膽汁內外引流術對梗阻性黃疸大鼠肝臟TSGF和CA19-9表達的影響

高　新　張吉水　姬漢書　郭忠建　王文龍　劉雅剛

膽汁內外引流術對梗阻性黃疸大鼠肝臟TSGF和CA19-9表達的影響

高新張吉水★姬漢書郭忠建王文龍劉雅剛

目的 探討膽汁內外引流術對梗阻性黃疸（OJ）大鼠肝臟腫瘤特異性生長因子（TSGF）和糖類腫瘤相關抗原（CA 19-9）表達的影響。方法 采用改良方法制備OJ、膽汁內引流組（ID）、膽汁外引流組（ED）和假手術組（SH）共120只SD大鼠模型，采用快速檢測試劑盒檢測大鼠肝臟TSGF和CA 19-9水平，采用t檢驗、關聯性分析等比較組間差異及其生物學意義。結果 SH組的TB、ALT、AST水平最低，ID次之，ED及OJ組的TB、ALT、AST水平均高于SH、ID組，差異均有統計學意義（P＜0.05）；SH組的ALB最高，ID次之，ED組再次，OJ組最低（P＜0.05）；SH組的TSGF及CA 19-9水平最低，ID次之，ED及OJ組最高，差異均有統計學意義（P＜0.05）；TSGF及CA 19-9與TB呈正相關關系，與ALB呈負相關關系（P＜0.05）。結論 膽汁內外引流術可有效緩解梗阻性黃疸大鼠的膽汁淤積狀況，明顯改善大鼠的肝功能，降低由此誘發的腫瘤危險性；相同的條件下，膽汁內引流效果更佳。

膽汁內外引流術 腫瘤特異性生長因子（TSGF） 糖類腫瘤相關抗原（CA 19-9）梗阻性黃疸

梗阻性黃疸（Obstructive Jaundice，OJ）多由膽管結石、膽管炎、膽管腫瘤、胰腺腫瘤等導致，又名外科性黃疸［1～3］。膽汁內外引流術是目前臨床上常用的治療OJ的外科手術治療。腫瘤特異性生長因子（TumorSupplied Group of Factors，TSGF）由于對惡性腫瘤血管增生起重要作用而對非惡性腫瘤血管增生無明顯關系，因此，TSGF對惡性腫瘤具有高度特異性（95%）和靈敏度（85%）。CA 19-9為糖類腫瘤相關抗原，在消化道腫瘤組織中，其陽性檢出率較高。近年來，臨床上常用TSGF、CA 19-9水平作為判斷OJ嚴重程度的判斷指標。本研究于2013年2月至9月探討對OJ大鼠模型實施膽汁內外引流術后，其肝臟組織中TSGF及CA 19-9的表達水平及其臨床意義，為人OJ的臨床治療提供參考。

1　材料及方法

1.1主要儀器及試劑 EG1120型石蠟包埋機（LEICA，美國）、生物組織自動脫水機（浙江省金華市科迪儀器設備有限公司）、輪轉式切片機（LEICA，美國）、顯微攝像及圖像分析系統（OLYMPUS，德國）、10%福爾馬林溶液、DAB顯色試劑盒、蘇木素（北京中杉金橋生物技術有限公司）、0.01M枸櫞酸鹽、0.01M磷酸鹽、3%過氧化氫溶液、二甲苯、丙酮（北京化學試劑公司）。1.2 實驗動物 成年健康SD雄性大鼠120只，體重290～360g，購于河北醫科大學動物實驗中心，自由飲食飲水，飼養環境溫度為15～20℃。采用單純隨機化的方法將120只SD大鼠分為4組，分別為OJ組、膽汁內引流組（ID）、膽汁外引流組（ED）和假手術組（SH），各30只［4］。

1.3測量指標 （1）生化指標：采用美國AU5800全自動生化分析儀檢測四組標本的血清總膽紅素（TB）、丙氨酸轉氨酶（ALT）、天冬氨酸轉氨酶（AST）等指標。（2）TSGF及CA19-9檢測：采用TSGF快速檢測試劑盒（北京方程生物科技有限公司）生化比色法測定血清TSGF，嚴格按說明書要求操作。評判標準：TSGF值≥64 U/ml為陽性，TSGF值＜64U/ml為陰性。采用CA 19-9快速檢測試劑盒（杭州華得森生物技術有限公司）放射免疫分析法測定血清CA 19-9，嚴格按說明書要求操作。評判標準：CA 19-9值≥37U/ml為陽性，＜37U/ml為陰性。

