JAM-1在子宮內膜癌組織中的表達及意義

馮燕翀牛戰琴.山西醫科大學，山西太原03000；2.山西醫學科學院山西大醫院婦產科，山西太原030032

JAM-1在子宮內膜癌組織中的表達及意義

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1.山西醫科大學，山西太原030001；2.山西醫學科學院山西大醫院婦產科，山西太原030032

目的 探討JAM-1在不同肌層浸潤深度的子宮內膜癌組織中的表達及意義。方法 73例子宮內膜癌患者，其中癌細胞無肌層浸潤18例，淺層浸潤38例，深層浸潤17例，采用免疫組化法檢測JAM-1在無、淺、深三組浸潤深度的表達情況。結果 JAM-1表達在子宮內膜癌癌細胞、腺細胞的胞膜及胞漿，隨肌層浸潤程度的增加JAM-1的表達顯著減弱，差異有統計學意義（P＜0.05）。結論 子宮內膜癌JAM-1的表達與癌細胞的浸潤程度呈反比，提示JAM-1可能與子宮內膜癌的浸潤、侵襲相關。

子宮內膜癌；連接黏附分子1；肌層浸潤

子宮內膜癌（endometrial carcinoma）是發生于子宮內膜的一組上皮性惡性腫瘤，以腺癌最常見。是女性生殖系統的三大惡性腫瘤之一，占全身惡性腫瘤的7%～8%。近年來其發病率呈上升趨勢［1］。子宮內膜癌在后期向肌層、宮頸、陰道侵潤，而肌層浸潤深度是影響子宮內膜癌的因素之一。連接黏附分子1（junctional adhesion molecule 1，JAM-1）參與構成上皮及內皮間的緊密連接復合物，在腫瘤組織癌巢的形成、血管及淋巴管的新生過程中發揮一定的作用［2］。劉艷翠等［3］研究發現在小鼠胃癌組織中JAM-1表達降低，猜想JAM-1可能通過降低細胞間的黏附促進胃癌的轉移、侵襲。然而其在女性生殖系統腫瘤中特別是子宮內膜癌組織中的表達，與肌層侵潤深度的關系，是否參與腫瘤的侵襲、擴散目前尚無明確的報道。本文借助免疫組化方法初步檢測JAM-1在不同肌層浸潤深度的子宮內膜癌組織中表達情況，探討其在腫瘤發生發展的作用，為疾病的診斷或防治提供新的思路。

1　資料與方法

1.1 一般資料

收集長治和平醫院2012年10月～2013年10月經手術治療的子宮內膜癌患者 73例，平均年齡51歲，術后均經病理組織學檢查確診，術前均未接受激素治療或放化療，且全身未合并糖尿病或其他腫瘤。參照國際婦產科聯盟（FIGO）制定的子宮內膜癌手術病理分期將標本分為三組：A組18例，腫瘤僅限于子宮內膜無肌層浸潤；B組38例，腫瘤浸潤深度＜1/2肌層為淺層浸潤；C組17例，腫瘤浸潤深度＞1/2肌層為深層浸潤。A組平均年齡（51.4±10.1）歲，B組（50.7±10.4）歲，C組（49.9±10.7）歲，三組患者在年齡方面無顯著統計學差異（P＞0.05）。

表1 JAM-1在不同浸潤程度癌組織中的表達［n（%）］

1.2 試劑與設備

兔抗人JAM-1多克隆抗體購自北京博奧森生物技術有限公司，即用型二抗試劑盒、加強型DAB顯色試劑盒由福州邁新生物技術有限公司生產，山羊血清封閉液購自武漢博士得生物技術有限公司，PBS緩沖液、枸櫞酸鹽修復液、顯微鏡、圖像采集及分析儀等由和平醫院病理科提供。

1.3 標本處理

手術切除標本固定在足量10%福爾馬林固定液，固定時間不小于2h，常規石蠟包埋，垂直子宮內膜連續5μm切片。

1.4 實驗方法

實驗采用免疫酶法二步法檢測JAM-1在不同浸潤深度癌組織中的表達，參照試劑盒說明書進行試驗，主要操作步驟如下：切片以二甲苯脫蠟，梯級乙醇脫水，滴加3% H2O215min以阻斷內源性過氧化氫酶，PBS緩沖液清洗后加入枸櫞酸鹽溶液中加熱1分30秒，室溫冷卻，滴加山羊血清封閉液室溫孵育20min，甩掉封閉液滴加一抗（工作濃度為1∶200）后放入4℃冰箱中過夜。第2日PBS清洗切片后加過氧化物酶標記二抗常溫下孵育15min，滴加二氨基聯苯胺（DAB）顯色，顯微鏡下觀察顯色，及時自來水終止。蘇木素復染，清水沖洗，連過3次二甲苯，梯度酒精脫水，通風櫥中風干，滴加中性樹膠，蓋上蓋破片封片，在高倍顯微鏡下觀察組織染色情況并照相。對照組為PBS緩沖液代替一抗。

