高效液相色譜法測定染發化妝品中2-氨基-3-羥基吡啶

洪麗

（1.福建省產品質量檢驗研究院；(2.國家加工食品質量監督檢驗中心， 福建 福州 350002）

高效液相色譜法測定染發化妝品中2-氨基-3-羥基吡啶

洪麗1，2

（1.福建省產品質量檢驗研究院；(2.國家加工食品質量監督檢驗中心， 福建 福州 350002）

建立了測定染發劑中2-氨基-3-羥基吡啶的高效液相色譜(HPLC)分析方法。以甲醇為提取劑進行超聲提取，中性氧化鋁柱凈化樣品，用XB-C18柱(150 mm×4.6 mm，5μm)分離，以0.02 mol .L-1的乙酸銨和甲醇為流動相進行梯度洗脫。目標分析物在相應的質量濃度范圍內線性關系良好，線性相關系數(R2)為0.9994，檢出限為1.1 mg .kg-1，回收率為90.2%～98.9%，相對標準偏差為1.4%～3.3%。該方法準確、簡便、快速，方法精密度、準確度和回收率均符合染發劑樣品測定的要求。

高效液相色譜；染發劑；2-氨基-3-羥基吡啶

我國《化妝品衛生規范》2007版[1]暫時允許使用的染發劑原料為93種，2-氨基-3-羥基吡啶為其中氧化型染發劑中的一種，衛生規范規定了其在染發劑中最大允許使用濃度為0.6%。氧化型染料成分多屬于芳香胺類化合物，因其多具致敏性或致癌性，使用會對人體健康造成多種急性或慢性的傷害[2,3]。

目前文獻報道的相關染發劑原料的檢測方法有氣相色譜-質譜（GC-MS）[4]、毛細管電泳-間接化學發光法（CE-CL）[5]、高效液相色譜（HPLC）[6]和超高效液相色譜-質譜（HPLC-MS）[7]等。報道的染發劑中2-氨基-3-羥基吡啶的檢測方法有高效液相色譜法[8]和氣質聯用法[9]。文章在樣品提取過程中利用中性氧化鋁固相萃取柱去除染發劑中復雜的基質干擾，建立了快速準確的2-氨基-3-羥基吡啶的高效液相色譜檢測方法，為染發劑中原料2-氨基-3-羥基吡啶的定量檢測提供了一種穩定可靠的方法。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

Waters2998高效液相色譜儀配二極管陣列檢測器（美國Waters公司）；Milli-Q超純水純化系統（美國Millipore公司）；渦旋混合器（江蘇健康醫藥公司）；分析天平（賽多力科（北京）科學有限公司，感量為0.1 mg）；超聲波清洗器(上海生析超聲儀器有限公司)。

水為超純水；乙酸銨(優級純，上海生工生物工程有限公司)；甲醇（色譜純，山東禹王實業有限公司化工分公司）中性氧化鋁(200～300目，國藥集團化學試劑有限公司)。

染發劑標準品：2-氨基-3-羥基吡啶(CAS號：16867-03-1，2-amino-3-hydroxypyridine，AHP) ，純度≥97%，上海晶純生化科技股份有限公司。

中性氧化鋁固相萃取柱：稱取0.6 g中性氧化鋁，干法填柱，使用時前用2 mL甲醇活化。

1.2 實驗方法

1.2.1 標準溶液配制

AHP單標儲備液：準確稱取AHP染料對照品，置于50 mL比色管中，用甲醇配成標準儲備液，濃度為1 mg .mL-1于4 ℃冰箱儲存。使用時，用甲醇稀釋。

標準系列溶液：用甲醇配制濃度為0.2、1.0、5.0、20.0、50.0μg .mL-1的標準系列溶液。

1.2.2 流動相的配制

流動相溶液（0.02 mol .L-1乙酸銨）：稱取1.54 g乙酸銨，加水至1000 mL，經0.45 μm濾膜過濾，作為流動相備用。

1.2.3 樣品預處理

準確稱取試樣1.0 g（精確至1 mg）于50mL比色管中，加入1g無水硫酸鈉，20mL甲醇，旋渦混勻器上渦旋1 min，超聲提取10 min，混勻，冷凍高速10000 r .min-1離心5 min。取3 mL上清液過甲醇活化后的中性氧化鋁柱，用2 mL甲醇淋洗，抽干，最后用2.5 mL 50% 甲醇洗脫，用甲醇定容至3 mL，過0.2μmPTEF濾膜，儀器進樣分析。