1.4血液標本采集與保存 動物模型制備成功后，麻醉處死大鼠，開胸心臟穿刺抽取靜脈血6ml，不加抗凝劑，室溫靜置10min，4℃、3000 rpm離心15 min，分離上層血清，置-70℃保存備用。OJ、SH組于術后7d取血液標本；ED、ID于二次手術后7d取血液標本。對于中途死亡的大鼠，死亡后0.5h內取血液標本。

1.5統計學分析 采用SPSS17.0 統計軟件。計量資料以（±s）表示，采用t檢驗，不同時間點的比較采用重復測量的方差分析進行比較；計數資料采用構成比描述，采用χ2檢驗； P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1四組大鼠基本情況 OJ組：食欲、食量下降，活動明顯減少，毛發發暗，黃染更為嚴重，糞便成白色，尿液深黃，解剖可見肝臟腫大，結扎近端膽管膨大，其內見黃色的膽汁。ED組：飲食及活動量沒有變化，大量膽汁經外引流管由頸背部排出，頸部切口有時可見感染。開腹見肝臟腫大，質硬，腹腔組織粘連較重。ID組：大鼠飲食及活動量增加，體重增加，大小便顏色正常。解剖后肝臟形態基本恢復，質軟。SH組：大鼠飲食活動正常，皮膚顏色正常，大小便無黃染，切口愈合快。大鼠肝臟形態正常，膽管正常，未見膨脹膽管。

2.2各組大鼠的死亡情況 共有90只大鼠進行了膽管結扎，共有38只大鼠死亡，總死亡率為42.22%。ID組大鼠死亡8只，死亡率為26.67%。ED組大鼠死亡14只，死亡率為46.67%。OJ組大鼠死亡16只，死亡率為53.33%。

2.3術后四組大鼠常規生化指標比較 見表1。

表1　各組術后生化指標水平比較（x±s）

2.4術后四組大鼠TSGF及CA 19-9水平比較 見表2。

表2　各組術后TSGF及CA 19-9水平比較（IU/mL，（x±s）

2.5術后四組大鼠TSGF及CA 19-9陽性率比較 見表3。

表3　術后四組大鼠TSGF及CA 19-9陽性率比較［n（%）］

2.6TSGF及CA 19-9與TB、ALB的關聯性分析 TSGF及CA 19-9與TB呈正相關關系，與ALB呈負相關關系，均有統計學意義（P＜0.05）。

3　討論

OJ是較常見的一種黃疸，特別是惡性OJ，嚴重影響患者的身體健康。惡性OJ與惡性腫瘤關系密切。TSGF是一種與惡性腫瘤發生、發展、嚴重程度等均具有重要關聯的糖類物質和代謝物的總稱。一般情況下，若機體產生了惡性腫瘤細胞時，TSGF水平明顯高于正常值；另一方面，當體內TSGF水平明顯升高時，則可預警機體發生惡性腫瘤危險增加。CA 19-9是一種糖類腫瘤相關抗原，亦可作為判斷惡性腫瘤是否存在的生物標志物，與TSGF一樣，若機體有惡性腫瘤，CA 19-9明顯升高［5，6］。

臨床上一般采用手術治療OJ，但其并發癥和病死率較高［7，8］。可能與OJ時機體的細胞因子、炎癥介質等多種因素參與了免疫功能的調節有關。目前，關于術前是否有必要解除黃疸，在外科手術中的臨床效果仍有待進一步驗證。本研究術前解除了黃疸對OJ模型大鼠肝臟的TSGF和CA 19-9水平的影響，探討膽汁內外引流術的臨床價值［9～12］。

本研究首先檢測、分析比較了四組大鼠的肝功能生化指標水平。結果顯示，OJ組大鼠肝臟功能損害最嚴重，ED組次之，ID再次之，SH組大鼠肝臟功能損害最輕。肝炎、膽囊炎、膽結石、腫瘤、膽瘀性肝炎等病變均可能導致TB、ALT、AST異常升高，這體現了肝臟代謝異常、炎癥等功能紊亂；ALB異常下降也表明肝臟功能的損傷，提示OJ可直接損傷大鼠肝臟功能，可以與肝臟膽汁排泄受阻有直接關系［13～15］。OJ、ID、ED組大鼠的TSGF、CA 19-9水平和陽性率均明顯高于SH組，表明OJ越嚴重，肝臟的腫瘤標志物含量升高，其可能患惡性腫瘤的危險增加。本資料采用關聯性分析，驗證了TSGF、CA 19-9水平和陽性率升高的臨床意義，發現TSGF、CA 19-9水平與TB具有正相關關系，與ALB具有負相關關系，而TB、ALB可直接反映肝功能狀況，說明TSGF、CA 19-9水平可通過直接反映梗阻性大鼠肝功能而提示黃疸的嚴重程度。

綜上所述，膽汁內外引流術可以有效緩解OJ大鼠的膽汁淤積狀況，明顯改善大鼠的肝功能，降低由此誘發的腫瘤危險性；相同的條件下，膽汁內引流效果更佳。

1 Wu Z,Kuntz A,Wadleigh RG. CA 19-9 tumor marker： is it reliable？A case report in a patient with pancreatic cancer. Clin Adv Hematol Oncol,2013,11（1）： 50～52.

