卵巢腫瘤彩超血流指標與微血管密度及促血管生成素的相關性

王娟娟，于　冰

（山西醫學科學院 山西大醫院婦產科超聲室，山西 太原　030032）

卵巢腫瘤彩超血流指標與微血管密度及促血管生成素的相關性

王娟娟，于冰

（山西醫學科學院 山西大醫院婦產科超聲室，山西 太原030032）

目的：探討卵巢腫瘤彩超血流指標阻力指數（RI）與卵巢組織中微血管密度（MVD）及促血管生成素-2（Ang-2）的相關性。方法：經手術病理證實的55例卵巢腫瘤患者，術前應用彩色多普勒超聲觀察卵巢腫瘤內部血流并測定RI值，術后對所切除卵巢腫瘤組織標本分別采用免疫組化法檢測其組織中MVD及Ang-2表達，分析RI與MVD、Ang-2的相關性及與腫瘤性質分級之間的相關性。結果：卵巢腫瘤的良惡性與RI呈負相關（r=-0.577，P＜0.05）；MVD各組間呈正相關（r=0.750，P＜0.01）；RI與MVD呈顯著負相關（r=-0.537，P＜0.05）；Ang-2與腫瘤分級呈顯著正相關（r=0.573，P＜0.05）。結論：RI、MVD及Ang-2分別從不同角度反映了卵巢腫瘤中新生血管的形成，Ang-2有望作為卵巢癌的臨床診斷指標之一，三者聯合應用可對術前術后卵巢腫瘤的血管形成進行綜合評價，為卵巢癌的抗血管新生治療及預后評估提供有價值信息，具有較重要的臨床預測價值。

卵巢腫瘤；血管生成素2；超聲檢查，多普勒，彩色

卵巢腫瘤是女性生殖道常見腫瘤，其中卵巢癌死亡率最高，預后最差。惡性卵巢腫瘤的發病因素及病情進展機制復雜多樣，大量研究表明，腫瘤的進行性生長代謝需要持續的血管生成，血管生成在腫瘤發病機制中的作用受到越來越多的重視［1］。微血管密度（Microvessel density，MVD）是目前評價腫瘤新生血管數量的定量指標，它不僅與腫瘤細胞的營養和供養有關，而且也反映了腫瘤的浸潤和轉移能力［2］。促血管生成素-2（Angiopoietin-2，Ang-2）是新近發現的與腫瘤血管生成相關的內皮生長因子，且特異表達于腫瘤邊緣的血管重建區［3-4］，其水平的高低與腫瘤的惡性程度密切相關。

本研究通過彩色多普勒超聲血流顯像（Color Doppler flow imaging，CDFI）觀察腫瘤內部血管分布情況，測定血管富集區域瘤體血流阻力指數（Resistance index，RI）；采用免疫組織化學方法檢測卵巢腫瘤組織中Ang-2表達和MVD，結合卵巢腫瘤彩超血流指標RI與卵巢組織MVD、Ang-2表達的相關性，探討三項參數指標與卵巢腫瘤預后的關系以及在卵巢腫瘤抗血管新生中的臨床價值。

1　資料與方法

1.1研究對象

2010年3月—2011年10月在山西醫科大學第二臨床醫學院婦產科住院手術確診的卵巢腫瘤患者55例，術前二維超聲及彩超均診斷為卵巢腫瘤。年齡17～74歲，平均49歲。所有患者均為首次就診，術前未行干預治療，術后經病理診斷結果為：卵巢良性腫瘤25例 （良性組），交界性腫瘤8例 （交界性組），惡性腫瘤22例（惡性組）。25例良性卵巢腫瘤中，24例為卵巢上皮來源（漿液性囊腺瘤9例，混合型囊腺瘤5例，黏液性囊腺瘤10例），另外1例為性索間質來源 （卵巢卵泡膜細胞瘤）；8例交界性卵巢腫瘤均為卵巢上皮來源；22例卵巢惡性腫瘤 （卵巢顆粒細胞瘤4例，1例子宮內膜樣癌，2例庫肯勃格瘤，1例未成熟型畸胎瘤，14例漿液性囊腺癌）。