1.2.4 色譜參考條件

色譜柱：XB-C18柱，150 mm×4.6 mm（內徑），5μm。流動相：A相(甲醇)+B相(0.02mol .L-1乙酸銨)，洗脫梯度程序：0 ~ 6 min，2% A；6.1 ~ 10 min，2%～60% A； 10.1～12 min，2% A。流速：1.0 mL .min-1。柱溫：35 ℃。進樣量：10 μL。檢測器：二極管陣列檢測器。檢測波長：314 nm。

2 結果與討論

2.1 色譜條件優化

2.1.1 色譜條件的選擇

圖1 不同流動相和色譜柱對目標染料的分離效果比較

實驗使用甲醇+0.02 mol .L-1乙酸銨和甲醇+0.02 mol .L-1乙酸銨(含0.2%甲酸)2種流動相體系，比較了RP Amide C16 (250 mm×4.6 mm，5 μm)和XB-C18 (150 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱對目標染料的分離效果及峰形。使用甲醇+0.02 mol .L-1乙酸銨流動相時，XB-C18和RP Amide C16 色譜柱分離效果分別如圖1中a1和a2所示；使用甲醇+0.02 mol .L-1乙酸銨(含0.02%甲酸)流動相時，XB-C18和RP Amide C16色譜柱分離效果分別如圖1中a3和a4所示。由圖可以看出，使用甲醇+0.02 mol .L-1乙酸銨作為流動相時，XB-C18和RP Amide C16 色譜柱對目標染料分離效果均令人滿意，由于XB-C18為常用色譜柱，因此本實驗選用此柱為分離色譜柱，流動相選用甲醇+0.02 mol .L-1乙酸銨。

2.1.2 檢測波長選擇

用二極管陣列檢測器在200～700 nm波長范圍內，對目標染料進行吸收光譜掃描，掃描光譜圖如圖2所示。由圖可知，目標染料的最佳檢測波長可設定為314 nm。

圖2 目標染料掃描光譜圖

2.2 樣品處理方法優化

2.2.1 固相萃取條件優化

利用加標樣品，選擇了中性氧化鋁柱和聚酰銨柱對目標分析物進行凈化處理。回收率結果表明，樣品經中性氧化鋁柱凈化后，回收率大于90%，而聚酰銨柱對目標分析物不保留，因此實驗選用中性氧化鋁柱作為預處理小柱，中性氧化鋁凈化樣品效果如圖3所示。

使用中性氧化鋁柱時，用甲醇溶液作為洗脫液，對目標分析物的洗脫回收率結果如圖4所示，當甲醇溶液中水含量大于30%即甲醇溶液中甲醇含量小于70%時，回收率基本穩定且接近100%，因此實驗使用50%甲醇作為洗脫液。

圖3 樣品未凈化前(a1)，凈化后(a2)及樣品加標凈化后(a3)

圖4 甲醇溶液對固相萃取回收率的影響

2.3 方法學實驗

2.3.1 方法的線性范圍、檢出限及定量下限

AHP染料的線性方程、線性范圍、相關系數、檢出限(信噪比S/N=3)及定量下限(S/N=10)見表1。結果表明，AHP染料在相應的質量濃度范圍內，線性關系良好，R≥0.998符合標準定量要求。

表1 線性范圍、線性相關系數、檢出限與定量限

表2 樣品(染發膏)加標回收率 (n=6)

2.3.2 方法回收率和精密度

以空白染發膏樣品作為空白基質樣品，進行加標回收實驗。分別加入如表2所示的3個水平的質量濃度，每個水平平行測定6次，AHP染料的平均加標回收率為90.2%～96.9%，相對標準偏差(RSD)為1.4%～3.3%，表明，該方法具有良好的精密度和準確度。

3 結論

染發化妝品中組分較多，對目標分析物會存在背景干擾，利用中性氧化鋁固相萃取柱能有效去除樣品中的雜質，凈化樣品，實現對染發劑中2-氨基-3-羥基吡啶染料的準確定量分析。文章建立了染發劑中2-氨基-3-羥基吡啶染料的高效液相色譜分析測定方法，該方法具有操作簡便、快速、靈敏度高和重現性好等特點。

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O657.7

A

1007-550X（2015）05-0031-04

10.3969/j.issn.1007-550X.2015.05.001

2015-04-19

洪麗，女，福建福州人，助理工程師，主要從事食品及相關產品質量分析研究。