：Y=1.334 6X+5.929 3（r=0.997 7），線性范圍為0.516～10.320 μg，回收率為91.0%，RSD為1.8%。該方法操作簡便、測定結果準確、重復性好，克服了薄層掃描操作繁瑣、誤差較大的缺點，可用于香菊片中黃芪甲苷的含量測定，為提高完善該制劑質量標準提供重要依據。

參考文獻

[1]

陜西白云制藥有限公司.國家食品藥品監督管理局標準（試行）.香菊片：YBZ12122004[S].陜西白云制藥有限公司，2014.

[2] 劉宇，龔漢明，葉吉明.香菊片對NIH小鼠抗炎、鎮痛作用的實驗研究[J].陜西中醫，2006（5）：634-635，641.