探討中西藥合用對帕金森病大鼠神經細胞凋亡的影響

郭欣桐

(河北大學臨床醫學院 河北 保定 071000)

帕金森病屬于中老年人群的常見神經系統變性疾病，主要的發病人群在60歲以上。臨床上中西藥聯合應用在帕金森病臨床中得到了廣泛的應用［1］。本組試驗對中西藥合用對帕金森病大鼠神經細胞凋亡的影響進行探討，具體報告內容如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選擇90只成年健康SD大鼠，雌雄不限，將成年的90只健康SD大鼠隨機分為3組，即模型組、中西藥治療組、正常對照組。每組有30只健康SD大鼠。體重在130－200克之間，平均體重為(183.25±1.38)克，主要由上海中醫藥大學實驗動物中心提供。將大鼠飼養環境的溫度控制在20攝氏度左右，濕度控制在50%左右，需要光照12小時交替，大鼠可以自由進食和飲水。

1.2 方法

藥品和試劑:中藥包括湯藥和膠囊，湯藥的主要成分有枸杞子、熟地、桑寄生、僵蠶、莪術、白芍、丹參。并由專門醫院制劑室制備。膠囊主要選擇蝎蜈膠囊。按照比例將蝎蜈膠囊混合于中藥里，將濃度控制為3.005 g/ml。備用藥物有左旋多巴(國藥準字H11020244北京斯利安藥業有限公司)、鹽酸氯胺酮(國藥準字H23020559齊齊哈爾第二制藥有限公司)、6－羥基多巴胺、二氨基聯苯胺。儀器主要包括大鼠腦立體定位儀、光學顯微鏡、振動切片機、微量進樣器。

術前腹腔注射氯胺酮，將大鼠固定在腦立體定位儀上。在無菌的情況下，將大鼠顱頂皮膚正中線切開，將前囟暴露出來。確定右側黑質2個坐標后，采用顱骨鉆于手術鉆開顱骨，注入5 ul的6－羥基多巴胺于右側黑質部。手術完成后，縫合皮膚，肌肉注射慶大霉素，通過注射阿樸嗎啡，觀察大鼠的旋轉情況。

分組干預:對于模型組，主要灌胃2 ml的生理鹽水，中西藥治療組主要服用2 ml的中西藥混懸液，每天服用1次，共服用一個月。

電鏡檢查:切取黑質的1mm2，使用戊二醛、鋨酸進行雙重固定，同時完成乙醇脫水，環氧樹脂的包埋、切片、鉛染后，在透射的電鏡下對其進行觀察。

1.3 統計學處理

本次研究中，選擇統計學軟件SPSS15.0完成臨床數據分析，其中計數資料以n/%形式表示，采用卡方(X2)對檢驗，計量資料以()形式表格，采用(t)檢驗，如P＜0.05，則表示差異有統計學意義。

2.結果

2.1 凋亡檢測

通過對神經細胞凋亡的數量進行研究，結果顯示模型組神經細胞凋亡數量多于正常對照組，與模型組對比，中西藥聯合實驗組相對較少，并單個分布。

表1 黑質細胞凋亡的數量對比()

表1 黑質細胞凋亡的數量對比()

2.2 神經細胞電鏡觀察

模型組:細胞存在明顯的皺縮現象，細胞體積明顯減小，核膜部分出現不完整現象。中西醫治療組:細胞膜稍微有皺縮情況，胞漿減小，同時電子的密度稍微有增高的現象，核膜完整。正常對照組:細胞體積正常、電子密度沒有變化，核膜完整。

3.討論

帕金森病主要病理的過程是腦黑質致密帶多巴胺能神經元的不斷缺失和變性的變化過程。帕金森病主要的特征是黑質紋狀體神經元受到損害。在通常情況下，黑質部位的氧化與抗氧化之間處于平衡狀況，隨著年齡的不斷增加，同時在很多外在因素的影響下，可形成大量的氧自由基，在這樣的情況下，將促進多巴胺能神經元變性，并逐漸死亡，通常這種死亡的方式被稱為細胞凋亡。大量研究顯示黑質是多巴胺能神經元凋亡的機制之一，在當前細胞凋亡的檢測過程中存在很多檢測方法，如電泳、原位末端標記法、電鏡等，目前區別凋亡與壞死可靠的方法是透射電鏡［2－3］。

在本組實驗組中，將健康SD大鼠進行分組，并對細胞凋亡的形態進行分析，中西藥治療組中，同樣可以檢測到凋亡細胞，將其凋亡細胞數量與模型組對比，差異具有統計學意義(P＜0.05)，同時期為單個散落分布。因此可推測，中西藥聯合使用在抗神經細胞凋亡方面發揮著重要的作用，同時期與抗氧化應激反應存在著密切的聯系［4－5］。

［1］方永奇，匡忠生，謝宇輝，等.石菖蒲對缺血再灌注腦損傷大鼠神經細胞凋亡的影響［J］.現代中西醫結合雜志，2012，28(17):1647－1649.

［2］丁宏娟，何建成.滌痰湯對帕金森病大鼠神經細胞凋亡及相關基因表達的影響［J］.遼寧中醫雜志，2010，38(04):740－742.

［3］何建成，袁燦興，衛洪昌，等.中西藥合用對帕金森病大鼠旋轉行為的影響［J］.中西醫結合學報，2013，26(04):293－295.

［4］何建成，袁燦興，衛洪昌，等.美多芭對帕金森病大鼠細胞凋亡的影響［J］.中華老年醫學雜志，2014，11(07):52－54.

［5］何建成，衛洪昌，呂嶸，等.中西藥合用對帕金森病大鼠細胞調亡、酪氨酸羥化酶及其基因表達的影響［A］.中國中西醫結合學會.第三屆世界中西醫結合大會論文摘要集［C］.中國中西醫結合學會，2012:2－7.