1.2儀器與方法

1.2.1儀器

應用GE Voluson 730彩色多普勒超聲診斷儀，經腹超聲探頭頻率3.5～5.0 MHz，經陰超聲探頭頻率5.5～7.5 MHz。先行腹部超聲檢查，若腫瘤靠近后腹膜，應進一步聯合經陰道超聲檢查。盡量對腫瘤行多切面掃查，重點觀察腫瘤的大小、形態、邊界是否清晰、包膜是否完整、內部回聲，是否伴有分隔、分隔厚度，瘤體內部是否伴有乳頭樣回聲、乳頭大小等，尤其對腫瘤內部高度懷疑病變區域應做重點掃查。清晰顯示二維聲像圖后進入彩色多普勒血流顯像模式，重點觀察腫瘤周邊、內部分隔、內部乳頭，以及內部高度懷疑病變區域血流分布情況，在獲取穩定血流頻譜圖像的基礎上，測量其RI值，圖像應至少存在3個連續穩定的心動周期，每例患者應盡量多部位取樣測量RI值，取最低RI值。

1.2.2免疫組織化學

采用免疫組織化學方法對腫瘤組織中MVD及Ang-2的表達情況進行檢測。濃縮型鼠抗人CD34單克隆抗體（ZM-0046，0.1 mL），購自北京中杉金橋生物技術有限公司。濃縮型兔抗人Ang-2多克隆抗體（BA1530，0.1 mL），購自武漢博士德生物工程有限公司。免疫組織化學方法按照試劑盒說明進行相關操作。

1.3結果判斷

1.3.1腫瘤內血管分型

分為3型［5］：①Ⅰ型：腫瘤內部、周邊未見血流信號；②Ⅱ型：腫瘤周邊及/或隔上可見點狀、短線狀血流信號；③Ⅲ型：腫瘤周邊及內部實質區可見點狀、短線狀、條狀或樹枝狀血流信號。

1.3.2MVD計數

參照Weidner計數法［6］，先在低倍鏡（×100倍）下選取微血管密度最大的視野，然后將光鏡倍數增大至200倍，分別計數5個獨立視野中被CD34標記且血管內皮細胞被染成棕黃色的微血管條數，求其平均值得出MVD，結果用±s表示。微血管的判斷標準為：獨立存在的與鄰近血管游離的單個內皮細胞，或獨立存在的內皮細胞簇可作為微血管的一個計數單位，血管腔過大即直徑大于8個紅細胞之和，或者帶有明顯肌層的血管均不在計數范圍內。

1.3.3Ang-2表達

細胞漿有棕黃或棕褐色顆粒沉著的細胞計數為Ang-2陽性細胞，根據染色的程度及染色細胞的百分率進行評分（圖1，2）：按細胞染色強度分0～3分：0分為無染色，1分為淡黃色者，2分為棕黃色者，3分為棕褐色者；按著色細胞比例也分為0～3分：0分為著色細胞比例≤5%，1分為＞5%～25%，2分為＞25%～50%，3分為＞50%。將每張切片著色強度得分與著色細胞比例得分相乘，結果為判定標準：0～1分為陰性（-），2～3分為弱陽性（+），4～6分為中等陽性（++），6分以上為強陽性（+++）。

1.4統計學分析

采用SPSS 13.0統計分析軟件包對數據進行統計學處理，計量資料統計結果用±s表示，多樣本計量資料采用F檢驗，計數資料采用χ2檢驗，相關性分析使用Pearson等級相關分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1卵巢腫瘤彩超血流分布情況

Ⅰ型7例，術后病理證實均為良性腫瘤；Ⅱ型28例，術后病理證實為卵巢良性腫瘤18例，交界性腫瘤8例，惡性腫瘤者2例；Ⅲ型20例，術后病理證實均為惡性腫瘤，見圖1～3。

2.2卵巢腫瘤各組間參數指標比較

見表1。

表1　卵巢腫瘤各組間參數指標比較

卵巢腫瘤彩超血流參數指標RI三組之間差異具有統計學意義（P＜0.05）。惡性組（0.38±0.10）低于良性腫瘤組（0.57±0.15）；交界性腫瘤組（0.44±0.06）低于良性腫瘤組，差異具有統計學意義（P＜0.05），但卵巢惡性腫瘤組與卵巢交界性腫瘤組相比無顯著性差異（P=0.235）。卵巢腫瘤的良惡性與RI呈負相關（r=-0.577），即RI值越低，惡性的可能性越大。

