六氫β-酸月桂酸酯在雞體內(nèi)的藥動學研究

彭險峰，黃計軍，葉曉嵐，李俊健，任 陽，姜美華，區(qū)煜榮

（廣州英賽特生物技術(shù)有限公司，廣東廣州 510663）

研究發(fā)現(xiàn)，六氫β-酸較適合于作為替代飼用抗生素的新型促生長劑的先導化合物開發(fā)，并且其分子酯化后，飼料加工過程中的穩(wěn)定性大大提高。六氫β-酸月桂酸酯是其中的一種酯化物（彭險峰和覃宗華，2014）。目前該酯的口服藥動學及生物利用度研究尚未見報道。本試驗進行了六氫β-酸月桂酸酯在健康雞體內(nèi)的藥動學及生物利用度研究，為其進一步研究和應用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試藥與試劑 六氫β-酸月桂酸酯，批號：20140910，含量：53.0%，廣州英賽特生物技術(shù)有限公司研制。甲醇、乙酸、乙腈均為色譜級，其他試劑均為分析試劑。六氫β-酸月桂酸酯標準品，溶解于適量乙醇，配制成1000 μg/mL的標準儲備液，置-20℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2 儀器設(shè)備 LC-15C島津高效液相色譜儀（LC-15C二元泵，自動進樣器，SPD-15C紫外檢測器，LC solution色譜工作站），日本島津公司；CT14RD臺式離心機，上海天美科學儀器有限公司；氮吹儀，YSC-24型，成都雅源科技有限公司；FA2104型電子分析天平，上海民橋精密科學儀器有限公司；IKA-MS3旋渦混合儀，德國IKA公司；色譜柱為Hanbon&Science Benatach-NH2 C18（4.6×250 mm，5 μm）。

1.3 試驗動物 體重為 （2.0±0.1）kg的嶺南快大黃肉雞（12只）、102型肉雞飼料（不含抗生素），均由廣東省農(nóng)業(yè)科學院畜牧研究所提供。試驗期間按常規(guī)飼養(yǎng)，自由飲水和采食。

1.4 給藥及采樣 試驗前16 h禁食，自由飲水，給藥后禁飼4 h。動物稱重后隨機分為2組，每組6只雞，分別單劑量灌胃六氫β-酸月桂酸酯（40 mg/kg體重）和靜脈注射六氫β-酸月桂酸酯（1 mg/kg體重）。雞側(cè)臥保定，給藥前采一次空白血樣。分別于給藥后 0.083 （僅靜注）、0.17、0.25、0.5、1、2、4、6、8、10、12 h 采血約 2 mL， 立即移入加有抗凝劑的離心管中，4000 r/min離心10 min，分離血漿，置于-20℃冰箱保存，待測。

1.5 血漿樣品處理 精密吸取0.75 mL待測血漿于離心管中，加入80%正己烷0.75 mL，漩渦混勻 30 s，8000 r/min離心 10 min， 取上清液 0.60 mL，氮氣吹干，殘渣用 60 μL正己烷復溶，12000 r/min離心10 min后進行HPLC分析。

1.6 檢測色譜條件 流動相為正己烷-異丙醇（60∶40，V/V）；檢測波長為 315 nm，流速 0.8 mL/min；柱溫：25 ℃；進樣量：20 μL。

1.7 標準曲線 分別取一定量的六氫β-酸月桂酸酯儲備液添加到6個10 mL具塞離心管中，分別加入適量空白血漿，配制成含一定濃度的六氫β-酸月桂酸酯血漿標準工作液（0.05、0.1、0.2、0.5、1、2 μg/mL），按 1.5 方法進行處理后測定，記錄色譜圖與峰面積，采用峰面積外標法定量。

1.8 數(shù)據(jù)處理 血液藥時數(shù)據(jù)采用藥動學軟件WinNonLin 5.2.1的非房室模型統(tǒng)計矩分析方法處理，藥動學參數(shù)用“平均值±標準差”表示。

2 結(jié)果

2.1 標準曲線和線性范圍 空白血漿中添加六氫β-酸月桂酸酯后，按本試驗方法進行檢測，六氫β-酸月桂酸酯添加量為0.05～2 μg/mL，線性關(guān)系良好（Y=5562X+1008，R2=0.999）。在本試驗條件下，最低檢測量為1 ng，最低檢測濃度為0.05 μg/mL。

2.2 精密度與回收率 分別配制含六氫β-酸月桂酸酯0.05、0.2、1 μg/mL的標準血樣，各濃度每批5個重復，連續(xù)3批，分別測定精密度及回收率。測得的回收率分別為 （101.25±4.25）%、（99.73±3.16）%、（99.85±3.41）%，測得各濃度日內(nèi)相對標準差 （RSD）小于5%，日間的RSD小于10%，滿足藥動學試驗檢測要求。

2.3 口服或靜脈注射六氫β-酸月桂酸酯在雞體內(nèi)的藥動學特征 健康雞單劑量灌胃或靜脈注射給藥六氫β-酸月桂酸酯后，六氫β-酸月桂酸酯的血漿藥物濃度-時間曲線如圖1所示。藥時數(shù)據(jù)經(jīng)藥動學軟件 WinNonLin 5.2.1的非房室模型統(tǒng)計矩分析方法處理后的藥動學參數(shù)見表1。

圖1 六氫β-酸月桂酸酯在雞體內(nèi)的藥時曲線

由表1可見，雞灌胃六氫β-酸月桂酸酯（40 mg/kg體重）后，吸收緩慢，給藥后1.0 h血藥濃度達峰值，平均Cmax為0.04 μg/mL，說明六氫β-酸月桂酸酯在雞體內(nèi)吸收量較少；血漿中平均消除半衰期（T1/2）為 2.35 h，平均滯留時間（MRT）為3.55 h，提示其在雞體內(nèi)消除較快；曲線下面積（AUC）為 0.13 μg·h/mL，生物利用度為 0.4%，表明其吸收極少。靜脈注射六氫β-酸月桂酸酯（1 mg/kg體重）后，5 min的血藥濃度平均值為0.99 μg/mL，顯著高于灌胃給藥；血漿中平均消除半衰期（T1/2）為 1.10 h，平均滯留時間（MRT）為 1.27 h，消除較快；曲線下面積（AUC）為 0.82 μg·h/mL。

表1 雞單劑量給藥后的六氫β-酸月桂酸酯體內(nèi)藥動學參數(shù)（n=6）

3 結(jié)論

研究結(jié)果表明，雞口服六氫β-酸月桂酸酯后吸收量極少，生物利用度僅為0.4%；靜脈注射后血藥濃度較高，消除半衰期均較短。因此動物腸道內(nèi)能維持很高的活性分子濃度，有利于腸道抗菌。

本試驗建立的血漿中六氫β-酸月桂酸酯檢測方法，靈敏度高，操作簡便，所得的藥代動力學參數(shù)為該產(chǎn)品的應用和殘留研究提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

[1]彭險峰，覃宗華.六氫β-酸單酯、內(nèi)絡(luò)鹽或單酯鹽及其作為動物飼料添加劑的應用[P]. 中國專利 ：103739487，A 30-17，2014-04-23.2013107456773.■