1.5 結果判定

JAM-1表達陽性顆粒為棕黃色或黃褐色，表達部位為細胞膜或細胞漿。在400倍顯微鏡下觀察根據染色深淺及陽性細胞百分率綜合評價評分：基本不著色為0分，黃色為1分，棕黃色為2分，黃褐色為3分；選取一個高倍鏡視野，每個視野計數100個細胞，計算陽性細胞率，陽性率＜10%計0分，10%～40%計1分，40%～70%計2分，≥70%計3分。以上兩評分相加，總分0～1分為陰性（-），2分為弱陽性（+），3～4分為中等陽性（++），5～6分為強陽性（+++）。綜合陽性率以+～+++作為陽性計算。

1.6 統計學處理

采用SPSS19.0統計軟件，率的比較用x2檢驗或四格表的Fisher確切概率法，檢驗水準是α=0.05，P＜0.05時有統計學差異。

2　結果

免疫組化結果顯示JAM-1主要表達在子宮內膜癌組織中增生的腺上皮細胞、癌細胞的胞膜上和（或）胞漿中。當腫瘤局限于子宮內膜時，JAM-1陽性率為 83.33%；JAM-1 在淺層浸潤子宮內膜癌組織中的表達陽性率為 60.52%，與無肌層浸潤組比較，其陽性率顯著降低（P＜0.05），并且隨著子宮內膜癌肌層浸潤程度的增高，其表達顯著降低，統計學分析顯示，無肌層浸潤、淺肌層浸潤分別與深肌層浸潤比較，具有統計學差異（P＜0.05）。見表1，圖 1。

無浸潤組織

圖1 JAM-1蛋白在子宮內膜癌組織中的表達（免疫組化染色，×400：JAM-1陽性表達主要定位于癌細胞、腺細胞的胞膜、胞漿中，在無浸潤組織中癌細胞異型性輕，JAM-1強陽性表達；淺層浸潤組癌細胞異性型較強，JAM-1呈陽性表達；深層浸潤組癌細胞異型性明顯，核大、不規則，JAM-1弱陽性表達）

3　討論

緊密連接在維持正常上皮、內皮穩態發揮重要作用，是各種良惡性腫瘤增殖、轉移、侵襲的屏障結構，緊密連接結構的紊亂對癌細胞的營養、增殖、遷移、浸潤等方面造成一定的影響［4］。緊密連接是由occludin、claudins、JAMS、zos等蛋白構成的復雜結構［5］。JAMS是細胞間緊密連接黏附分子，屬于免疫球蛋白超家族類，包含JAM-1、JAM-2、JAM-3三個成員。JAM-1是新近發現的跨膜蛋白，已有研究證實JAM-1最先出現在細胞間接觸位點并能召集其他緊密連接蛋白從而啟動緊密連接的形成［6-8］，這種特性賦予其能夠介導同型細胞間的黏附［9］。

腫瘤浸潤、侵襲過程非常復雜：首先，腫瘤細胞從原發病灶脫落后黏附到細胞外基質上，基質被降解后腫瘤開始浸潤、侵襲。癌細胞之間的黏附分子丟失后將啟動腫瘤的浸潤、侵襲，這是腫瘤浸潤的首要步驟。當細胞間連接被破壞時，細胞間的黏附就會松散，致使癌細胞脫離癌巢，為癌細胞的游走、轉移提供了先決條件。研究認為緊密連接結構的破壞是導致癌癥早期侵襲能力增強和細胞間粘附能力減弱，增強了腫瘤細胞的遷移、擴散能力的重要原因［10］。

腫瘤組織侵襲、浸潤的過程中癌細胞發生遷移是必不可少的條件。JAM-1因其能影響細胞的遷移而廣泛的應用于腫瘤侵襲、浸潤機制的研究［11-12］。有學者［13-14］在研究肺的鱗狀細胞癌、乳腺癌時發現，與正常肺上皮、乳腺組織相比肺的鱗狀上皮細胞癌、乳腺癌等癌細胞JAM-1表達明顯降低，JAM-1的表達與癌組織的侵襲程度呈負相關，說明JAM-1表達的下調能夠促進肺癌、乳腺癌的侵襲。我們猜想JAM-1在子宮內膜癌的進展中是否有同樣的變化，是否促進癌細胞的浸潤。