卵巢腫瘤MVD三組之間差異具有統計學意義（P＜0.01）。惡性組 （45.86±24.20）顯著高于良性組（16.36±6.70）和交界性組 （31.00±9.92）（P＜0.05）。MVD各組間呈正相關（r=0.750），即隨著腫瘤分級提高，MVD值增加。

卵巢腫瘤Ang-2陽性表達率三組比較差異有顯著性（P＜0.05）。卵巢惡性腫瘤組Ang-2陽性表達率（82%）顯著高于良性組（12%）與交界性組（50%），且三組之間差異有明顯統計學意義（P＜0.05）。Ang-2表達各組間呈明顯正相關（r=0.573，P＜0.05）。

圖1　卵巢良性腫瘤（黏液性囊腺瘤）。囊性伴分隔，內透聲欠佳，周邊僅見散在血流（Ⅱ型），RI=0.61。　圖2　卵巢交界性黏液性乳頭狀囊腺瘤。囊壁見不規則實性區，內較豐富血流（Ⅱ型），RI=0.50。　圖3　卵巢惡性腫瘤（漿液性囊腺癌）。實性為主，內豐富血流（Ⅲ型），RI= 0.35。Figure 1.Ovarian benign tumor（mucinous cystadenoma）.Cystic with separate，only scattered blood flow signal（typeⅡ），RI=0.61.　Figure 2.Borderline mucinous ovarian papillary cystadenoma rich blood flow signal in the irregular solid areas（typeⅡ），RI=0.50.Figure 3.Ovarian malignant tumor（serous cystadenocarcinoma）.Mainly solid and rich blood flow signal in the solid area（typeⅢ），RI=0.35.

2.3卵巢腫瘤彩超血流參數指標RI與MVD的相

關性比較

RI與MVD呈負相關（r=-0.537，P＜0.01），即隨著MVD的增加，RI值降低，見表2。

表2　卵巢腫瘤彩超血流參數指標RI與MVD的相關性比較

3　討論

Folkman［6］提出“腫瘤血管形成”學說，腫瘤新生的滋養血管生成先于腫瘤細胞群增生。從組織學講，新生血管不成熟，血管壁缺乏平滑肌，血管壁彈性欠佳，此外大量血管吻合導致動靜脈瘺形成，使血流阻力降低。新生血管是腫瘤本身的滋養血管，數目越多，腫瘤生長越快［7］。本研究通過CDFI術前對卵巢腫瘤患者進行檢測，其中7例腫瘤周邊及內部均未測及明顯血流信號，術后病理證實均為良性腫瘤，提示可能由于腫瘤內部形成的新生血管較少，其余腫瘤周邊或內部均可見散在或者較豐富血流信號分布，并可測及動脈性血流頻譜，術后病理證實為卵巢惡性腫瘤者術前RI值多低于0.4，本研究結論與Kurjak等［8］報道相似，而交界性腫瘤的RI值與與惡性腫瘤RI值存在明顯交叉，差異無統計學意義（P= 0.235）。可能由于本研究數量有限所造成，應進一步行大樣本研究。彩色多普勒超聲測量RI值可間接反映腫瘤的良惡性，為臨床預后判斷提供理論依據。

近年研究表明，腫瘤的生物行為（如生長、浸潤、轉移等）均依賴于新生血管［9］。新生血管主要是由其上級宿主血管通過芽生方式轉化而來，進而經不斷生長演進，一般先沿腫瘤周邊生長，包繞瘤體，而后蔓延深入瘤體內部生長，共同供應腫瘤生長代謝所需，促進腫瘤迅速生長。因而，腫瘤新生血管的形成所導致的瘤體血供增加是腫瘤侵襲或者惡性變的標志［10］。

目前MVD被認為是反映腫瘤血管生成的金標準。本研究結果顯示卵巢惡性腫瘤組中MVD的表達明顯高于卵巢良性腫瘤及交界性腫瘤組，與Orre等［11］報道相一致。各組之間兩兩比較，良性組與交界性組比較（P＜0.03），良性組與惡性組比較（P＜0.00），交界性組與惡性組比較（P＜0.03），三組之間差異均有統計學意義（P＜0.00），且隨著腫瘤分級提高，MVD值增加。提示MVD參與了腫瘤的演變過程，而MVD增加更加速了腫瘤的演進。究其原因可能是：腫瘤內部新生血管的不成熟性，導致其生長的隨意性，另外管壁結構不牢固，可導致腫瘤細胞擴散轉移；其次腫瘤內新的血管形成為腫瘤提供了充分的營養支持，營養成分越充足，新生血管形成越多，腫瘤生長越快。