2 Duffy MJ,Sturgeon C,Lamerz R,et al. Tumor markers in pancreatic cancer： a European Group on Tumor Markers（EGTM）status report. Ann Oncol,2010,21（3）： 441～447.

3 Kim HR,Lee CH,Kim YW,et al. Increased CA 19-9 level in patients without malignant disease. Clin Chem Lab Med,2009,47（6）： 750～754.

4 Li W,Chung SC. An improved rat model of obstructive jaundice and its reversal by internal and external drainage. J Surg Res,2001,101（1）： 4～15.

5 Ballehaninna UK,Chamberlain RS. The clinical utility of serum CA 19-9 in the diagnosis,prognosis and management of pancreatic adenocarcinoma： an evidence based appraisal. J Gastrointest Oncol, 2012, 3（2）： 105～119.

6 Korkmaz M,ünal H,Sel?uk H,et al. Extraordinarily elevated serum levels of CA 19-9 and rapid decrease after successful therapy： a case report and review of literature. Turk J Gastroenterol,2010,21（4）： 461～463.

7 Bo Deng,Qun-You Tan,Xiao-Qing Fan,et al. Clinical Value of Assaying Tumor Supplied Group of Factor/Tumor Specific Growth Factor in Patients With Solitary Pulmonary Nodule. Clinical Lung Cancer,2011,12（3）： 192～196.

8 Zhang GY,Li WT,Peng WJ,et al. Clinical outcomes and prediction of survival following percutaneous biliary drainage for malignant obstructive jaundice. Oncol Lett,2014,7（4）： 1185～1190.

9 Wang C,Xu Y,Lu X. Should preoperative biliary drainage be routinely performed for obstructive jaundice with resectable tumor？ Hepatobiliary Surg Nutr,2013,2（5）：266～271.

10 Fang Y,Gurusamy KS,Wang Q,et al. Meta-analysis of randomized clinical trials on safety and efficacy of biliary drainage before surgery for obstructive jaundice. Br J Surg, 2013 Nov,100（12）：1589～1596.

11 Baghel K,Raj S,Awasthi I,et al. A comparative analysis of nasogastric and intravenous fluid resuscitation in patients with malignant obstructive jaundice prior to endoscopic biliary drainage. N Am J Med Sci. 2013 Sep,5（9）：523～528.

12 Sun J,Liu G,Yuan Y,et al. Operable severe obstructive jaundice： how should we use pre-operative biliary drainage？ S Afr J Surg. 2013 Oct22,51（4）：127～130.

13 Wang SZ,Wang XB. Effects of biliary drainage on the intestinal barrier function in obstructive jaundice. Hepatogastroenterology. 2013 Sep,60（126）：1284～1288.

14 Choi J,Ryu JK,Lee SH,et al.Palliative treatment of unresectable hepatocellular carcinoma with obstructive jaundice using biliary drainage with subsequent transarterial chemoembolization. J Palliat Med,2013,16（9）：1026～1033.

15 Yilmaz B,Parildar Z,Bozkaya H,et al. Prognostic utility of serum neopterin in obstructive jaundice secondary to malignant lesions treated by percutaneous transhepatic biliary drainage. J Vasc Interv Radiol,2013,24（6）：865～872.

Objective To investigate the effects of internal and external biliary drainage on the expression of Tumor Supplied Group of Factors（TSGF）and tumor-associated carbohydrate antigen（CA 19-9）of rat model of obstructive jaundice. Methods Rat models of Obstructive jaundice（OJ），the biliary drainage group（ID），biliary drainage group（ED）and sham group（SH）were made and TSGF and CA 19-9 levels were detected for analysis. Results TB，ALT，AST of SH groups were the lowest，ID followed（P＜0.05）； ALB of SH group was the highest，ID followed（P<0.05）； TSGF SH group and the lowest levels of CA 19-9，ID followed，ED and maximum OJ group，the differences were statistically signifi cant（P<0.05）； TSGF and CA 19-9 were positively correlated with TB，but with ALB negatively（P＜0.05）. Conclusions Internal and external drainage of bile can effectively alleviate the situation obstructive jaundice cholestatic rats，signifi cantly improve the liver function in rats，thus reducing the risk of induced tumors； under the same conditions，the biliary drainage was better.

inside and outside the drainage of bile Tumor specifi c growth factor（TSGF） Carbohydrate tumor-associated antigen（CA 19-9） Obstructive jaundice

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