老年心腦血管病患者MTHFR基因多態性與血清葉酸、HCY水平的關系

陳素峰，周永列，章燕青，夏 駿，陳永健，單志明，胡慶豐

( 1. 浙江中醫藥大學醫學技術學院，浙江 杭州 310053； 2. 浙江省人民醫院，浙江 杭州310014；3. 溫州醫科大學檢驗醫學學院，浙江 溫州 325035；4. 浙江省臨床檢驗中心，浙江 杭州 310014)

老年心腦血管病患者MTHFR基因多態性與血清葉酸、HCY水平的關系

陳素峰1,2，周永列2@，章燕青3，夏 駿2，陳永健2，單志明4，胡慶豐2

( 1. 浙江中醫藥大學醫學技術學院，浙江 杭州 310053； 2. 浙江省人民醫院，浙江 杭州310014；3. 溫州醫科大學檢驗醫學學院，浙江 溫州 325035；4. 浙江省臨床檢驗中心，浙江 杭州 310014)

目的探討老年心腦血管病患者亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因多態性與血清同型半胱氨酸(HCY)、葉酸的關系。方法分析286例患者的MTHFRC667T基因多態性，葉酸、維生素B12、HCY水平和大血小板比例。結果老年心腦血管病患者中MTHFR667基因野生型(C/C型)、雜合突變型(C/T型)、純合突變型(T/T型)頻率分別為28.7%，41.2%，30.1%，且男女間無差異；血清HCY與葉酸、維生素B12呈負相關(P<0.05)，T/T型、C/T型的葉酸明顯低于C/C型 (P<0.05)，而比較3型的HCY差異無統計學意義；T/T型的MCV、大血小板比例、FPG、TG、TC、LDL-C明顯高于C/T型與C/C型(P<0.05)。結論老年心腦血管患者的MTHFR基因多態性與血清HCY無關，但與葉酸、維生素B12、血糖血脂和大血小板比例有關。

心腦血管病；MTHFR基因多態性；葉酸；同型半胱氨酸

Abstract: [Objective]To investigate the relationship between serum folate, homocysteine(HCY) and methylenetetrahydrofolate reductase(MTHFR) genepolym-orphism in elderly patients with cardiovascular and cerebrovascular diseases. [Method]Examine MTHFR gene polymorphism, folate, vitaminB12, HCY and proportion of large platelet. [Result]The frequency of C/C type, C/T type and T/ T type was 28.7%, 41.2% and 30.1%; Homocysteine had negative correlations with vitamin B12 and folate(P<0.05), and folate was lower in C/T and T/T type(P<0.05), while homocysteine had no differences in three types. MCV, large platelet ratio, FPG, TC, TG and LDL-C in T/T type were higher than others(P<0.05). [Conclusion]MTHFR gene polymorphism in elderly patients with cardiovascular and cerebrovascular diseases showed no association with plasma homocysteine, but it was correlated with folate, vitamin B12, blood glucose, blood lipid and the proportion of large platelet.

Keywords: cardiovascular and cerebrovascular diseases; MTHFR gene polymorph- hism; folate; homocysteine

HCY升高和葉酸缺乏已被確定為心血管病的危險因素。亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)是體內葉酸代謝和同型半胱氨酸(HCY)甲基化的關鍵酶，MTHFR基因突變能提高HCY水平，也是心血管疾病的危險因素[1]。目前國內關于MTHFRC677T基因多態性與老年心腦血管病患者的報道較少，本文將探討老年心腦血管患者MTHFR基因多態性與血清葉酸、HCY的關系。

1 對象和方法

1.1 對象

選取2013年本院老年心腦血管病患者286例，年齡為(85.3±3.4)歲，男性167例，女性119例。

1.2 檢測指標及方法

1.2.1 MTHFR基因多態性檢測(基因芯片法) (1)基因組DNA提取。空腹靜脈血2ml于EDTA抗凝管中，用DNA提取純化試劑盒提取基因組DNA；(2)PCR擴增。向擴增液中加入Taq酶、基因組DNA，反應總體積為25μl，進行PCR擴增；(3)雜交、顯色。用BaiOMTHFR基因型檢測芯片試劑盒進行檢測；(4)檢測。圖像經Array Doctor軟件分析結果。以上所用基因芯片、試劑、儀器設備均由上海百傲科技有限公司提供。