本研究對RI與MVD的相關性研究中發現，RI各組間呈負相關（r=-0.577），即隨著腫瘤分級提高，RI值降低；MVD各組間呈正相關（r=0.750），即隨著腫瘤分級提高，MVD值增高，RI與MVD相關性分析兩者間存在顯著負相關（r=-0.537，P=0.000），提示卵巢腫瘤血流越豐富，RI越低，腫瘤生長越快，其形成新生血管越豐富。這兩個指標均從不同角度反映著腫瘤內部血管的豐富程度，與其他學者研究結果一致。

國內外諸多研究報道Ang-2在良惡性腫瘤的表達存在差異，惡性腫瘤顯著高于良性腫瘤，血管形成可能是卵巢良、惡性腫瘤鑒別及腫瘤侵襲轉移的一個標志。新生血管增多反映了卵巢腫瘤的生長與浸潤，具有更高的轉移和惡化進展趨勢。本研究發現卵巢腫瘤中Ang-2的表達主要位于腫瘤基質細胞和血管內皮細胞的胞漿中，惡性腫瘤中陽性表達率為82%，明顯高于良性組（12%）與交界性組（50%），三組之間差異有明顯統計學意義，且與分級之間存在明顯正相關，提示Ang-2促進卵巢腫瘤中新生血管的形成，并與腫瘤的發生發展有著密切關系。

綜上所述，卵巢腫瘤彩超血流指標RI可間接反映卵巢腫瘤的良惡性，多用于術前檢測腫瘤內部及周邊血流動力學情況，結合聲像圖形態學特征來綜合判斷腫瘤的良惡性以及預后情況，可為術前評估腫瘤良惡性提供幫助；MVD、Ang-2可用于術后對腫瘤組織進行評估，Ang-2有望作為卵巢癌的臨床診斷指標之一。RI、MVD及Ang-2分別從不同角度反映了卵巢腫瘤中新生血管的形成，三者聯合應用可對術前術后卵巢腫瘤的血管形成進行綜合評價，為卵巢癌的抗血管新生治療及預后評估提供有價值信息，具有較重要的臨床預測價值。

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Correlation between intratumoral flow assessed by color Doppler and microvascular density, together with expression of Ang-2 in ovarian tumor

WANG Juan-juan，YU Bing
（Department of Obstetrics and Gynecology，Shanxi Academy of Medical Sciences，Shanxi Dayi Hospital，Taiyuan 030032，China）

Objective：To evaluate the correlation between intratumoral blood flow index of resistance index（RI），assessed by color Doppler and microvascular density（MVD），together with expression of angiopoietin-2（Ang-2）in ovarian tumor.Methods：For 55 patients with ovarian tumor proved by pathologic histology examination，CDFI was performed preoperatively to detect the arterial blood flow signals，and the lowest RI values were recorded.MVD and the expression of Ang-2 were examined by immunohistochemical assay.Results：There was a significant negative correlation with RI for benign and malignant ovarian tumors（r=-0.577，P＜0.05）.With the increase of tumor grade，MVD showed a significantly positive correlation（r=0.750，P＜0.01）.There was a negative correlation between RI value and MVD（r=-0.537，P＜0.05）.Ang-2 and tumor grade were significantly positively correlated（r=0.573，P＜0.05）.Conclusions：Ang-2 is expected to be one of the indicators of clinical diagnosis of ovarian cancer.Combined application of RI，MVD and Ang-2 can comprehensively evaluate the angiogenesis of ovarian tumors before and after operation，which could be helpful in forecasting prognosis and therapy of ovarian cancer.

Ovarian neoplasms；Angiopoietin-2；Ultrasonography，Doppler，color

R737.31；R445.1

A

1008-1062（2015）10-0728-04

2015-03-30；

2015-04-23

王娟娟（1984-），女，山西運城人，碩士研究生。現工作單位為山西醫科大學第二臨床醫學院婦產科超聲室。

于冰，山西醫學科學院 山西大醫院婦產科超聲室，030032。

山西省太原市科技項目（12016906）。