我們通過免疫組化方法研究JAM-1在不同肌層浸潤深度的子宮內膜癌組織中的表達，發現當腫瘤局限于子宮內膜時JAM-1在癌細胞、腺細胞的胞膜、胞漿高表達，特別是細胞連接處。當腫瘤浸潤到肌層時，JAM-1表達減弱，特別是浸潤到深肌層時偶爾才見到JAM-1陽性顆粒。根據染色深淺及陽性細胞率綜合評價利用x2檢驗進行統計分析，得出三組JAM-1的表達具有統計學差異。本研究與Naik［14］、趙晶等［15］關于乳腺癌及宮頸癌的研究結果較一致，子宮內膜癌癌細胞的JAM-1表達隨著癌細胞侵襲肌層越深，表達逐漸減弱，提示JAM-1與子宮內膜癌癌細胞的侵襲能力呈負相關，推測JAM-1的表達下調有可能促進子宮內膜癌癌細胞的侵襲。大量研究發現JAM-1在保持上皮、內皮間緊密連接結構的完整發揮一定的作用，Gumbiner等［16］認為細胞之間緊密連接結構的不完整是癌細胞轉移、侵襲的主要因素之一。Gutwein等［17］通過siRNA技術干擾JAM-1的表達，表達量顯著降低，誘導腎細胞癌發生轉移，同時推斷JAM-1的表達下調先于腎細胞癌的侵襲、轉移。以上這些研究和本研究從不同角度一致說明了黏附分子JAM-A是構成細胞間緊密連接的重要成分，下調JAM-A的表達，影響緊密連接結構的形成，屏障能力減弱，通透性提高，增加了癌細胞的侵襲能力。本文觀察到子宮內膜癌癌細胞肌層侵襲越深JAM-A的表達就越弱，猜想JAM-1在子宮內膜癌侵襲過程中發揮一定的作用。

有趣的是在研究JAM-1與不同組織來源的腫瘤侵襲之間的關系時發現，上調JAM-1的表達可以促進某些腫瘤的侵襲、浸潤。如研究胰島細胞腫瘤時觀察到JAM-1缺陷型小鼠的癌細胞的增殖和轉移能力下降幅度顯著［18］。McSherry［19］在研究乳腺癌時得出與Naik相反的觀點，前者在長期跟蹤隨訪兩個乳腺癌浸潤癌過程中觀察乳腺癌存活率較高的患者中JAM-1表達較低，推斷JAM-1表達上調可以促進癌變組織周圍血管、淋巴管的生成，為癌細胞的血性轉移、淋巴轉移提供條件。目前關于JAM-1高表達促進腫瘤進展分子機制研究多數認為JAM-1通過調節GTP Rap1酶的活性增強β1-integrin的表達能力，進而引起上皮細胞形態發生變化，導致細胞極性消失和細胞骨架結構紊亂［20-21］。然而JAM-1低表達如何促進腫瘤的浸潤、侵襲的分子機制研究尚少，本實驗發現JAM-1的表達水平與子宮內膜癌肌層浸潤深度成反比，為以后研究JAM-1表達下調怎樣促進腫瘤的進展奠定基礎。同時本文只研究了JAM-1與肌層浸潤深度的關系，下一步會研究JAM-1與不同病理類型、分化程度以及雌激素之間的關系。

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Expression and significance of JAM-1 in tissues of endometrial carcinoma

FENG Yanchong1NIU Zhanqin2
1.Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China；2.Department of Gynecology and Obstetrics， Shanxi Dayi Hospital，Shanxi Academy of Medical Sciences，Taiyuan 030032，China

Objective To investigate the expression and significance of JAM-1 in the endometrial carcinoma tissues with different myometrial invasion depth. Methods Seventy-three patients with endometrial carcinoma were selected， of which 18 patients were without myometrial invasion， 28 patients had superficial invasion and 17 patients had deep invasion. The immunohistochemistry was used to detect the expression situation of JAM-1 in the three groups with no superficial and deep invasion. Results JAM-1 expressed in the cancer cells of endometrial carcinoma and cell membrane and cytoplasm of glandular cells. As the depth of myometrial invasion increased， the expression of JAM-1 weakened significantly， with statistically significant differences（P＜ 0.05）. Conclusion In endometrial carcinoma， the expression of JAM-1 and invasion depth of cancer cells are negatively correlated， suggesting that JAM-1 may be associated with the invasion of endometrial carcinoma.

Endometrial carcinoma；Junctional adhesion molecule 1；Myometrial invasion

R737.33

A

2095-0616（2014）06-17-04

2014-01-20）