1.2.2 血小板參數測定 抽空腹靜脈血2ml于EDTA抗凝管中，全自動血細胞分析儀Sysmex XE-2100進行檢測。

1.2.3 葉酸、維生素B12、HCY及生化指標測定 抽空腹靜脈血3ml，分離血清后，血糖、血脂、HCY在OLYPUS A5400生化分析儀上進行檢測，HCY采用酶比色法測定，葉酸和維生素B12用雅培i2000化學發光免疫分析儀測定。

1.3 統計學處理

統計分析用SPSS15.0軟件包完成。計數資料組間比較采用χ2檢驗，計量資料組間比較采用方差分析，直線相關分析比較相關性，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 MTHFR各基因型及等位基因頻率分布情況

MTHFRC667T基因 C/C型占28.7%，C/T型占41.2%，T/T型占30.1%。等位基因C和T的頻率為49.3%，50.7%，且各基因型和等位基因頻率在男女間差異無統計學意義。見表1。

表1 MTHFR各基因型頻率及等位基因頻率分布[例(%)]

2.2 不同MTHFR基因型中血清葉酸、維生素B12和HCY結果的比較

由表2可見，C/T型、T/T型的葉酸均明顯低于C/C型(P<0.05)；T/T型的維生素B12顯著低于C/T型(P<0.05)；而三型的HCY比較無統計學意義，但血清HCY與葉酸、維生素B12均具有呈負相關(P<0.05)。見表3。

表2 不同MTHFR基因型中葉酸、維生素B12、HCY比較

注：a: 與C/C比較,，P< 0.05；b: 與C /T 比較，P< 0.05

表3 血漿HCY與葉酸、維生素B12的相關性比較

2.3 血小板參數在不同MTHFR基因型中的變化

T/T型的血小板數量較C/C型、C/T型降低(P<0.05)，T/T型的MPV、大血小板比例與C/C型、C/T型相比則明顯增加(P<0.05)。見表4。

表4 不同MTHFR基因型的血小板相關指標結果的比較

注：a: 與C/C比較，P< 0. 05；b: 與C /T 比較，P< 0. 05

2.4 不同MTHFR基因型中血脂、血糖結果的比較

C/T型、T/T型的FPG，TG，TC，LDL-C較CC型有上升的趨勢，以TT型增加最為明顯(P<0.05)。見表5。

表5 不同MTHFR基因型的血糖血脂結果的比較

注：a: 與C/C比較，P< 0. 05；b: 與C /T 比較，P< 0. 05

4 討論

心腦血管病是我國死亡率最高的疾病，一般認為心腦血管疾病患者高HCY的形成除與葉酸、維生素B12缺乏相關，還與MTHFR基因C677T位點丙氨酸(C)突變為纈氨酸(T)導致酶活性改變有關。文獻報導，MTHFR677基因C/T型和T/T型在健康老年中為46.0%，20.6%[2]，健康青年中為34.68%，20.68 %[3]。我們的研究結果中，老年心腦血管患者的MTHFR677基因C/T型占41.2%，T/T型占30.1%，較文獻報道的健康人群略高。中華醫學會心血管分會主委霍勇教授在2013年第七屆錢江國際心血管病會議上宣布，納入2萬余人的中國人群中45% HCY>10μmol/L，MTHFR677 T/T基因型為25%，遠高于西方人群，這種基因型表現為高HCY、低葉酸，腦卒中的發生率更高。提示MTHFRC677T基因多態性與老年心腦血管病發病有一定的關系，純合突變型的患者易發生心腦血管疾病。

目前國內外關于MTHFRC677T基因多態性與高HCY間是否存在相關性存在分歧[4]。我們發現，老年心腦血管病患者的血漿HCY水平均高于本實驗室一般人群的參考范圍(10.00±5.10)，印證了HCY升高是心腦血管病發病的危險因素的觀點。但我們的結果顯示，老年心腦血管患者的HCY水平在3種基因型間沒有變化，這與張廣森[5]等的研究結果有所不同，血漿HCY的水平還可能受遺傳及環境等多種因素的多重影響。對不同MTHFR基因型的血清葉酸、維生素B12與HCY關系研究中，我們發現T/T型、C/T型的葉酸明顯低于C/C型，且HCY與葉酸、維生素B12負相關，以上研究結果提示，老年心腦血管病患者血漿HCY水平明顯升高，且與MTHFRC667T基因多態性沒有顯著性關聯，但MTHFRC667T基因突變時葉酸水平明顯下降，提示C/T型和T/T型的患者更應注重補充葉酸。

大血小板是由巨核細胞剛生成的血小板，聚集和粘附功能較強，其比例的增加會提高血栓形成的風險。國內外研究表明，血栓和中風患者的MTHFRC667T基因純合突變率增加[6]，本研究發現MPV、大血小板比例在MTHFR667基因T/T型中明顯高于C/C型和C/T型，提示MTHFRC667T基因純合突變能增加老年心腦血管病患者血栓形成和誘導腦卒中的風險，MTHFR C667T基因純合突變與大血小板比例增加的關系尚不清楚，二者是獨立因素的疊加還是因果關系尚需要進一步的研究。

高血糖和高血脂是心腦血管疾病的高危因素。本研究結果顯示，MTHFRC667T基因T/T型的FPG，TG，LDL-C明顯高于C/C和C/T組，說明MTHFRC667T基因純合突變患者患心腦血管疾病的風險更高。國內外文獻也報導MTHFRC667T基因純合突變與糖尿病、高脂血癥和冠狀動脈硬化癥的發生相關[7]。然而MTHFRC667T基因純合突變與高血糖、高血脂因果關系尚需研究。

綜上所述，老年心腦血管患者的血清HCY水平與MTHFRC667T基因多態性沒有關聯，但MTHFRC667T基因純合突變和雜合突變型的葉酸水平明顯低于野生型，更應注重補充葉酸。MTHFRC667T基因純合突變血糖、血脂和大血小板比例明顯高于雜合突變型和野生型，因此，更應注重血糖和血指的控制以及抗血小板的治療。

[1]Ansari R, Mahta A, Mallack E, et al. Hyperhomocysteinemia and neurologic disorders: a review[J]. J Clin Neurol, 2014, 10(4):281-288.

[2]曹正余. 亞甲基四氫葉酸還原酶C677T基因多態性與老年H 型高血壓并急性心肌梗死的關系[J]. 中國老年學雜志, 2012, 12(32):5118-5120.

[3]方樂, 王田蔚, 邵延坤, 等. 青年缺血性腦卒中與MTHFRC677T、CBS844ins- 68基因多態性的關系[J]. 吉林大學學報, 2007, 33(2):310-313.

[4]Kim CH, Hwang KY, Choi TM, Shin WY, Hong SY. The methylenetetrahydrofo- late reductase gene polymorphism in Koreans with coronary artery disease [J]. Int J Cardiol. 2001, 78(1):13-17.

[5]張廣森, 戴崇文. 缺血性心腦血管病患者血漿同型半胱氨酸水平及其代謝相關酶基因多態性分析[J]. 中華血液學雜志, 2002, 23(3):126-129.

[6]Den Heijer M, Lewington S, Clarke R. Homocysteine, MTHFR and risk of veno- us thrombosis: a meta-analysis of published epidemiological studies[J]. J Thromb Haemost, 2005, 3(2):292-299.

[7]Liang R, Zhou Y, Xie J, et al. Association of C677T gene polymorphisms of methylenetetrahydrofolate reductase and plasma homocysteine level with hyperlipid- emia[J]. Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao, 2014, 34(8):1195-8.

Relationshipbetweenserumfolate,homocysteineandmethylenetetrahydrofolatereductasegenepolymorphisminelderlypatientswithcardiovascularandcerebrovasculardisease

CHENSufeng1, 2,ZHOUYonglie2@,ZHANGYanqing3,XIAJun2,CHENYongjian,SHANZhiming4,HUQingfeng2

(1. School of Medical Technology, Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310053,China; 2. Clinical Laboratory Center, Zhejiang Provincial People’s Hospital, Hangzhou 310014,China; 3. School of Laboratory Medicine and Life Science, Wenzhou Medical University, Zhejiang 325033,China; 4. Zhejiang Center for Clinical Laboratories, Hangzhou 310014,China)

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1672-0024(2015)01-0043-04

陳素峰(1989-)，女，浙江湖州人，碩士研究生，主管檢驗師。研究方向：生物化學與分子生物學檢驗

浙江省醫藥衛生科學研究基金項目(編號：2012KYB009)

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周永列 lab_zyl@126.com